基于乙酰胆碱酯酶和氧化应激研究海胆酮对阿尔茨海默症的作用机制

海胆酮是一种酮式类胡萝卜素，主要从海胆及藻类等海洋生物中提取。本文研究海胆酮对乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AChE）的抑制作用，应用酶动力学、荧光光谱、圆二色光谱和分子对接技术研究海胆酮对AChE的抑制机理，并用淀粉样β蛋白片段25～35（amyloid beta-peptide 25-35，Aβ25-35）诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）建立阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease，AD）模型，研究海胆酮对AD细胞模型氧化应激损伤的作用。结果表明，海胆酮有很强的AChE抑制活性，其半抑制质量浓度为（16.29±0.97）μg/mL，抑制常数Ki为3.82 μg/mL，表现为竞争性抑制；海胆酮可诱导AChE二级结构改变，更容易与AChE活性中心氨基酸Ser200、His440、Trp84和Tyr121结合，阻碍底物碘代硫代乙酰胆碱（acetylthiocholine iodide，ATCI）与酶结合，从而引起酶活力降低。海胆酮能有效抑制Aβ25-35诱导PC12细胞的AChE活力，降低丙二醛含量，增加超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力，减轻Aβ25-35诱导的PC12细胞氧化应激损伤。本研究基于AChE和氧化应激阐明了海胆酮对AD的潜在作用机制，为海胆酮在功能食品、生物医药等领域的应用提供了数据支持和理论根据。     

超滤膜分离鲍鱼内脏酶解物及其体外抗氧化活性的研究

利用超滤膜对鲍鱼内脏酶解物进行分离,考察了各分子量段酶解物的成分组成和抗氧化活性。利用截留分子量为10000 u、3000 u、500 u的超滤膜分离得到FA、FB、FC和FD等四个组分中,FA组分的总糖和蛋白含量分别为34.06%和17.20%,而FB、FC和FD等组分主要是由蛋白组成,其游离氨基酸含量分别高达23.20、25.4、28.68 g/100g。根据Tricine-SDS-PAGE和β-消除反应的分析结果,表明FA中位于间隔胶的高分子组分(HMWF)含有N-糖苷键结合的糖蛋白,而分子量为25 ku的成分主要是蛋白。凝胶渗透色谱数据表明FB、FC和FD的分子量主要分布在300 u左右。另一方面,体外抗氧化结果表明,在低浓度下FA组分具有较强的DPPH自由基清除活性和还原力;当质量浓度高于5 mg/m L时,各超滤组分的DPPH自由基清除活性无明显差异,但FB、FC和FD组分的还原力明显高于FA组分;不管是低浓度还是高浓度,FB、FC和FD组分的羟自由基清除活性都明显高于FA组分。     

鲍内脏酶解工艺条件的优化

目的建立鲍内脏酶解工艺条件,为鲍内脏多糖、多肽的工业化生产提供参考。方法以多糖提取率和蛋白质水解度为指标,研究p H值、提取温度、料液比、加酶量和酶解时间等因素对鲍内脏酶解效果的影响,运用响应面设计优化酶解工艺参数。结果选用木瓜蛋白酶与胰蛋白酶对鲍内脏进行复合酶解,适宜的酶解条件为p H 8.0、酶解温度40℃、料液比1:40,加酶量3000 U/g,在此条件下,比较不同酶解时间对酶解产物的影响,发现多糖提取率在酶解6 h时达到最大,为16.58%,而酶解液的水溶性蛋白含量、蛋白质水解度和对DPPH清除率均随酶解时间的延长而增加。结论木瓜蛋白酶与胰蛋白酶复合酶解鲍内脏效果良好,能够获得较高的多糖提取率,酶解液具有良好的清除DPPH活性。     

基于体外HUVECs细胞模型的条斑紫菜多糖促血管生成活性

从条斑紫菜中提取条斑紫菜多糖,对其总糖质量分数、蛋白质量分数、3,6-内醚半乳糖质量分数、硫酸基质量分数、分子质量和单糖组成进行分析,并基于人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）的体外血管生成模型,研究条斑紫菜多糖对HUVECs的血管生成活性以及作用机制。采用噻唑蓝法测定条斑紫菜多糖对HUVECs细胞活力的影响,黏附实验和细胞划痕实验测定其细胞黏附和细胞迁移能力,体外血管形成实验检测HUVECs的管腔形成数目,Western Blotting检测经多糖处理的HUVECs中E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白的表达水平,并通过丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPKs）特异性抑制剂和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）受体酪氨酸激酶抑制剂探究其细胞迁移的作用机制。结果表明,条斑紫菜多糖的总糖质量分数为（77.48±2.62）%,蛋白质量分数为（3.24±0.58）%,3,6-内醚半乳糖质量分数为（20.30±1...     

水产品中鱼药残留检测研究进展

孔雀石绿和结晶紫、氯霉素、硝基呋喃类药物曾被广泛用于抑制微生物生长、预防或治疗细菌性疾病。在养殖过程中,仍存在非法使用鱼药的现象。为了防止受污染的产品在食物链中流通,事先实施分析是一项重要的水产品安全保护措施。本文综述了水产品中孔雀石绿和结晶紫、氯霉素、硝基呋喃类药物及其代谢物残留的检测方法,介绍了色谱法、表面增强拉曼光谱、免疫分析法及电化学传感器在该领域的应用,对前处理和验证结果进行了归纳,并讨论了每种方法的优缺点,旨在为监测残留物提供新的思路。具体而言,基于大型仪器的方法检测限低,但固有的缺陷限制了其发展。随着新型纳米材料的发展,表面增强拉曼光谱、免疫分析法、电化学传感器必将成为评估水产品中鱼药残留的有效工具。     

乳酸菌发酵对茶花粉营养成分及生物活性的影响

为研究茶花粉乳酸菌发酵前后基本营养成分以及生物活性的影响。以茶花粉为原料在嗜热链球菌和植物乳杆菌的共同作用下进行发酵处理后分析测定发酵前后基本营养成分,α-葡萄糖苷酶抑制活性以及清除羟自由基能力的变化。结果表明,乳酸菌发酵茶花粉发酵终点为72 h,发酵茶花粉与未发酵茶花粉相比,还原糖、脂肪含量有所降低,灰分、蛋白质、多酚、黄酮含量分别有不同程度的提高,对α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度(IC₅₀)由49.09 mg/mL降低到38.79 mg/mL,并且清除羟自由基能力的半抑制浓度(EC₅₀)由4.49 mg/mL提高到5.78 mg/mL。该研究为茶花粉乳酸菌发酵产物的开发利用提供了实验参考。     

琼脂复配开发酸奶稳定剂的研究

利用琼脂产品与辅助稳定剂复配开发酸奶稳定剂,优化酸奶稳定剂配方。测定了琼脂产品在酸奶中的粘度与持水性,并以持水性为指标,对该琼脂样品与变性淀粉和果胶进行复配,通过均匀混料实验进行优化。结果表明:1号琼脂的性能指标优于6号和8号琼脂,1号琼脂和改性淀粉的最佳比例为78:22,稳定剂添加总量为0.1%的配比下,酸奶的持水性为53.6%,粘度为2920 MPa·s,酸度为87.9 °T,感官指标符合酸乳制品行业规范。     

一种Kappa-卡拉胶酶的克隆、表达及其酶学性质研究

将来源于Pseudoalteromonas carrageenovora ASY5菌株的κ-卡拉胶酶基因克隆到载体p ET-28a上,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达。克隆得到的κ-卡拉胶酶基因序列全长1194 bp,编码一个由398个氨基酸残基组成的蛋白酶,该蛋白酶的分子量为48 ku,结构域分析表明该κ-卡拉酶符合GH16家族的特点。对重组κ-卡拉胶酶的酶学性质进行考察:重组κ-卡拉胶酶只能够专一性的降解κ-卡拉胶;该酶的最适温度和pH分别是55℃和pH 9.0,重组酶在40℃保温1 h可保持95.0%的活性,在45℃保温1 h残余酶活与对照比较仍保留60.0%,在pH 8.0~10.0的缓冲液中处理30 min,仍能保持80%以上的酶活力,低浓度的Na+和K+以及1mmol/L的Sn~(2+)、Fe3+、EDTA、DTT、Tween-20、Tween-80和Triton X-100、β-mercaptoethanol、SDS、Urea对重组酶活具有显著的促进作用;而高浓度的Na+和K+以及1 mmol/L的Cd~(2+)、Ba~(2+)、Mg~(2+)、Fe~(2+)、Ca~(2+)对重组酶活性有不同程度的抑制作用。     

真空冷冻干燥对速溶乌龙茶粉香味特征的影响

为研究真空冷冻干燥对速溶茶粉香味特征及挥发性成分的影响,采用顶空固相微萃取技术(HS-SPME)结合气相色谱-质谱联用仪(GC-MS),分析乌龙茶浓缩液及其真空冷冻干燥粉的挥发性成分。GC-MS分析结果显示,共鉴定出74种成分,其中浓缩液的主要成分为吲哚、2-乙基呋喃、p-伞花烃,而冻干粉的主要成分为吲哚、正己醛、芳樟醇。聚类分析发现,浓缩液经真空冷冻干燥后2-乙基呋喃等9种成分消失,而新增正己醛等23种挥发性成分。此外,2-庚酮和E-β-罗勒烯经真空冷冻干燥后含量降低,而E-橙花叔醇等7种成分的含量则升高。香气值(OAV)分析表明,浓缩液主要的香气成分是E-2-壬烯醛和(E,E)-2,4-癸二烯醛,冻干粉主要香气成分是1-辛烯-3-醇、芳樟醇和正己醛。该研究结果说明真空冷冻干燥对速溶乌龙茶粉浓缩液的挥发性成分和香味特征有一定影响,为速溶乌龙茶粉的生产提供理论参考。