长白山区人参锈腐病发生危害调查及杀菌剂田间药效试验

就长白山区人参锈腐病发生危害进行调查,并选用新型杀菌剂对人参锈腐病菌的毒力及田间防效进行了测试,以期为生产上安全高效防治该病提供理论依据。采用菌丝生长速率法测定11种杀菌剂对人参锈腐病菌的毒力,并进行田间防效试验。室内毒力测定结果表明10%世高水分散粒剂、18.7%凯特水分散粒剂和60%百泰水分散粒剂对人参锈腐病菌毒力最强,其EC50值分别为1.19、20.56、27.77 mg/L。田间试验结果表明10%世高WG、18.7%凯特水分散粒剂和60%百泰水分散粒剂对人参锈腐病防效达50%以上。人参锈腐病发病盛期为6月上旬至7月下旬,10%世高水分散粒剂、18.7%凯特水分散粒剂和60%百泰水分散粒剂是目前防治人参锈腐病的有效药剂。     

采后果实链格孢属真菌病害防治方法研究进展

链格孢属真菌(Alternaria spp.)可引起多种果实采后发生病害,每年造成的损失异常严重,因此防治由链格孢属真菌引起的采后果实病害显得尤为迫切。文章将着重介绍国内外研究中采后果实链格孢属真菌病害的防治方法,包括采前防治,采后物理、化学和生物方法及联合防治等,并提出在未来的发展中应该使用新的、有效的组合方式来提高防治效果,增强果实抵抗链格孢属真菌的能力,延长果实采后贮藏期,提升其商品价值。     

米黑根毛霉脂肪酶基因的酵母重组表达和Kex2位点改造

米黑根毛霉脂肪酶(RML)具有较高的合成活性、热稳定性、溶剂耐受性以及sn-1,3位置专一性等一系列适合工业化推广的特点。本研究通过密码子优化改造RML编码基因,并将其克隆、转化到毕赤酵母GS115菌株,经诱导发酵156 h,酶活达到3.77 U/mL。为了进一步改善RML脂肪酶的重组表达,通过定点突变的方式去掉潜在的Kex2酶切位点,结果显示:RML突变体表达量均显著低于野生型的RML脂肪酶,表明"-Arg196-Arg197-"序列并不影响RML的重组表达。通过对RML蛋白结构分析,Kex2酶切位点的肽键被包埋在蛋白内部,这表明该位点区域的折叠在进入分泌途径时已基本完成。本研究对异源蛋白的酵母重组表达具有一定参考价值。     

玉米皮纤维发酵培养裂褶菌的转录组分析和重组α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶的异源表达

玉米皮是玉米淀粉加工的副产物,玉米皮纤维降解酶的开发对提高玉米皮的利用价值有重要意义。通过测定玉米皮纤维为唯一碳源发酵培养裂褶菌的转录组,共获得23 656个Unigene,平均GC含量为0. 589 7。序列分析显示共有5个木聚糖酶基因,分别属于糖苷水解酶第10家族和第11家族;有6个α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶基因,分别属于糖苷水解酶第43、51和62家族。克隆了糖苷水解酶62家族蛋白基因Sabf32,该蛋白编码序列全长975 bp,N端有21个氨基酸的信号肽序列;完成了Sabf32在毕赤酵母中的表达,并验证了Sabf32的α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶催化活性,其最适温度为40℃,最适pH为4. 0,在pH 3. 5～5. 5和40℃下较稳定; Sabf32比酶活力为16. 18 U/mg,K_m和V_(max)分别为(3. 98±0. 32) mmol/L和(2. 59±0. 09)μmol/(min·mg)。     

深黄被孢霉高产菌株差异表达未知基因UG1 RNAi表达质粒的构建

目的构建深黄被孢霉高产菌株差异表达未知基因UG1 RNAi表达质粒。方法以红色荧光蛋白DsReD作为报告基因,构建DsReD RNAi表达质粒pREDi;制备原生质体,通过PEG/CaCl2原生质体转化法将质粒pREDi转化至稳定表达DsReD基因的深黄被孢霉高产菌株中进行表达;在此基础上构建深黄被孢霉高产菌株差异表达未知基因UG1 RNAi表达质粒pUG1i,并对转染了质粒pREDi、pUG1i的受体菌进行Northern blot分析。结果质粒pREDi和pUG1i经酶切和测序鉴定表明构建正确;转化了表达质粒pREDi的菌株呈无色;转染质粒pUG1i的受体菌UG1和DsReD在基因表达水平上受到了抑制。结论成功构建了深黄被孢霉高产菌株差异表达未知基因UG1 RNAi表达质粒,为下一步通过RNAi共沉默DsReD和目的基因,以及进一步深入研究深黄被孢霉未知基因UG1对菌株合成ARA是否有影响和基因功能的分析奠定了基础。     

南阳同凯万吨酵母项目投产

酵母是与人类健康生活最密切的一种微生物，广泛应用于烘焙食品、发酵面食、酿酒及酒精工业、食品调味、医药及营养保健等领域。南阳同凯公司的万吨级酵母项目是利用该公司自行筛选的酵母菌株，以废糖蜜为主要原料，采用多项集成技术，解决了传统细胞培养过程中能耗大、培养基损失以及废水排量大的问题。采用连续发酵技术，提高了生产效率，产品质量与成本明显优于国内外同类产品。     

一种准确测定灵孢多糖含量的方法

目的：建立准确测定灵孢多糖含量的方法。方法：采用蒽酮硫酸法，紫外分光光度计在620nm检测吸收度，以测得的吸收度与其对应的浓度计算回归方程，回归曲线的相关系数不得低于0.99。对此方法改进，摸索出影响含量结果不稳定的因素，准确测定含量。结果：重复性，精密度均符合规定。结论：本方法可用于准确测定灵孢多糖的含量。     

乙醇发酵系统联动杀菌工艺卫生管理的研究

在工艺卫生等方面管理和生产管控上,酒精发酵在发酵行业内,相对于药品发酵等行业比较粗放。生产过程中会造成染菌现象,对生产造成不利的影响。杂菌的污染对发酵的危害有:直接消耗可发酵性糖类;杂菌生命活动的产物对酵母生命活动和淀粉酶系的抑制造成了原料淀粉出酒率的下降。为了控制发酵系统杂菌感染,乙醇厂摸索和制定了一套系统联动杀菌工艺卫生管理的程序。加强生产中设备的冲洗与杀菌保持良好的工艺卫生条件,降低好氧菌污染风险。     

酵母源金属硫蛋白体外清除自由基及抑菌活性的研究

目的:比较两种异构体形式酵母源金属硫蛋白与动物源金属硫蛋白体外清除自由基及抑菌活性。方法:以VC为对照,分光光度法测定金属硫蛋白对自由基清除率,以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和李斯特氏菌为指示菌,研究金属硫蛋白对致病菌的抑制作用。结果:金属硫蛋白对羟基自由基及DPPH自由基清除能力明显强于VC,但对超氧阴离子自由基的清除效果却低于VC,金属硫蛋白对金黄色葡萄球菌、李斯特氏菌具有一定的抑制作用。金属硫蛋白清除自由基关系为Zn-MT>MT-Ⅰ>MT-Ⅱ。结论:金属硫蛋白具有较强的清除自由基能力,对部分致病菌具有一定的抑制作用,作用效果因金属硫蛋白来源、纯度及构型而不同。     

棘孢木霉几丁质酶tachi2基因的原核表达及酶学性质研究

目的:实现棘孢木霉(Trichoderma asperellum)几丁质酶基因tachi2的原核高效表达,研究几丁质酶Tachi2的酶学性质。方法:利用PCR技术扩增得到几丁质酶基因tachi2,将其克隆到原核表达载体pEHISTEV中,测序后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后进行Tachi2蛋白的纯化和复性。用纯化的目的蛋白Tachi2进行几丁质酶酶学性质的研究。结果:tachi2基因在重组大肠杆菌中正确表达,其主要以包涵体形式存在;重组蛋白Tachi2分子量约为44kDa,经过纯化和复性后得到的Tachi2有较高的几丁质酶活性。该酶的最适温度为40℃,最适pH值为7.0,几丁质酶在40℃以下比较稳定、pH 6～9时酶有较高活性,受Cu2+和Zn2+的强烈抑制。结论:成功实现了棘孢木霉几丁质酶基因tachi2的原核高效表达,表达纯化了重组蛋白,明确了几丁质酶Tachi2的酶学性质,为该几丁质酶的进一步开发利用和深入研究奠定了基础。