幽门螺杆菌过氧化氢酶基因克隆及表达

目的 克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)过氧化氢酶(katA)基因并在大肠杆菌中进行表达。方法 采用PCR扩增幽门螺杆菌katA全长基因,将其克隆入pET-11c载体中,经测序证实后,在大肠杆菌中进行表达,产物用Western blot检测其抗原性并进行N末端氨基酸的测序。结果 幽门螺杆菌katA基因全长1 518bp,编码氨基酸505个。在BL21(DE3)中的表达量约占细菌总蛋白的24.9％,表达产物经SDS-PAGE显示其相对分子质量与软件预测结果 58 000相符,N末端5个氨基酸测序结果与Hp中天然的katA完全一致,经Western blot检测可被 Hp全菌抗血清识别。结论 katA能在大肠杆菌中进行高效表达,具有良好的免疫反应性,可望为研究 Hp的致病机理、实验诊断及亚单位疫苗等提供充足的katA原材料。     

从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位

目的 建立一种有效的方法，从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位（rUreB）。方法重组大肠杆菌发酵后，表达的rUreB包涵体经洗涤、变性、复性，采用Q Sepharose Performance阴离子交换层析和Pheny1 Sepharose High Performance疏水层析分离纯化。使用 SDS－PAGE和HPLC检测纯度，选用 ELISA和 Western－bloning对纯化蛋白的生物学活性进行鉴定。结果 rUreB包涵体经洗涤和溶解后，rUreB的纯度＞70％。包涵体溶解液经阴离子交换层析和疏水层析后纯度超过95％。rUreB纯品具有良好的生物学活性。结论 建立了从包涵体中获得高纯度的rUreB的工艺，为进一步的研究打下了基础。     

“绿色”溶剂离子液的研究进展

近年来，离子液由于其独特的优点, 在生物催化及化学合成领域越来越受到青睐。由于缺乏蒸气压，离子液作为绿色溶剂有很大潜能。此外，离子液不像极性有机溶剂那样会使酶失活，因而简化了类似含有糖类这样极性底物的反应。在离子液中，生物催化反应表现出较高的选择性、较快的反应速率和较高的酶稳定性。但这些溶剂还存在着离子液的纯化、控制水活性和pH、高粘度以及产品分离等问题。     

煤直接液化催化剂研究进展

综述了煤直接液化中催化剂的研究,开发,催化机理等方面的进展,重点介绍了超微高分散性催化剂,微生物酶催化剂以及煤—废弃塑料共催化液化催化剂的研究进展情况,并指出了当前新型高效催化剂的开发动向。     

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位特异性抗体检测方法的建立与评价

目的建立并评价幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)特异性抗体的检测方法。方法应用纯化的重组HpUreB作为包被抗原,建立检测HpUreB特异性抗体的ELISA间接法。以Hp抗体Western blot检测作为“金标准”,评价所建立方法的真实性和可靠性。结果检测血清特异性IgG的灵敏度为100·0%,特异度为97·7%,阳性预测值为97·2%,阴性预测值为100·0%,约登指数为0·977,符合率为98·7%,试验的一致率为98·5%;检测血清中总的特异性Ig灵敏度为97·1%,特异度为95·3%,阳性预测值为94·4%,阴性预测值为97·6%,约登指数为0·925,符合率为96·2%,试验的一致率为97·8%;检测唾液中特异性sIgA的灵敏度为96·2%,特异度为94·5%,阳性预测值为89·3%,阴性预测值为98·1%,约登指数为0·907,符合率为95·1%,试验的一致率为97·5%;检测粪便标本中的特异性sIgA的灵敏度为92·0%,特异度为90·2%,阳性预测值为85·2%,阴性预测值为94·9%,约登指数为0·822,符合率为90·9%,试验的一致率为98·6%,CV值均小于15%。结论该检测方法真实性、可靠性、重复性良好,能满足临床标本检测的要求。     

凝胶过滤色谱法研究酶解过程中木聚糖分子结构的变化

采用凝胶过滤色谱法研究了木聚糖在酶解过程中分子量分布的变化。结果表明,木聚糖酶对高分子量组分的木聚糖的降解能力较差,而主要降解分子量介于15000～3000之间组分的木聚糖,使得这部分木聚糖变为分子量更低的木聚糖组分。随着酶解时间的延长,酶解得率上升,酶解产物中低聚木糖含量增多,未被酶解的木聚糖的平均聚合度上升,当酶解时间超过4h时,这种变化趋势缓慢。随着酶解轮次的增加,酶解产物中可溶性木聚糖的含量越来越少,木聚糖被降解的难度越来越大。在实际生产中,用来作为低聚木糖生产的木聚糖其聚合度应在20～100之间,酶解时间以4h为宜,重复利用未水解木聚糖的轮次以2轮为宜。     

光温条件对新疆雪莲愈伤组织反应器培养后再分化能力的影响

研究了光质、光周期、昼夜温差和低温处理时间对反应器大规模培养后的新疆雪莲愈伤组织再分化能力的影响. 实验结果表明，长波长光更有利于愈伤组织的再分化. 光照时间显著影响愈伤组织的再分化能力，光照时间为16 h/d时愈伤组织的分化频率和平均出芽数达到最大，分别为76.7%和1.8个/块. 昼夜温差与愈伤组织的再分化能力呈显著负相关. 与水母雪莲不同，低温处理并不利于新疆雪莲愈伤组织的再分化. 新疆雪莲愈伤组织的再分化能力与同工酶的种类和活性密切相关.     

影响酶洗涤效果因素的探讨

介绍了加酶洗涤剂的发展以及酶在洗涤剂中的应用。探讨了加酶洗涤剂中表面活性剂及其浓度、洗涤温度和洗涤时间对洗涤效果的影响，pH值对酶活性的影响。对影响酶洗涤效果的各种因素进行了阐述。并论述了酶在洗涤剂中的其他应用。     

生物技术将成为医药工业创新的主要推动力

生物技术是以生命科学为基础，应用自然科学方法和工程学原理，通过酶催化的生物作用提供产品和为社会服务的技术。随着社会发展和科学技术的进步，生物技术将带来医药、食品、化学工业等领域的革命，产生难以估量的社会效益和经济效益。生物技术生产化学品的核心是用酶取代催化剂，将传统的化学催化变为温和的、低污染的生物处理。与传统方法和过程相比，生物过程是条件缓和，能耗低，产生废物少，生物催化剂可重复使用，使环境友好的低费用、低投资工艺。生物工程研究开发和应用中最活跃、进展最快的领域当属生物制药，生物技术是医药工业创新的主要推动力，对化学工业特别是医药行业将产生重大影响。