海刺参组织蛋白酶L基因的克隆、重组表达及活性鉴定

通过RT-PCR和RACE PCR技术,从海刺参(Stichopus japonicus)肠中克隆得到编码组织蛋白酶L(SjCL)基因,其中全长cDNA 1 287 bp,5′非编码区(UTR)202 bp,3′UTR 87 bp,开放阅读框(ORF)999 bp,编码332个氨基酸(aa),包括组织蛋白酶L成熟肽316 aa和信号肽16 aa,分子质量预测为35.3 ku。用SjCL序列与相似物种海胆、海葵等进行对比,可知SjCL具有组织蛋白酶L所特有的氨基酸保守区域ERFNIN和GNFD,以及由Cys 139,His 278和Asn 299残基组成的保守活性位点。将编码SjCL基因克隆进原核表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-SjCL,转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞,再进行诱导表达、亲和纯化和透析复性,得到了纯化且具有活性的重组SjCL。酶活力检测结果表明,重组SjCL对组织蛋白酶L特异性底物Z-Phe-Arg-Nmec具有较高活性,而对组织蛋白酶B特异性底物Z-Arg-Arg-Nmec无活性。本实验对SjCL的cDNA序列进行了生物信息学分析并通过基因工程...     

T载体研究进展

T载体是直接克隆或表达PCR产物的新型载体,重组过程无需酶切和纯化,简便高效.在总结国内外研究的基础上,概述了构建T载体的方法,其中内切酶法是T载体制备方法中最先进的方式.阐述了T载体在抗体库构建、目的基因克隆、某些蛋白的融合表达方面的应用以及目前T载体的商业化.对表达型T载体与克隆型T载体进行了比较,其中表达型T载体可以同时满足基因克隆和表达的需要,还具有其他独特的优势.介绍了表达型T载体的构建难点,探讨了今后T载体的研究发展方向.     

HIV-1蛋白酶在大肠杆菌中的表达

分泌融合表达HIV-1蛋白酶(Protease,PR),用于对HIV蛋白酶抑制剂的筛选.利用重叠延伸PCR方法,获得使用大肠杆菌偏爱密码子的编码HIV-1蛋白酶(PR)的基因,将目的基因重组至原核表达载体pET-SP-DsbA-T,得到"pET-SP-DsbA-PRsite-PR"分泌融合表达型载体,重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3).工程菌在LB培养基中添加终浓度为0.1 mM的IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析周质蛋白.DNA测序结果证实合成的HIV-1 PR基因与设计的序列完全一致,在周质空间表达出具有自切割活性的HIV-1 PR蛋白.研究成功合成并克隆了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1 PR的DNA编码序列,经表达鉴定得到具有自切割活性的HIV-1 PR蛋白.     

商务英语交流中负面信息的表达策略

负面信息的表达一直是商务交流中很棘手的一个问题,能否在不同的商务环境中合理运用,对商务活动的成败至关重要。通过对商务交流中英语负面信息表达的特点进行分析总结,归纳出交流中常遇到的表达问题,阐述了如何避免负面信息的表达造成的负面影响,从而在商务活动中扬长避短、进退自如。     

中国传统建筑形式的现代表达

借鉴传统建筑的形式是创作传统风格建筑最常见的方法,通过对现代国内此类典型建筑的分类分析,归纳设计师采用的创作手法,将其总结为借用、抽象、片段、隐喻四种常见方法,并以建筑实例分析论证。结论:继承传统的方式很多,从传统建筑形体入手是最直观和行之有效的手法。     

石油工程专业英语本科教学探讨

随着国家石油战略的需求,培养国际化的石油工程专业化人才显得格外重要。但石油工程专业英语作为学生了解国际石油技术的基础专业课并未受到各大高校足够重视。分析总结了目前石油工程专业英语教学过程中存在的问题,提出如何加强师生互动、提高学生听、说、读、写、译等综合能力的方法和手段,为学生今后在石油工程专业领域中谋求长远发展打下坚实的基础。     

科技论文的规范表达

<正>英文摘要的写作根据《EI》的要求,一篇较好的英文摘要应较好地回答以下4个方面的问题:1)What you want to do(目的);2)Howyou did it(方法);3)What results did you get and what conclusions can you draw(结果和结论);4)What is original in your paper(创新独到之处)。     

绿色木霉内切葡聚糖酶基因Ⅰ的克隆表达

为深入研究绿色木霉(Trichoderma viride)内切葡聚糖酶(EGⅠ)的特性与功能,利用Northern blot方法分析不同碳源条件下绿色木霉的egⅠ表达,采用RT-PCR方法从绿色木霉T4中克隆egⅠ基因的cD-NA序列,测序与生物信息学分析,并构建诱导型表达载体pYES2-egⅠ,转化酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)INVSc1和H158中表达.结果表明:绿色木霉在含有纤维素的液体培养基中生长,egⅠ高效表达,在秸秆中表达量最高.纤维二糖中表达量相对较低,在葡萄糖、果糖中没有表达.egⅠ基因编码框长度1 377bp,编码459个氨基酸.含有信号肽,为分泌蛋白,属于糖苷水解酶家族7,具有纤维素酶结合域(CBD)和催化域(CD).INVSc1转化子发酵培养48 h达到转录高峰期,60 h达到酶活高峰期,酶活为0.081 6 U/mL,酶活比H158转化子提高32.5%.     

《忽必烈汗》中的象征意义初探

利用弗洛伊德“释梦”的观点,结合英国诗人柯尔律治生活的时代背景和他本人的生平经历,分析其著名诗篇《忽必烈汗》中的象征意义,试图证明《忽必烈汗》是柯尔律治的潜意识愿望的表达。     

基于图形表达的基因序列模糊聚类应用研究

给出了一种新的非退化的基因图形三维表达方法,这一表达方法不仅避免了图形的重叠和交叉,同时还保留了序列的生物学特征.利用这种表达方法对H5N1病毒基因序列进行数字特征的提取,并引入基于多维PFS判别函数进行模糊聚类分析应用.在聚类分析过程中直接利用数字特征作为源数据,分析结果表明,利用该图形表达建立基因序列数字特征矩阵进行的聚类分析具有一定的合理性.