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目的利用毕赤酵母表达系统高效分泌表达人松弛素H2类似物(Human relaxin-2 analogue,HR2),并检测其生物活性。方法通过密码子优化合成HR2基因,构建重组表达质粒pPICZαA-HR2,转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析。表达产物经超滤和柱层析纯化后,切除人工C肽,检测其生物活性。结果经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pPICZαA-HR2构建正确;Tricine-SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白相对分子质量约6 500,表达量占菌体总蛋白的47.6%,为451μg/ml,且为分泌表达;Western blot分析显示,重组蛋白具有良好的反应原性;纯化的重组蛋白纯度达96%;经检测C肽切除的重组HR2对THP-1细胞具有刺激活性。结论成功在毕赤酵母GS115中高效分泌表达了重组松弛素H2类似物,并具有一定的生物活性。 相似文献
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本研究从酿酒废水中分离了一株化能自养硫氧化细菌LS2,通过16S rRNA基因和硫氧化功能酶基因sox B分析表明该菌株与Halothiobacillus亲缘关系最近,但Halothiobacillussp.LS2的基因组中存在完整的固氮酶基因簇nif,其关键编码基因nif H与Acidithiobacillus属中A. ferrooxidans和A. ferrivorans相似性最高,均高于80%。通过细胞水平的比较研究,菌株LS2在有氮和无氮条件下均可生长,在1 mM NH4+的条件下生长量最高可达1.98×107/m L,而无氮条件下生长量较有氮条件下少,最高可达1.37×107/m L;基于基因表达分析,菌株LS2的nif H表达量因氮源存在而下调,硫代硫酸盐浓度增加而上调,其中在5 mM S2O32-浓度下其表达量上调了约33倍。说明该菌的固氮作用与硫氧化反应息息相关。本研究获得了一株具有固氮能力的化能自养硫氧化细菌,所获得的结果可为含硫化物废水的治理提供一种新思路。 相似文献
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在我国现行体制下,实行工程量清单招投标,对承发包双方来说无疑都将面临风险。然而,由于建筑市场严重倾向买方市场的现状,使施工企业在承揽工程项目时存在很多来自各方面的风险。论述了工程量清单模式下施工企业所面临的主要风险及应采取的防范措施,并对施工企业如何使用工程量清单和尽快提高企业自身素质,适应这一新的招投标模式提出了建议。 相似文献
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针对目前BIM项目风险分配大多数是基于谈判地位对等的情形,结合建筑行业实际情况,分析BIM参与双方面临的主要风险类型,从参与双方谈判地位不对等的角度,基于轮流出价的讨价还价理论,对完全信息和不完全信息两种动态博弈情况进行分析,分别建立BIM项目中业主方和施工方的风险分配博弈模型,并用实际工程案例对此模型的可靠性进行验证,结果表明:业主方采取强势地位向施工方进行风险转移的份额是重要的风险分配参数,控制此参数能够有效地规避风险,并且针对不同的风险类型业主方转移的风险概率不同,此外信息在谈判中起到决定性的作用,应尽量不让对方知道自身底细。此方法为BIM项目的风险分配问题提供参考价值,具备一定的实际指导意义。 相似文献