uPAR抗体对口腔癌HB细胞增殖的影响

目的:检测uPAR抗体对口腔癌HB细胞增殖的影响,并探讨其作用机制.方法:MTT法检测不同浓度的uPAR抗体(20、50、100μg/ml)作用于口腔癌HB细胞,并检测不同作用时间(24、48和72 h)的细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞周期的变化;Annexin V-FITC/PI染色法检测对细胞凋亡的影响;酶联免疫吸附法检测uPAR抗体对HB细胞分泌VEGF-D的影响.结果:uPAR抗体能抑制HB细胞的增殖,并呈现浓度和时间依赖关系.uPAR抗体可使HB细胞周期停滞于G0/G1期,随着uPAR抗体作用浓度的增加,G0/G1期细胞比例逐渐增高.uPAR抗体可促进HB细胞凋亡并呈现一定的浓度依赖关系.uPAR抗体对HB细胞分泌VEGF-D有抑制作用,随着uPAR抗体浓度的增高,其VEGF-D分泌量也逐渐降低.结论:uPAR抗体可抑制HB细胞增殖,其可能机制是使细胞周期停滞于G0/G1期,促进细胞凋亡及减少VEGF-D的分泌.     

电离辐射对不同肿瘤细胞细胞周期进程的影响

实验测定了人肝癌细胞系SMMC-7721和hepG2、人卵巢癌细胞系HO-8910和人宫颈癌细胞系Hela受γ射线辐照后的细胞周期阻滞情况,分析了肿瘤细胞DNA损伤后的细胞周期延迟规律和检查点激活的差异。采用^60Coγ射线,剂量率0．30Gy／min,照射剂量3Gy。在照后不同时间收集细胞,用美国贝克曼库尔特公司的流式细胞仪(Coulter Epics XL^TM)测定细胞周期。实验结果如下：     

细胞因子组合对受照射脐带血AC133+细胞周期和早期凋亡的影响

采用免疫标记法,使用流式细胞仪测定受到2.5Gy 6 MV-X射线照射的脐带血AC133+细胞加细胞因子组合(IL-3+FL+SCF)在培养不同天数后的细胞周期及早期凋亡情况的变化.结果表明,新鲜分离的未受照的脐带血AC133+细胞在无细胞因子的短期液体培养体系中培养2天,99%的细胞处于G0/G1期;受照的脐带血AC133+细胞加细胞因子组合(IL-3+FL+SCF)培养不同天数后,脐带血AC133+细胞迅速进入增殖循环,在照后第3天,有近50%的细胞进入S期.脐带血AC133+细胞受照后不加细胞因子,培养48小时后,镜下观察到细胞全部死亡;加细胞因子组合(IL-3+FL+SCF)培养48小时后,有(38.0±6.8)%的受照的脐带血AC133+细胞被"救活",且随着培养时间的延长,被"救活"的AC133+细胞又出现了增殖.因此,可认为细胞因子组合(IL-3+FL+SCF)对受照的脐带血AC133+细胞具有保护作用.     

牡蛎活性肽体外诱导HeLa细胞凋亡及其作用机制

采用复合酶法水解制备牡蛎活性肽,并运用Sephadex G-25柱层析法对酶解液中的肽类进行分离纯化与鉴定;以磺基罗丹明B(SRB)比色法,台盼蓝计数法,Hochest/PI双荧光染色法和DNA Ladder等检测牡蛎活性肽诱导HeLa细胞凋亡的方式,并采用流式细胞术和实时定量PCR分析牡蛎抗活性肽诱导HeLa细胞凋亡的作用机制。经分离纯化得到牡蛎活性肽(bioactive peptide of oyster,BPO),并测得其分子质量为751D;BPO能有效抑制HeLa细胞增殖,并阻止HeLa细胞G1期向S期的转换,促使凋亡基因表达上调。BPO的作用机制与诱导凋亡基因表达上调和细胞周期阻滞有关。     

低剂量辐射诱导小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的适应性反应

应用流式细胞术观察７５ｍＧｙＸ射线诱导小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的适应性反应。结果表明，１．５或２．０Ｇｙ全身照射后，小鼠胸腺细胞凋亡小体（ＴＡＢ）百分数明显增加，Ｓ期ＴＡＢ百分数明显减少，而Ｇ０／Ｇ１和Ｇ２＋Ｍ期ＴＡＢ百分数明显增加；当１．５或２．０Ｇｙ（攻击剂量，Ｄ２）照射前６ｈ给予７５ｍＧｙ（诱导剂量，Ｄ１）照射时，明显减轻Ｄ２对胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的损伤作用。提示，低剂量辐射可诱导胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的适应性反应。     

细胞周期素E表达阈值的定量分析

背景与目的:细胞周期素(cyclins)表达阈值的分析是细胞周期运行机制研究的一个重要方面,但目前尚缺乏一种较为科学且统一的定量计算方法。本研究试图对细胞周期素E(cyclinE)的表达阈值进行标准化定量分析。方法:用cyclinE/DNA双参数流式细胞术对人类急性淋巴细胞性白血病细胞株(MOLT-4细胞)在不同的光电倍增管(Photomultipliertubes,PMT)电压下进行检测;另取MOLT-4细胞经咖啡因(caffeine)和放线酮(cycloheximide,CHX)分别处理后用同样方法在同一电压下进行检测;最后对MOLT-4细胞和另外一种人类急性淋巴细胞性白血病细胞株(JURKAT细胞)在同一电压下进行检测,分析以上3组实验所得的CyclinE/DNA二维等高图,用公式B2/A×C(A,B,C分别为cyclinE/DNA二维等高图上cyclinE荧光强度的最低值,阈值和最高值)定量计算cyclinE表达阈值。结果:用公式B2/A×C计算出MOLT-4细胞cyclinE的表达阈值在不同电压下保持恒定;经咖啡因处理后阈值下降,经放线酮处理后阈值不变;同时计算出JURKAT细胞cyclinE表达阈值比MOLT-4细胞明显要低。结论:公式B2/A×C适用于细胞cyclinE表达阈值的定量计算。     

Ki-67、P53和 CyclinD1在小肠间质瘤中的作用研究

目的：探讨 Ki-67、P53及细胞周期素1（CyclinD1）在小肠间质瘤（small intestinal stromal tumors,SIST）中的表达及意义。方法采用免疫组织化学 SP 法检测30例 SIST 标本中 Ki-67、P53和 CyclinD1的表达情况,并与10例正常小肠组织进行对照。结果1）Ki-67、P53和 CyclinD1在正常组织中均未表达,而在 SIST 的表达随肿瘤恶性程度的升高而升高,高危组与低危组比较、中危组与低危组比较差异有统计学意义（均 P ＜0．05）,而高危组与中危组比较差异无统计学意义（P ＞0．05）;Ki-67、P53和 CyclinD1蛋白表达在性别、年龄方面差异均无统计学意义（均 P ＞0．05）。2）Ki-67、P53和 CyclinD1在 SIST 的表达以中等强度为主。结论Ki-67、P53和 CyclinD1在 SIST的恶性程度判断、发生发展及诊断、预后中有一定指导意义。     

80MeV/u 12C6+离子辐照小鼠头部对脾脏细胞周期分布的影响

研究重离子辐照小鼠头部对脾脏细胞周期分布的影响，为重离子放射治疗癌症和太空防护提供基础数据。80MeV／u能量的^12C^6＋对BALB／c小鼠头部给以0、0．5、1、2、4、10Gy的照射，用流式细胞仪测脾脏细胞周期分布。重离子辐照后36h，小鼠脾脏细胞S期细胞随着辐照剂量的增加显著减少（p〈0．05）；0．5Gy组、4Gy组和10Gy组出现G0／G0期阻滞明显阻滞（p〈0．05），1Gy组和2Gy组无显著变化（p〉0．05）；0．5Gy组G2／M期细胞显著减少（p〈0．01），其它剂量组明显阻滞（p〈0．05）。重离子辐照小鼠头部对小鼠脾脏细胞周期分布有明显影响。     

碳离子辐射对人肝癌细胞SMMC-7721细胞周期和P53、MDM2及P21表达的影响

研究^12C^6＋离子辐照对体外培养人肝癌细胞SMMC-7721细胞周期和P53、MDM2及P21表达的影响。采用0、1．0、2．0、4．0、6．0Gy^12C^6＋离子束辐照细胞，用克隆形成法观察细胞存活情况；同时在辐照24h后用流式细胞仪检测细胞周期的变化，Western-blot检测细胞中P53、MDM2及P21蛋白表达情况。结果发现，重离子辐照后细胞存活率显著下降；1．0Gy、4．0Gy和6．0Gy照射组发生G0／G1期阻滞，而2．0Gy照射组出现G2／M期阻滞；Western-blot结果显示细胞辐照后MDM2的57kD蛋白表达水平无明显变化，而76kD蛋白表达水平随辐照剂量逐渐上升；P53和P21蛋白表达水平随辐照剂量增高。以上结果提示不同剂量的^12C^6＋离子束照射可激活SMMC-7721细胞不同的细胞周期检测点，其中G0／G1期阻滞与P53和P21蛋白以及MDM2截短体76kD蛋白的表达水平升高有关。     

细胞周期调控与细胞抗辐射能力

电离辐射作用后的细胞能够启动多种信号通路，用于维持基因组的完整性。其中细胞周期调控是决定细胞抗辐射能力的一个重要因素。由电离辐射诱导的DNA损伤能最终使细胞周期产生暂时的阻滞，以利于一部分DNA损伤得到修复；或者产生不可逆的细胞周期阻滞，使细胞走向凋亡或坏死。因此，恰当的细胞周期阻滞会给DNA损伤修复提供一定的时间，从而有利于细胞生存。对该领域的深入研究，将会为研制辐射增敏剂和辐射防护剂提供一种新的思路。