低剂量辐射诱导胸腺细胞调亡及细胞周期进程适应反应的剂量效应

本研究采用Ｘ射线全射照射昆明系雄性小鼠模型，通过流式细胞仪观察低剂量辐射诱导胸腺细胞调亡及细胞周期进程适应性反应的诱导剂量（Ｄ１剂量）及其后攻击剂量（Ｄ２剂量）的剂量范围。动物随机分为假照组、Ｄ２对照组Ｄ１＋Ｄ２实验组。结果表明，Ｄ１＋Ｄ２组胸腺细胞调亡小体百分数不同程度地低于Ｄ２组，并且减轻Ｇ１和Ｇ２＋Ｍ期阻滞，导致Ｓ期ＤＮＡ合成的细胞增加；当Ｄ１达２００ｍＧｙ时，不再诱导胸腺细胞调亡及细胞周期     

流式细胞仪的新发展及其在生物医学研究中的应用

流式细胞仪是一种对细胞进行定量分析与分选的精密仪器，它分析速度快，特异性好和灵敏度高，是生物医学研究的强有力工具。本文在自己研制的流式细胞仪的基础上，结合国内外的最新动态，概述了该领域在仪器和技术方面的最新发展及其在生物医学研究中的应用。     

尾加压素Ⅱ对体外高糖培养大鼠肾小球系膜细胞周期的影响

目的观察尾加压素Ⅱ(UⅡ)对体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞周期的影响。方法体外高糖培养大鼠肾小球系膜细胞,加入不同浓度的UⅡ(10-7、10-8、10-9和10-10mol/L),37℃孵育24h,用碘化丙啶染色流式细胞术分析肾小球系膜细胞周期分布。结果UⅡ对体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞有明显的促增殖作用,表现为细胞周期S期比例增加,以浓度为10-8mol/L时最明显。Ca2+阻断剂尼卡地平、Ca2+螯合剂EDTA及抗UⅡ抗体能明显抑制其促增殖作用。结论UⅡ能提高体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞S期DNA合成速率,提示UⅡ对其具有明显的促增殖作用。     

不同周期Sf9细胞琥珀酸脱氢酶酶活的研究

为了研究不同周期S19细胞线粒体琥珀酸脱氢酶酶活的差异,首先使用TdR（胸腺嘧啶核苷）双阻断法将Sf9细胞同步化于G1／S期,恢复生长分别得到S、G2／M、G1期的细胞,然后利用MTT法检测不同细胞周期的Sf9细胞琥珀酸脱氢酶酶活,发现处于G1期的细胞酶活比S、G2／M期的细胞酶活大．跟踪细胞成长,在不同的时间点采样,以MTT法检测琥珀酸脱氢酶酶活,发现接种后48h的Sf9细胞酶活最大,此时与其他时刻相比的S19细胞处于G1、S期所占的比例最大．     

不同周期Sf9细胞琥珀酸脱氢酶酶活的研究

为了研究不同周期Sf9细胞线粒体琥珀酸脱氢酶酶活的差异,首先使用TdR(胸腺嘧啶核苷)双阻断法将Sf9细胞同步化于G1/S期,恢复生长分别得到S、G2/M、G1期的细胞,然后利用MTT法检测不同细胞周期的Sf9细胞琥珀酸脱氢酶酶活,发现处于G1期的细胞酶活比S、G2/M期的细胞酶活大.跟踪细胞成长,在不同的时间点采样,以MTT法检测琥珀酸脱氢酶酶活,发现接种后48 h的Sf9细胞酶活最大,此时与其他时刻相比的Sf9细胞处于G1、S期所占的比例最大.     

苦参碱对Raji细胞增殖及Notch信号通路的影响

目的探讨苦参碱对淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖及Notch信号通路的影响。方法试验分为5组:对照组(0 g/L)和4个苦参碱组(0.5、0.75、1.0、1.5 g/L),分别于苦参碱作用于Raji细胞24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布,RT-PCR法及Western blot法检测Notch1受体及下游靶基因Hes1 m RNA转录及蛋白的表达。结果不同浓度苦参碱均有抑制Raji细胞增殖的作用,且随药物浓度增加及作用时间延长,抑制作用更明显;苦参碱可明显诱导Raji细胞凋亡;经苦参碱1.0 g/L处理48 h后,G1期细胞减少(P0.05),S期细胞增多(P0.05),Notch1受体及下游靶基因Hes1 m RNA转录水平及蛋白表达水平均明显下调(P0.01)。结论苦参碱可抑制淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖,且呈浓度-时间依赖性,并诱导细胞凋亡,使细胞周期停留于S期,可能通过直接或间接下调Notch信号通路相关基因表达而实现。     

辐射后A549细胞上清外泌体TMEM88蛋白表达与细胞周期的相关性

目的探讨辐射对肺腺癌A549细胞细胞周期的影响,观察其细胞上清外泌体TMEM88蛋白(transmembrane protein 88)的表达情况。方法取对数生长期肺腺癌A549细胞,按0、0.5、1、1.5、2 Gy剂量(剂量率1.75 Gy/min,300 Mu/min)照射细胞,培养6和12 h后,流式细胞术检测不同辐射剂量对细胞周期的影响;收集细胞上清,超速离心提取外泌体蛋白,Western blot法分析外泌体TMEM88蛋白的表达情况。结果 G2期细胞6 h检测结果显示,与0 Gy组相比,各剂量组细胞比例显著增加(P0.001),且随照射剂量增加,细胞比例增加越明显,除0.5 Gy组与1 Gy组外,其余各组间差异均有统计学意义(P0.001);12 h检测结果显示,G2期细胞比例随照射剂量增加而显著增加,各组间差异均有统计学意义(P0.05)。S期细胞6 h检测结果显示,与0 Gy组相比,0.5、1.0、1.5 Gy组S期细胞比例显著增加(P0.05);12 h检测结果显示,与0、0.5 Gy组相比,1.0、1.5 Gy组S期细胞比例显著增加(P0.05)。随照射剂量的增加,外泌体TMEM88蛋白的表达逐渐降低,6 h检测结果显示,0 Gy组与1.5、2.0 Gy组以及0.5 Gy组与2.0 Gy组相比,差异均有统计学意义(P0.05));12 h检测结果显示,0.5、1.0、1.5、2.0 Gy组与0 Gy组相比,差异均有统计学意义(P0.001)。结论辐射能够诱导肺腺癌A549细胞细胞周期阻滞,并能抑制细胞上清外泌体TMEM88蛋白的表达。     

紫外辐射对皮肤角化细胞的影响及其防护的研究

利用紫外线照射人皮肤角化细胞，采用流式细胞技术观察细胞 进程和细胞凋亡情况，并研究了人参皂甙单体Rg-1和Rb-1对紫外辐射的保护.作用。结果表明一定剂量的紫外线可明显诱导人皮肤角化细胞S期阻滞及细胞凋亡，人参皂甙单体Rg-1和Rb-1能够释放S期阻滞，抑制细胞凋亡，对细胞的紫外辐射损伤具有不同程度的保护作用，为开发相关的抗紫外辐射护肤产品提供理论依据。     

与干细胞衰老调控有关的蛋白

在近期《Nature》杂志中，三个实验室分别报告了一种蛋白的发现。该蛋白专门在干细胞中调控衰老。这个发现可帮助回答一个根本问题：为什么哺乳动物的祖先细胞随着年龄增长会逐渐失去其分裂和生成新细胞的能力Norman Sharpless及其同事培育出一种剔出了肿瘤抑制因子p16INK4a的小鼠，该因子是细胞周期控制中涉及的一种蛋白，已知会以一种依赖于年龄的方式表达。在对该蛋白在血液、胰腺和大脑的再生中所起作用进行的研究中，三个小组分别发现，p16INK4a不仅是一种生物标记，而且是衰老过程的一个促成因子。通过比较p16INK4a在小鼠体内表达增多或减少所产生的效应，他们发现，p16INK4a阻止干细胞的增殖，但只是在比较老的小鼠体内。综合起来，该研究表明，p16INK4a通过肿瘤抑制因子的行动减少癌症的发病，与此同时通过降低干细胞功能对衰老做出贡献。该研究还表明，2-型糖尿病也许与胰岛失去再生能力有关，阻断该蛋白在某些组织中的作用，也许能够抵抗衰老的某些效应。     

硒化卡拉胶联合表阿霉素对肝癌HepG-2细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察硒化卡拉胶(KSC)和表阿霉素(EPI)联合应用对人肝癌HepG-2细胞生长及细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT(噻唑蓝)比色法测定KSC和EPI对HepG-2细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度IC50值及金式指数q判断两者联合作用效果;用倒置显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;Western blot法检测细胞周期蛋白Cyclin A和Cdc25A、细胞周期蛋白依赖性激酶Cdk2的表达水平。结果 KSC和EPI可明显抑制HepG-2细胞增殖,且有剂量依赖性。联合组的抑制效果更显著,且优于单一用药组。EPI单独用药48 h的IC50值为3.612 mg/L,与30mg/L KSC联合用药的IC50值降至0.807 mg/L,q值判断两药联合表现为相加作用。倒置显微镜观察给药后细胞形态发生变化,联合组细胞膜破裂呈坏死状。流式细胞术结果表明,两药均可导致S期周期阻滞。Western blot结果显示两药均可使Cyclin A、Cdc25A和Cdk2蛋白表达下调,联合给药组下降更明显。结论 KSC和表阿霉素可抑制肝癌HepG-2细胞增殖,引起细胞周期S期阻滞,两药联合具有相加效应,这与其调节细胞周期相关蛋白的生成关系密切。