质粒剂量和免疫次数对基因枪免疫DNA疫苗免疫反应的影响

目的研究质粒剂量和免疫次数对基因枪免疫DNA疫苗免疫反应的影响。方法构建携带HIV-1 Env gp145基因的DNA疫苗质粒p1.0-Env,分别采用肌肉注射和基因枪方法免疫BALB/c小鼠。其中,基因枪免疫采用不同剂量或不同次数。ELISA法检测小鼠体内Env特异性抗体水平。结果基因枪免疫小鼠诱导的抗体水平显著高于肌肉注射免疫。在0.1～2.25μg剂量范围内,基因枪免疫小鼠体内的Env特异性抗体水平随疫苗剂量的增加不断提高。加大免疫剂量至5μg和10μg,不能提高体液免疫反应水平。基因枪免疫1次和2次所诱导的特异性抗体水平很弱,免疫3次可诱导高水平的抗体应答。结论基因枪免疫能有效提高DNA疫苗所诱导的抗体应答,小鼠的最适免疫剂量约为2.25μg,2.25μg免疫3次可诱导较强的体液免疫反应。     

从噬菌体表面展示肽库中筛选边缘无浆体膜表面蛋白5单克隆抗体识别的抗原表位

目的从噬菌体表面展示肽库中筛选边缘无浆体膜表面蛋白5(Membrane surface protein5,MSP5)单克隆抗体识别的抗原表位。方法用MSP5单克隆抗体1D8作为靶标,对噬菌体展示随机12肽库进行筛选,通过ELISA和竞争抑制ELISA鉴定筛选克隆的结合特性,并提取阳性克隆的单链DNA,进行测序分析。结果从表面展示随机肽序列的噬菌体文库中筛选到与MSP5单抗1D8特异结合的噬菌体克隆,其一致序列为LING。竞争抑制试验表明,含特异序列的克隆能与MSP5重组蛋白抗原竞争。结论初步确定MSP5单克隆抗体1D8的抗原表位为线性表位,为进一步研究其在边缘无浆体诊断及新型疫苗研制中的作用奠定了基础。     

重组肺癌抑癌基因1蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备

目的表达、纯化重组人肺癌抑癌基因1(Tumorsuppressor in lung cancer1,TSLC1)蛋白,并制备其多克隆抗体。方法采用RT-PCR法扩增TSLC1基因全长编码区序列,克隆入原核表达质粒pQE30,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,免疫家兔,ProteinA亲和层析纯化抗血清,并经Westernblot分析其反应原性。结果重组表达质粒pQE30-TSLC1经双酶切及测序鉴定证明构建正确。重组TSLC1蛋白的表达量约占菌体总蛋白的14%,主要以包涵体形式存在。纯化的重组蛋白纯度为93.4%,可与小鼠抗His-Tag单克隆抗体发生特异性反应。以其制备的多克隆抗体具有良好的抗原识别特异性。结论已成功制备TSLC1多克隆抗体,为深入研究TSLC1分子的生物学活性奠定了基础。     

人源化叶酸受体α抗体质控方法的建立

目的建立人源化叶酸受体α抗体的质控方法。方法应用基于表面等离子体共振(Surface plasmon resonance,SPR)技术的BIAcore3000系统测定人源化叶酸受体α单抗与重组人叶酸受体α的亲和力,从而反映该抗体的功能;采用ELISA法测定其抗原结合力;SDS-PAGE和SEC-HPLC测定其纯度;紫外分光光度法测定其蛋白含量;毛细管等电聚焦电泳法测定等电点;其他各项指标检测按《中国药典》三部(2005版)要求进行。结果人源化叶酸受体α单抗成品的平均相对百分效价为105%,RSD为6.0%。单抗成品及参考品与叶酸受体的结合力均存在量效关系,且符合四参数方程式:Y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D,其曲线相关系数在0.98以上,成品经3次测定,相对抗原结合力平均值为97%,RSD为25%。还原SDS-PAGE分析显示,单抗成品的IgG重链和轻链百分比为98.2%;非还原SDS-PAGE分析显示,完整IgG百分比为96.7%;SEC-HPLC分析显示,单抗成品单体为99.1%,聚合体为0.9%。其他各项指标均符合《中国药典》三部(2005版)要求。结论已初步建立了人源化叶酸受体α抗体的质控方法,为该制品的质量控制奠定了基础。     

抗人CD25人鼠嵌合抗体在CHO细胞中的稳定表达及初步鉴定

目的在CHO细胞中稳定表达抗人CD25人鼠嵌合抗体,并对抗体活性进行初步鉴定。方法采用脂质体法将嵌合抗体真核表达质粒pOptiVEC-H和pcDNA3.3-L共转染CHO-DHFR-细胞,通过去除HT和在培养基中加入500μg/ml的Geneticine进行阳性克隆的筛选,有限稀释法对阳性克隆进行亚克隆,通过在培养基中加入浓度逐步增加的MTX提高克隆的抗体表达量。采用流式细胞术(FCM)检测嵌合抗体的抗原结合活性及人抗体重链Fc段、轻链κ链;提取细胞基因组进行PCR鉴定;抗体经超滤浓缩后,采用蛋白G亲和纯化法进行纯化,并进行Westernblot分析;体外连续培养细胞株2个月及冻存、复苏后,采用ELISA法检测抗体分泌的稳定性。结果获得稳定分泌嵌合抗体的细胞株1C1,ELISA检测抗体表达量为103ng/ml;PCR结果表明,表达的质粒已整合入细胞基因组中;FCM及Westernblot结果显示,嵌合抗体含有人抗体重链Fc段及轻链κ链,且保留了鼠抗体V区的抗原结合特异性;经蛋白G亲和纯化后,获得抗体220μg,纯度>97%;体外连续培养细胞株2个月及冻存、复苏后,抗体分泌保持稳定。结论获得了稳定表达人CD25人鼠嵌合抗体的CHO细胞株,其具有鼠源抗体的抗原结合特异性及人抗体的恒定区。     

乙肝六项检测中HBsAg和HBsAb同时存在分析

目的探讨乙肝六项检测中表面抗原(HBsAg)和表面抗体(HBsAb)同时阳性的特殊模式分析。方法采用酶联免疫(ELISA)法,对门诊和住院患者乙型肝炎分析检测。结果5637例门诊和住院患者乙肝病毒检测中,约有645例乙肝表面抗原阳性,其血清中有24例乙肝表面抗原和表面抗体同时阳性。645例中E抗原(HBeAg)阳性的202例,E抗体(HBeAb)阳性的有259例,核心抗体(HBcAb)阳性629例。乙肝表面抗原和抗体同时存在阳性可出现在乙肝病毒感染的不同亚型患者的血清中。结论乙肝表面抗原阳性,即使表面抗体同时存在,也要临床密切定期动态观察。     

日本以生物技术产业立国

日本政府自从8年前提出“生物技术产业立国”口号以来,一直把生物产业作为国家核心产业加以发展,出台了多个重要政策,加速了生物技术的利用和生物产业的发展。目前日本的生物技术及产业发展居于全球前列,在发酵工程、生物医药（尤其是基因工程和单克隆抗体制备）、生物环保、生物能源等多个生物技术产业领域均具有独特优势。其中,药物发现、生物服务、生物仪器和功能食品等行业极具市场前景。     

鸡蛋抗体的研究进展及其抗SARS病毒的可行性分析

鸡蛋抗体，即鸡卵黄中的免疫球蛋白，简称IgY。由于其具有不与人类补体结合，不与蛋白A结合以及不与类风湿因子结合等的免疫学特性，目前已被运用于疾病诊断检测和防治中。因此，利用IgY研制“非典”病毒特异性抗体，以用于预防“非典”病毒引起的呼吸道感染和治疗肺部感染及清除肠道中的病毒、防止排泄物引起的二次感染的设想有可能实现。本文就对鸡蛋抗体的研究进展及其抗SARS病毒的可行性作一分析、综述。     

抗志贺氏菌IgY的提纯及建立间接ELISA检测志贺氏菌

采用水稀释法提纯抗志贺氏菌IgY,检测10mg/mL纯化抗志贺氏菌IgY的效价为1∶320,并以此IgY为基础建立间接ELISA检测志贺氏菌,测定志贺氏菌纯培养液的检出限为105～106cfu/mL。对蜡样芽孢杆菌等10株不同菌株的检测结果表明,该方法对志贺氏菌有明显的检测特异性,对所测定的其它菌株无交叉反应。     

抗玉米赤霉烯酮单克隆杂交瘤细胞系的建立及单抗生产

为快速检测食品中的玉米赤霉烯酮 (Zearalenone以下简称ZEN) ,建立了抗ZEN的单克隆杂交瘤细胞株。用ZEN BSA偶联物免疫 8～ 10周龄雌性BalB c小鼠后 ,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2 0融合 ,经过 4～ 5次亚克隆建立了稳定分泌抗ZEN抗体的杂交瘤细胞株 ,分别命名为Z2A4、Z8D6。将上述 2种杂交瘤细胞分别注入BalB c小鼠腹腔 ,获得含抗ZEN单克隆抗体的腹水。将腹水用饱和硫酸铵盐析法纯化 ,得到Z2A4、Z8D6单克隆抗体。经鉴定 ,其亚类为IgG1,抗体腹水效价Z2A4和Z8D6分别为 1∶1 6× 10 6和 1∶3 2× 10 6;分子量均为 15 0 0 4 0 (15 0kD) ;参考工作浓度分别为1∶4 0 0 0 0和 1∶10 0 0 0 0 ;纯化后抗体IgG含量分别为 34和 39mg ml ;抗体与其它霉菌毒素无交叉反应(交叉反应率 <1% ) ,具有较高特异性 ;抗体亲和力常数Z2A4和Z8D6分别为 5 5 2× 10 8和 4 6 8×10 9mol L。