甘草黄酮合酶Ⅱ催化甘草素特异性合成7，4′-二羟基黄酮

利用同源序列比对和分子进化树分析从胀果甘草转录组数据库中挖掘并成功克隆到2个黄酮合酶基因：Gur.gene26505和Gur.gene26116。经表征Gur.gene26505为黄酮合酶Ⅱ,具有催化甘草素特异性合成7,4′-二羟基黄酮的特性,而Gur.gene26116为黄烷酮2位羟化酶,可催化甘草素生成包括7,4′-二羟基黄酮在内的三种产物。进一步通过蛋白质结构预测、分子对接和分子动力学模拟探究了黄酮合酶Ⅱ(Gur.gene26505)催化合成7,4′-二羟基黄酮特异性的原因。由于Gur.gene26505活性口袋附近特有的刚性结构β片层使大位阻苯丙氨酸残基翻转至羟化中心下方,消除了羟化产物2-羟基甘草素进入脱水中心的阻力进而发生C₂-C₃位的脱水反应特异性生成7,4′-二羟基黄酮。最后通过基因过表达、反应条件优化和强化菌体生长建立了7,4′-二羟基黄酮特异性合成的最佳细胞催化工艺,使甘草素转化率达到了76.67%。     

基于镉特异性功能化核酸适配体测定痕量镉的共振光散射新方法

镉特异性功能化核酸适配体(FA_(Cd))在无镉体系中能阻碍金纳米(GNPs)与罗丹明6G(Rh6G)聚集,体系共振光散射强度较低。当体系中存在镉离子时,FACd与之特异性结合,从RNA位点处断裂产生适配体片段(FAF),FAF与GNPs和Rh6G形成GNPs-FAF-Rh6G聚合物,共振光散射强度大幅增加,共振光散射强度值(I_(RLS))与镉的浓度(cCd⁽²⁺⁾)在0.28(2+))在0.28¹1.2 ng/mL范围内呈现良好线性关系,检出限为0.04 ng/mL,相对标准偏差≤5%,加标回收率为96.4%11.2 ng/mL范围内呈现良好线性关系,检出限为0.04 ng/mL,相对标准偏差≤5%,加标回收率为96.4%¹01.4%。     

疾病标志物快速检测的免疫芯片研究

近年来,各种重要疾病的早期诊断和治疗已成为国际医学界和生物分析工作者面临的严峻挑战.免疫传感器的测定基于抗原和其特异性抗体结合形成稳定的抗原抗体复合物,具有较高的特异性和灵敏度.通过抗体工程技术,人们可以得到所需要的抗体,并可根据需要改变抗体的特异性和亲和性,提高传感器的特异性识别.传统的疾病诊断技术,包括酶联免疫法和放射免疫法,在进行特异性病毒检测分析时,通常采用多种试剂盒对样品中的数种目标物进行逐个检测,存在分析时间长、信息量少等局限.     

特异性抗肿瘤免疫核糖核酸的提取

用H22细胞接种于小鼠腹腔，抽取癌性腹水，分离肿瘤细胞，用肿瘤细胞裂解物加弗氏完全佐剂充分乳化制备成免疫原，接种于小鼠，取小鼠的免疫器官提取核糖核酸，并进行相关性能检测。结果表明该方法制备提取免疫的核糖核酸携带供体肿瘤特异性免疫信息，能提高抗肿瘤的疗效。     

适体电化学生物传感器研究进展

蛋白、基因和药物的快速、灵敏、特异性检测对疾病的预防、诊断和治疗具有十分重要的意义.适体是一类能与蛋白、药物等靶物质特异性、选择性结合的寡核苷酸片段.在总结适体电化学生物传感器的原理基础上,将适体电化学生物传感器分为非标记型适体电化学生物传感器和标记型适体电化学生物传感器,介绍了近三年来这两类传感器在蛋白和有机小分子等分析方面的研究进展.     

EM>N-/EM>琥珀酰亚胺-3-碘［S

研究能有效降低抗体的体内脱碘的标记方法。碘标记N-琥珀酰亚胺-3-(三正丁基锡)苯甲酸酯(ATE)前体,得到N-琥珀酰亚胺-3-碘[125I]苯甲酸酯(S125IB),分别与人IgG和抗人肝癌单抗(Hepama-1)进行偶联,探索最佳标记条件,并测定标记物的稳定性和生物活性,研究直接标记和间接标记的Hepama-1在正常小鼠体内的生物学分布。结果表明,用N-氯代琥珀酰亚胺(NCS)法125I标记ATE前体,在ATE用量为25～100μg、NCS用量为10～20μg、磷酸盐缓冲溶液(PBS)用量为10～20μL、反应时间为5 min时,标记率大于95%;S125IB和人IgG的偶联率最高可达75%,偶联产物稳定性、生物活性良好;与Hepama-1偶联率可达75%以上。生物分布的对比实验证明,1,3,4,6-四氯-3α,6α-二苯甘脲(Iodogen)直接标记的Hepama-1在甲状腺的放射性摄取率(脱碘显示)最高是S125IB间接标记的Hepama-1的87.9倍。这说明以ATE为前体的放射性碘间接标记蛋白质方法与传统的碘直接标记方法相比较,在解决体内严重脱碘问题上具有明显的优越性。     

前列腺特异性抗体电化学免疫传感器的研制

利用自组装的方法在金电极上制得巯基丁二胺铜(Ⅱ)/纳米金胶/前列腺特异性抗体(抗PSA)免疫修饰电极。用该修饰电极对PSA进行检测,发现其循环伏安图的氧化还原峰电流都随PSA浓度的增高而降低,峰电位没有变化。其最佳实验条件包括:pH5.2的0.1mol/L磷酸盐缓冲液作为底液,以及用示差脉冲方式进行定量测定。结果显示:该传感器的氧化峰电流减少值与PSA浓度在0.005-0.48μg/mL范围内成线性关系,检测下限为2ng/mL.在40 ng/mLPSA浓度下八次测量相对标准偏差为2.9%,该免疫传感器的稳定性和抗干扰性都较好。对血清中的PSA进行检测,获得满意的结果。     

跨通路实验模式的视觉失匹配负波研究

采用视听觉的跨通路刺激实验模式,通过对ERP实验数据的分析发现:在非注意条件下,顶叶和颞叶的负电位波形不规则,且一致性差;而额叶及枕叶(接近视觉初级投射区)均出现了较明显的视觉早期偏差相关负成分,其潜伏期范围在140~170 ms之间,存在通道特异性,与听觉MMN类似。据此得出:视觉早期偏差相关负成分应该是由视觉通路痕迹产生的视觉MMN;视觉早期偏差相关负成分的源有两个,一个位于额叶,另一个位于初级视皮层所在的枕叶处。     

前列腺特异抗原PSA酶联免疫分析试剂盒的研制

一株ＰＳＡ单抗用于固相包被，另一株单抗与辣根过氧化物酶偶联制备抗ＰＳＡ酶标记物，以四甲基联苯胺（ＴＭＢ）为底物，采用二步法，建立了ＰＳＡ酶联免疫分析试剂盒（ＥＬＩＳＡ）制备方法。本文法的灵敏度为０．２μｇ／Ｌ，批内变异系数＜５．３％，批间变异系数＜６．４％，回收率为９６．６％￣１０５．５％，特异性鉴定显示与其他肿瘤标志物无明显交叉反应。正常参考值＜４．０μｇ／Ｌ。本法所制试剂盒与ＰＳＡ－ＥＬＩＳＡ     

复方中草药对大菱鲆非特异性免疫力的影响

将牛膝、板蓝根、甘草、陈皮、肉桂、麦芽、神曲7味中草药,粉碎后经80目筛网过滤,按一定比例混匀,以2%、4%和6%的质量分数添加于基础饲料中连续投喂体质量为(29.00±1.82)g的大菱鲆Scophthalmus maximus,对照组投喂不添加中草药的基础饲料,试验共进行28 d,试验结束后测定大菱鲆的非特异性免疫指标及抗病力。结果表明:在整个试验周期内,4%浓度组大菱鲆血清溶菌酶活力和抗菌活力均比对照组有显著升高(P<0.05);试验前2周4%和6%浓度组鱼血清抗蛋白酶活力较高,后2周2%浓度组鱼血清抗蛋白酶活力逐渐升高,并显著高于其他组(P<0.05);试验前3周4%浓度组鱼血清补体C3含量与对照组相比显著升高(P<0.05);在整个试验周期内,2%、4%、6%浓度组鱼血清NBT阳性细胞数与对照组相比均显著升高(P<0.05),且4%和6%浓度组升高更为明显;在整个试验周期内,4%和6%浓度组头肾白细胞吞噬活性均呈现先降低后升高的趋势,均在第4周达到峰值,且显著高于对照组和2%浓度组(P<0.05);攻毒试验表明,各组的存活率从大到小依次为4%浓度组>2%浓度组>6%浓度组>对照组。本研究表明,该复方中草药可以显著提高大菱鲆的非特异性免疫力和抗病力,2%浓度组在一定水平上有促进作用,4%浓度组效果更为显著。