大豆球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立

建立了大豆球蛋白间接竞争酶联免疫检测法(ELISA),为食品中主要的大豆蛋白过敏原的检测提供技术基础.以纯品大豆球蛋白免疫新西兰大白兔,自制得到兔抗大豆球蛋白的多克隆抗体,并以大豆球蛋白包被抗原、自制抗体作为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为酶标二抗,四甲基联苯胺(TMB)显色液为底物,建立了大豆过敏原中大豆球蛋白的间接竞争ELISA检测方法.确定了抗原的包被浓度为0.025μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶3 200,酶标二抗稀释度为1∶10 000.检测结果达到板内误差3.82%,板间误差10.22%,在允许的误差范围之内;其检测的线性范围为0.01~0.05μg/mL.结果表明本试验所建的大豆球蛋白间接ELISA方法具有一定的重复性和灵敏度,可用于大豆蛋白制品过敏原的检测.     

酶解改性对大豆蛋白抗原性的影响研究

大豆蛋白营养价值很高,但其是八大类食物过敏原之一,会对过敏人群造成危害,而酶解是一种较好的蛋白改性方法。选用风味蛋白酶处理大豆分离蛋白,采用间接竞争ELISA法测定酶解产物中β-伴大豆球蛋白的抗原性,并利用响应面法优化最佳酶解条件。结果表明,风味蛋白酶可以显著降低β-伴大豆球蛋白的抗原性,且其抗原性与水解度具有负相关关系。风味蛋白酶在酶解时间30 min、加酶量1 500 U/g、温度60℃、p H 6.5条件下,酶解产物中β-伴大豆球蛋白抗原抑制率达到最低,为21.79%,比大豆分离蛋白降低了76.60%。SDS-PAGE结果表明,风味蛋白酶能够将β-伴大豆球蛋白酶解成低相对分子质量的肽段,从而降低其抗原性。     

葡聚糖接枝对大豆蛋白功能特性及结构的影响

采用干热糖基化对大豆分离蛋白进行改性,研究其功能特质及结构特性。以葡聚糖和大豆分离蛋白(soy protein isolate,SPI)为原料,考察底物质量比和反应时间两个因素。结果表明:蛋白质与糖质量比2∶1,反应温度60℃时,产物接枝比较高,褐变程度中等;与SPI相比,糖基化之后大豆蛋白的溶解度提高了72.72%,乳化活性(emulsifying activity,EAI)和乳化稳定性(emulsion stability,ESI)分别提高了117.53%和134.20%。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)表明SPI与葡聚糖发生了糖基化反应;傅里叶红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)和荧光光谱分析表明,糖链的引入导致了大豆蛋白空间结构的变化;模拟体外消化特性结果表明,葡聚糖糖基化修饰对SPI体外消化性的改善效果不明显。     

大豆蛋白-木糖复合物的抗原性、致敏性及结构特性研究

大豆是营养丰富的植物蛋白资源,但也是八大过敏原之一;糖基化修饰是一种降低食物过敏原的有效方法。本文将木糖通过糖基化的方法引入大豆分离蛋白制备大豆分离蛋白-木糖复合物,采用间接竞争ELISA法,测定在一定温度、一定质量比、不同反应时间条件下,大豆分离蛋白-木糖复合物中大豆球蛋白的抗原性和过敏原性的变化,并且对糖基化产物进行了结构特性的研究。结果表明,糖基化能有效降低大豆球蛋白的抗原性和过敏原性,其抗原性从83.01%降到67.43%;过敏原性从46.32%降低到29.48%;两者在反应10 h时免疫活性都较低。通过三硝基苯磺酸(TNBS)法、SDS-PAGE电泳证明了糖基化反应的发生;傅里叶红外光谱结果表明,与大豆分离蛋白相比,SPI-木糖糖基化产物的α-螺旋、β-转角的含量下降,而无规卷曲、β-折叠的含量增加。     

花生肽亚铁螯合物的制备工艺优化及结构特性研究

研究超声波辅助条件下花生肽亚铁螯合物的制备工艺及其结构特性。方法 采用超声波辅助双酶酶解,考察肽铁质量比、pH、螯合温度和时间对螯合率的影响,并采用紫外、红外、荧光光谱及扫描电镜分析花生肽螯合前后空间结构及表观形态变化。结果 超声条件下碱性酶与风味酶复配能显著提高花生肽的亚铁离子螯合率;得到螯合率最佳的反应条件为肽铁质量比3.2:1,pH为7.9,温度38 ℃,时间30 min,亚铁螯合率可达67.5%;光谱分析表明,花生肽段所含的氨基与羧基参与螯合反应,使其空间结构发生改变;扫描电镜结果显示花生肽由平滑的片状结构转变为密集的球状结构。结论 得到了花生肽亚铁螯合物的最优制备工艺并确定其螯合位点,本研究不仅能提高花生粕的经济价值,还有利于促进新型铁制剂的开发。     

不同反胶束体系萃取大豆蛋白研究

利用AOT/异辛烷/KCl溶液,SDS/异辛烷―正辛醇/KCL溶液,CTAB/异辛烷―正辛醇/KCL溶液三种反胶束体系前萃取大豆蛋白质,针对影响大豆蛋白萃取率的各种因素如W0、缓冲溶液pH、萃取温度、萃取时间、离子强度进行了研究,得到了三种反胶束前萃取的最佳工艺:W0均取16;缓冲溶液pH分别为6.5、6.5、10;萃取温度分别为45、45、35℃;萃取时间均取30 min;离子强度均取0.05 mol/L。试验结果表明AOT和SDS反胶束最佳前萃取条件相同,CTAB反胶束最佳前萃条件中pH和萃取温度与以上两种体系不同,其它条件相同。     

食物过敏原蛋白检测技术研究进展

目前食物过敏已经成为重要的食品安全问题,该文对食物中过敏原蛋白的检测方法进行综述,为不同食物中蛋白过敏原的检测提供依据。主要介绍了食物蛋白过敏原检测技术的新发展,包括酶联免疫吸附试验、免疫印迹法、免疫层析法、PCR法、SPR技术和质谱技术,并对食物过敏原检测方法的前景作出了展望。     

超声辅助DMBAC反胶束体系后萃取大豆蛋白的研究

本研究采用超声波辅助DMBAC/异辛烷/正辛醇反胶束体系萃取大豆蛋白,对温度、KCl浓度、pH值、超声功率、时间五个因素进行了单因素研究,之后进行了正交试验,由试验结果可知,因素影响顺序为KCl浓度>温度>PH值>功率,KCl浓度、温度和PH值对后萃取率影响均为极显著,在最优条件(pH为7,KCl浓度为1 mol/L,功率为210W,温度为30℃)下进行验证试验,蛋白后萃取率为81.44%±0.26%。     

超声辅助SDS反胶束反萃取花生蛋白的工艺研究

研究采用十二烷基磺酸钠(SDS)/异辛烷—正辛醇反胶束体系反萃取花生蛋白,并采用超声波辅助萃取,主要研究了缓冲溶液pH值、萃取时间、萃取温度、超声功率、KCl浓度对花生蛋白后萃率的影响.试验结果表明最佳后萃工艺条件为:缓冲溶液pH值为9、萃取时间为40 min、萃取温度为45℃、超声功率270 W、KCl浓度为1.5 mol/l,此时蛋白后萃率为82.62％.     

AOT反胶束体系萃取大豆蛋白质的研究

研究了AOT反胶束萃取大豆蛋白的工艺,针对影响AOT反胶束萃取大豆蛋白质的各种因素如反胶束直径、缓冲溶液pH值、离子强度、温度、萃取时间进行了研究,得出主要的影响因素为反胶束直径、缓冲溶液pH值和离子强度,并得到最佳的萃取条件为:反胶束直径为4.9nm,此时的Wo值为15.8;pH值为6.5;离子强度为0.1mol/L;萃取温度为45℃;萃取时间为20min。在此条件下蛋白质的萃取率为82.57%。