大豆蛋白-葡萄糖共价复合物抗原性研究

该文以大豆分离蛋白与葡萄糖为原料,通过干法糖基化反应制备大豆蛋白–葡萄糖共价复合物。采用JMP数据分析软件的定制设计,以大豆球蛋白抗原抑制率为指标,考察了反应温度、蛋白与糖的比例、反应时间等因素对干热糖基化反应过程中大豆分离蛋白―葡萄糖糖基化复合物抗原性的影响,建立了预测模型,优化反应条件。结果表明:各因素对糖基化复合物的抗原性影响程度依次为反应时间>温度>蛋白与糖比例;此外,根据回归方程和预测模型,得到最佳制备条件为蛋白与糖比例5∶1、反应温度55℃、反应时间为72 h,糖基化产物的大豆球蛋白抗原抑制率从89.95%降至64.28%。     

酶辅助反胶束体系前萃花生蛋白研究

采用JMP软件的定制设计,研究了含有碱性蛋白酶的AOT/异辛烷反胶束体系萃取全脂花生粉中蛋白质的过程,考察了酶与底物浓度比([E]/[S])、W0值、缓冲溶液pH、萃取温度、萃取时间等因素对蛋白萃取率的影响,建立了预测模型,优化萃取条件。试验结果表明:反胶束体系中加入碱性蛋白酶可显著提高萃取率,且[E]/[S]、萃取时间、缓冲溶液的pH和W0对萃取率的影响是极显著的(ρ<0.01)。此外,本文还分析了双因子的交互作用对萃取率的影响,根据回归方程和预测模型,获得最佳萃取条件:[E]/[S]为40 000 U/g,W0 12.8,缓冲溶液pH为7.3,萃取温度60℃,萃取时间为50 min,在此条件下反胶束萃取花生蛋白的萃取率达92.37%±0.58%。与不含酶的AOT反胶束体系相比,添加碱性蛋白酶的反胶束体系可以显著提高花生蛋白的萃取率。     

β-伴大豆球蛋白间接竞争ELISA检测方法建立

β–伴大豆球蛋白是引起过敏现象发生的主要大豆蛋白过敏原之一,建立β–伴大豆球蛋白过敏原的检测为研究大豆中过敏原降低程度奠定了良好的基础。采用自制的兔抗β–伴大豆球蛋白多克隆抗体,并以标准β–伴大豆球蛋白为抗原、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为酶标二抗,建立了定量检测β–伴大豆球蛋白的间接竞争ELISA方法。并对该方法进行了条件优化及精密度的测定。结果为:抗原包被浓度为0.3μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶3200,酶标二抗稀释度为1∶10000;板内误差2.19%,板间误差9.61%。回归直线方程为y=–2.439 2x–1.871 8,相关系数R2=0.995 7,其检测的线性范围为0.1²μg/mL。表明所建方法具有一定的重复性和灵敏度,可用于大豆制品过敏原的检测。     

正交试验优化花生肽螯合锌的制备工艺

研究了花生蛋白水解物和锌离子制备肽锌螯合物的工艺条件,以螯合率为评价指标,考察肽与锌的质量比、反应pH、反应温度和反应时间对螯合反应的影响。在单因素试验基础上,采用4因素3水平正交法确定花生肽-锌螯合物的制备工艺。最佳工艺条件:花生肽-锌质量比4∶1、反应体系pH 6.0、反应温度50℃、反应时间40 min。在此条件下,锌的螯合率为57.04%。     

大豆蛋白-酪蛋白类蛋白反应的工艺优化

目的在大豆蛋白中导入酪蛋白,弥补大豆蛋白中Met含量过少的不足,并提高其功能。方法以大豆蛋白和酪蛋白为原料,采用α-糜蛋白酶催化类蛋白反应,向大豆多肽(SP)中导入酪蛋白非磷酸肽(CNPP),形成大豆蛋白-酪蛋白重组体(CNPSPC),并对其产率进行测定。然后基于人工神经网络模型对CNPSPC反应条件进行优化。结果当底物CNPP与SP的质量比为4∶1,反应温度为46.2℃,反应pH为4.97,反应时间为20h时,CNPSPC的产率达到最大,可达(87.0±0.10)%。结论该预测模型可以很好地对大豆蛋白-酪蛋白类蛋白反应的工艺条件进行优化,优化的CNPSPC可作为很好的生物膜原料。     

含酶反胶束体系后萃花生蛋白工艺优化研究

该文研究了含酶反胶束体系后萃花生蛋白的过程,通过考察体系pH、KCl浓度、温度和振荡时间等因素,对花生蛋白后萃率进行研究,并采用JMP10.0软件进行定制实验设计,以花生蛋白的后萃率为响应值,建立数学模型,确定花生蛋白后萃过程的最佳工艺条件:缓冲液的pH为8.06,KCl浓度为1.53 mol/L,温度为40℃,萃取时间为120 min,在此条件下进行试验获得最佳后萃率为(78.43±0.87)%。     

大豆蛋白-葡萄糖复合物的抗原性及结构特性研究

大豆是优质的植物蛋白资源,同时也是八大食物过敏原之一;糖基化改性是降低蛋白质过敏原的有效方法之一。本文以大豆分离蛋白和葡萄糖为原料,在蛋白与糖不同质量比、不同温度、不同时间条件下进行美拉德反应,制取糖基化复合物;并以β-伴大豆球蛋白抗原抑制率为指标,采用间接竞争ELISA方法检测糖基化复合物抗原性的变化。发现在温度55℃、蛋白与糖比例为3:1时,制备的糖基化复合物抗原性较低;当反应时间为72 h时,抗原抑制率从93.54%降低到22.58%。同时,通过三硝基苯磺酸(TNBS)法、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证明了美拉德反应的发生;紫外光扫描、傅里叶红外光谱分析等方法研究了蛋白质结构的变化。这些基础研究可能为探究糖基化修饰对抗原性影响的作用机理、开发低敏性大豆蛋白制品提供研究方法和理论依据。     

HACCP计划未能有效实施的原因分析

就HACCP计划在我国部分企业中未能有效实施的原因进行了分析,讨论了影响HACCP计划有效实施的各种因素,并针对问题提出了建议。     

大豆球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立

建立了大豆球蛋白间接竞争酶联免疫检测法(ELISA),为食品中主要的大豆蛋白过敏原的检测提供技术基础.以纯品大豆球蛋白免疫新西兰大白兔,自制得到兔抗大豆球蛋白的多克隆抗体,并以大豆球蛋白包被抗原、自制抗体作为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为酶标二抗,四甲基联苯胺(TMB)显色液为底物,建立了大豆过敏原中大豆球蛋白的间接竞争ELISA检测方法.确定了抗原的包被浓度为0.025μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶3 200,酶标二抗稀释度为1∶10 000.检测结果达到板内误差3.82%,板间误差10.22%,在允许的误差范围之内;其检测的线性范围为0.01~0.05μg/mL.结果表明本试验所建的大豆球蛋白间接ELISA方法具有一定的重复性和灵敏度,可用于大豆蛋白制品过敏原的检测.     

酶解改性对大豆蛋白抗原性的影响研究

大豆蛋白营养价值很高,但其是八大类食物过敏原之一,会对过敏人群造成危害,而酶解是一种较好的蛋白改性方法。选用风味蛋白酶处理大豆分离蛋白,采用间接竞争ELISA法测定酶解产物中β-伴大豆球蛋白的抗原性,并利用响应面法优化最佳酶解条件。结果表明,风味蛋白酶可以显著降低β-伴大豆球蛋白的抗原性,且其抗原性与水解度具有负相关关系。风味蛋白酶在酶解时间30 min、加酶量1 500 U/g、温度60℃、p H 6.5条件下,酶解产物中β-伴大豆球蛋白抗原抑制率达到最低,为21.79%,比大豆分离蛋白降低了76.60%。SDS-PAGE结果表明,风味蛋白酶能够将β-伴大豆球蛋白酶解成低相对分子质量的肽段,从而降低其抗原性。