人Cu,Zn-SOD基因在毕赤酵母中的表达及稳定性

目的构建人Cu,Zn-SOD基因的真核表达载体,转化毕赤酵母,并检测表达产物的稳定性。方法根据酵母密码子偏好性,合成人Cu,Zn-SOD基因,克隆至真核表达载体pPIC9k中,转化毕赤酵母GS115。甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。优化表达条件,并检测粗酶液的稳定性。结果经SDS-PAGE和Western blot检测,表达的目的蛋白相对分子质量为18000左右;最佳表达条件为pH6.0,甲醇浓度1.5%,持续培养96h;目的蛋白占分泌蛋白总量的27%,最高表达量为91mg/L;最佳条件下培养液上清的酶活性最高达334U/ml,粗酶对氯仿和乙醇稳定,对H2O2不稳定,对温度有一定的耐受性,pH在6和8时较稳定。结论在毕赤酵母GS115中成功表达了具备酶活性的人Cu,Zn-SOD基因。     

乙型肝炎病毒表面抗原基因在人参细胞中的高效表达

目的提高乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)在人参愈伤组织细胞中的表达。方法构建一种植物细胞表达载体pBIBeo,该载体携带CaMV 35S双增强启动子和TMV(U1株)翻译增强子。用pBIBeo转化的农杆菌LBA4404与人参愈伤组织细胞共培养,经G418筛选获得新生抗性细胞团PBIBeo,连续继代培养选育出用于植物源口服乙肝疫苗生产的高产细胞株。提取基因组DNA和mRNA,进行PCR和RT-PCR鉴定,Western blot鉴定HBsAg的特异性,电镜下观察纯化抗原颗粒大小,并以ELISA检测HBsAg的表达水平。结果转化的人参细胞基因组DNA进行PCR反应,得到约700 bp的启动子基因片段。提取mRNA进行RT-PCR反应,得到约700 bp的HBsAg基因片段。Western blot分析可见相对分子质量为24 000的特异性条带。亲和层析纯化细胞表达的HBsAg抗原,电镜观察可见平均直径为32 nm的颗粒。ELISA检测结果表明pBIBeo转化细胞株HBsAg表达量比pBIBSa转化细胞株提高1~2倍。结论人参细胞基因组已经整合了目的基因并稳定高效表达。     

红外热像技术用于热设备保温效果评估

应用红外热像仪测得设备外表面温度场，并根据传热学的基本理论进行分析推导，计算出各种热设备的散热损失，从而研制出一套综合测试、分析评定热设备保温效果的方法。本文对该方法的内容及分析论证过程进行了阐述，并通过抚顺石化公司石油一厂焦化装置的现场应用实例，论证了该方法解决工程实际问题的实用性和可靠性。     

表达乙肝病毒表面抗原人参细胞系统的建立

目的建立乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人参细胞表达系统。方法构建含有HBsAg基因的植物细胞表达载体质粒pBIBSb。采用农杆菌感染人参细胞的方法,经农杆菌培养、农杆菌与受体细胞共培养、受体细胞的脱菌培养以及转化体细胞的选择培养后,筛选在G418抗生素培养基上正常生长的细胞株。应用ELISA方法检测抗性细胞株的HBsAg表达;提取基因组DNA进行PCR扩增反应。结果质粒pBIBSb的酶切结果正确。经G418抗生素筛选得到8株正常生长的细胞株,其中5株能够表达HBsAg,提取基因组DNA进行PCR扩增反应,得到大小约700 bp的扩增片段。结论获得了整合HBsAg基因,并能够稳定表达HBsAg的人参细胞表达系统。     

一种新型HBsAg真核表达载体的构建

目的　在CHO细胞中高效表达HBsAg。方法　通过PCR方法扩增出S和dhfr基因片段 ,分别克隆到T载体上。然后分别将S和dhfr基因克隆到pCI载体上 ,构建pCI S dhfr真核表达载体。转染CHO(dhfr )细胞 ,并用ELISA方法检测HBsAg表达量。结果　S和dhfr基因经测序与Genbank报道一致。PCR和测序结果与预期一致。转染后检测结果呈阳性。结论　已成功构建在CHO(dhfr )细胞中高效表达的pCI S dhfr双顺反子真核表达载体     

新建城市区域防洪方案探讨

新建城市区域是城市的重要组成部分,新建城市的防洪是城市防洪规划面临的新课题。在分析杭州市良渚组团区域防洪问题的基础上,明确新建城市区域防洪规划的基本原则,选取合理的防洪标准,通过对拟定防洪方案的对比分析,确定了经济合理、技术可行的防洪体系建设方案,并提出通过建立有效的技术及管理体系等措施。     

石墨烯及其复合材料在锂离子电池中的应用

介绍了石墨烯的物理化学性质,在锂离子电池中的应用及产业化的情况。石墨烯因其特殊的二维结构,具有与石墨负极不同的电化学性能。对石墨烯作为锂离子电池负极材料的电化学性能及其影响因素、制备方法、储锂机理等做了介绍。从石墨烯用于锂离子电池的两个方面材料,即负极及复合电极材料,对石墨烯电极国内外的研究状况做了介绍。与石墨负极相比,石墨烯电极具有高容量、高功率密度的优点,但也存在首周库仑效率低、充放电过程极化较大等缺点。目前石墨烯还未实现产业化,石墨烯电池的研发也多处于概念阶段。     

基于MCGS软件与PLC的主排水控制系统

针对煤矿主排水系统人工控制方式的不足,提出了使用MCGS组态软件与SIEMENS的S7-300 PLC实现的主排水控制系统实现方案,介绍了系统的总体构成与具体实现方案,使用该系统可以提高井下水泵控制的自动化水平,减少人工投入,保证了煤矿井下的安全生产。     

6种茶类多酚含量测定及其抑菌活性

目的测定绿茶、黄茶、白茶、青茶、红茶、黑茶中多酚的含量,研究其抑菌活性。方法针对6种茶叶样品采用超声波提取法,并经乙酸乙酯提取后,所得供试品溶液依国标法测定多酚含量。并以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌为实验菌株,通过圆形滤纸片扩散法研究不同浓度供试品溶液的抑菌活性。结果 6种茶叶样品乙酸乙酯部位多酚得率分别为绿茶59.07%、黄茶62.39%、白茶32.15%、青茶50.70%、红茶34.86%、黑茶40.68%。对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌的抑菌效果均与供试品溶液浓度呈正相关。结论 6种茶发酵程度的差异导致所含成分不同,致使其抑菌活性有明显区别。     

社区银行机构资源配置的财务可行性研究及操作建议

为了更好地借鉴国外社区银行发展经验,提高新常态下我国金融行业对社区和中小企业的服务能力和效率,探索我国社区银行这一新兴业态发展的可行性。在简要回顾国外社区银行发展过程的基础上,构建和优化社区银行网点效益的动态盈亏平衡分析模型,分析社区银行机构生存和发展在财务上的可行性,讨论当前利率市场化带来的存贷差盈利模式的弱化以及银行成本增加等不同情形对社区银行盈亏平衡点变化趋势的影响,最后提出了配置社区银行资源的具体操作建议和设想。在我国配置社区银行机构资源在财务上是可行的,是对现有金融体系的创新和优化;利率市场化和成本增加对社区银行最低保本存款量即经营的影响是可以接受的,增加非利息收入占比是利率市场化条件下社区银行机构提高资源配置效率的前进方向。