TAT-SOD在长期保藏的重组毕赤酵母中表达的条件优化

TAT-SOD是TAT蛋白转导结构域与SOD的融合蛋白质。作者以2007年构建的产TAT-SOD重组毕赤酵母菌为出发菌株，通过摇瓶实验研究不同温度、初始pH、诱导剂浓度等因素对蛋白质表达的影响。通过比色分析法测定菌体浓度、超氧阴离子自由基清除法测定酶活、SDS-PAGE分析目的蛋白质TAT-SOD的浓度；并采用定量PCR法分析表达菌株的目的基因的mRNA变化规律，从而研究长期保藏重组毕赤酵母菌株表达TAT-SOD的适合性及其条件优化。研究结果表明，摇瓶发酵的最佳条件下（YPDM培养基，体积分数1.0%诱导剂浓度，诱导温度30.0 ℃，初始pH值7.0），发酵液上清酶活水平为753 U/mL，是未优化初始酶活水平的5.1倍，其中pH值优化使TAT-SOD表达水平提高到原始值的3.4倍。7.0的初始诱导pH值的mRNA水平是对照组pH 4.0的3.5倍。这些结果说明，长期保藏的重组毕赤酵母菌株仍然适合表达TAT-SOD，发酵条件会对毕赤酵母的TAT-SOD表达造成显著影响，影响表达水平的最主要因素是目的蛋白质的mRNA水平变化。     

重组SOD发酵液去除内毒素的效果研究

目的:去除重组毕赤酵母表达人Cu,Zn-SOD蛋白溶液中的内毒素,为后续活体动物试验和临床应用提供基础数据。方法:采用Triton X-114萃取与活性炭吸附两种方法单独使用或联合使用的纯化方案,比较不同纯化方案对去除重组蛋白溶液中内毒素以及目标蛋白回收率的效果。结果:通过单因素条件优化,确定重组蛋白溶液最佳操作pH为5.0,活性炭最适添加量为5%以及Triton X-114最适添加量为1%(体积分数)。最后确定活性炭吸附和Triton X-114萃取法联合使用的三步法操作工艺,可高效去除重组蛋白溶液中内毒素。终产品内毒素含量降至26.8EU/10 000 U SOD,去除率达到99.8%,目标蛋白回收率为66%,Triton X-114残余量为5.7μg/mL。结论:纯化后所得重组SOD蛋白溶液符合中国药典规定的注射用针剂中内毒素限量与Triton残余量的质量要求,可用于潜在的保健食品开发。     

高效液相色谱法提高红曲细菌分离与分析的效果

为了探讨高效液相色谱技术(HPLC)在复杂微生态体系中微生物分离、分析的应用潜力,提高现代分子生物学技术检测的灵敏度和准确性,本文选取红曲作为模式体系,优化红曲中细菌样品的制备方法,应用HPLC技术对红曲中的生产菌株进行分离,并结合变性梯度凝胶电泳(DGGE)、细菌16S rDNA鉴定方法对色谱分离得到的菌株进行鉴定。结果显示:根据HPLC紫外检测图谱收集到5个明显的洗脱峰,其中有3个洗脱峰经DGGE分析为单一条带,16S rDNA鉴定洗脱峰分别包括环状芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、人参土芽孢杆菌和脂肪酸芽孢杆菌。研究表明,高效液相色谱技术能够从复杂的红曲微生物样品中分离出单一的细菌,与传统PCRDGGE技术相比,无需进行胶回收便可实现16S rDNA的直接测序,且具有准确性高,试验周期短,细菌细胞可回收等优点。色谱分离技术在下一代测序技术中的应用潜力也在探讨中。     

鸡蛋抗体的研究进展及其抗SARS病毒的可行性分析

鸡蛋抗体，即鸡卵黄中的免疫球蛋白，简称IgY。由于其具有不与人类补体结合，不与蛋白A结合以及不与类风湿因子结合等的免疫学特性，目前已被运用于疾病诊断检测和防治中。因此，利用IgY研制“非典”病毒特异性抗体，以用于预防“非典”病毒引起的呼吸道感染和治疗肺部感染及清除肠道中的病毒、防止排泄物引起的二次感染的设想有可能实现。本文就对鸡蛋抗体的研究进展及其抗SARS病毒的可行性作一分析、综述。     

桦褐孔菌水提粉的抗氧化性及对人体经络电压的作用初探

桦褐孔菌,常称为白桦茸,又叫作西伯利亚灵芝,是一种具有良好的抗氧化功效的保健食品。为了研究桦褐孔菌的抗氧化性和归经作用,测定桦褐孔菌水提粉的SOD活力、总抗氧化力和氧化还原电位值。召集30名志愿者并分为两组,分别服用桦褐孔菌水提粉制备的菌汤和添加SOD蛋白的菌汤,志愿者每日服用100 mL,连续服用24 d,记录左、右两侧的24条经络电压的变化。试验结果表明:桦褐孔菌水提粉有很强的抗氧化性,当志愿者服用桦褐孔菌粉和SOD桦褐孔菌粉24 d后,能够显著提高心经、心包经和肺经电压,而且添加SOD蛋白的桦褐孔菌粉能够显著提高脾经、膀胱经、肝经的电压。以上结果与已报道的桦褐孔菌的功效描述基本吻合。     

香辛料饮料研制及其对人体经络电压的作用

香辛料可以改善食品品质、色泽、风味和滋味,同时有多种保健功能,可用于散寒、除湿、疏通经络等。本研究目的为以性味甘、温的甘草、桂皮和生姜为原材料,研制一款可口且能作用于经络的天然香辛料饮料。饮料配方通过6~8人组成的感官小组进行感官评价来确定。对经络的作用通过观察受试者经络电压的变化来确定。结果表明,当甘草0 mg/mL、桂皮1.5 mg/mL、生姜0.5 mg/mL时,该香辛料组合饮料感官评价效果最佳。经络电压测量表明,7种香辛料组合(甘草、桂皮、生姜、甘草-桂皮、甘草-生姜、生姜-桂皮、甘草-生姜-桂皮)中生姜-桂皮组对人体经络电压作用最为突出,能够大幅度提高肝经、脾经和肾经的经络电压,显示对肝经、脾经和肾经具有特殊的作用。     

鳗鱼皮胶原蛋白水解物对结肠炎的改善作用

溃疡性结肠炎(UC)是一种特发性肠道疾病,发病率不断上升,且治疗药物都存在不同程度的副作用。研究发现胶原蛋白肽可缓解UC症状,并且安全、健康。然而,目前研究主要局限于UC的预防作用,缺少对其治疗作用的研究。鳗鱼皮富含胶原蛋白,而鳗鱼头一般在加工中被丢弃,造成资源浪费,目前缺少对鳗鱼皮胶原蛋白水解物的研究。本研究尝试利用鳗鱼头中的鱼皮提取胶原蛋白并进行水解,希望得到对UC具有治疗作用的鳗鱼皮胶原蛋白水解物(CH),提高鳗鱼加工副产物的利用价值。研究发现鳗鱼皮所含胶原蛋白丰富,占鱼皮湿重的27.87%,纯度较高且主要为Ⅰ型胶原蛋白,可作为胶原蛋白的优质来源。对胶原蛋白进行酶解,得到具有抗氧化活性的CH,并给药UC模型小鼠,结果显示:与阳性对照和模型组相比,CH可以安全健康地降低UC模型小鼠的DAI评分至0,并改善结肠状态;结肠组织病理切片表明CH可以恢复黏膜上皮完整性,减轻炎性细胞浸润;结肠组织氧化应激指标表明CH可以降低结肠组织MDA含量(0.75 nmol/mg pro)和MPO活性(0.11 U/g tissue),并通过提高GSH含量(22.92 umol/g pro)和SOD(693.61 U/g pro)、CAT(1.69 U/g pro)、GPx(141.29 U/g pro)3种抗氧化酶活性来提高结肠组织抗氧化能力,降低氧化应激水平,从而治疗UC。     

X射线致小鼠急性损伤的观察

本研究用6 Gy X射线对小鼠进行全身一次性照射,分别在照射后1、3和7 d经颈椎脱臼处死,测定小鼠外周血红、白细胞数量,胸腺指数和脾脏指数,骨髓嗜多染红细胞微核形成率以及肝脏抗氧化水平。结果表明:照射24 h后,小鼠外周血白细胞数量急剧降低,胸腺指数和脾脏指数下降,骨髓嗜多染红细胞微核形成率增加,肝脏脂质过氧化水平上升。放射7 d后,胸腺指数稍有回升,骨髓红细胞微核形成率和肝脏脂质过氧化水平略为降低,其它指标随时间变化损伤程度持续增加。     

卵清蛋白对卡拉胶功能特性的影响

在卡拉胶中添加适量的卵清蛋白,能有效地提高卡拉胶在果冻生产过程中的凝胶强度和持水性等功能特性。通过与单一卡拉胶以及在卡拉胶中添加0.2%的氯化钾等传统制作果冻的方法相比较,结果表明:以卡拉胶与卵清蛋白配比为4∶1制成的果冻在凝胶强度、持水性、弹性、柔韧性和口感等方面都有很大的改善。经环境扫描电镜显示,添加卵清蛋白的卡拉胶所形成的凝胶网络更加完整、均匀和致密。     

转基因食品(GMF)标识的现状及对策

本文主要阐述了各国转基因食品标识的最新发展情况,列举了对转基因食品标识的3种态度,分析了转基因食品标识于我国的利与弊,提出了对我国转基因食品标识的建议。