罗非鱼骨胶原钙螯合肽的酶解制备

本研究以罗非鱼骨胶原蛋白为原料酶解制备具有良好钙螯能力性的活性肽。以钙螯合活性为指标,将罗非鱼骨架经过脱肉、脱钙等前处理获得的罗非鱼骨胶原蛋白通过木瓜蛋白酶酶解制备得到罗非鱼骨胶原蛋白肽,通过单因素及正交试验对制备罗非鱼骨胶原螯合肽的酶解工艺进行优化。同时对最优条件下酶解获得的罗非鱼骨胶原钙螯合肽的分子量及氨基酸组成进行分析。结果表明,最优酶解工艺条件为:酶解时间4.5 h,pH 6.5,酶解温度62℃,酶底比0.6%。罗非鱼骨胶原钙螯合肽是一类小分子功能活性肽。同时通过对比罗非鱼骨胶原钙螯合肽及其钙-肽螯合物氨基酸组成,发现胱氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸和赖氨酸等氨基酸对活性肽的钙螯合能力起到重要作用。     

副干酪乳杆菌坚韧亚种FX-6发酵提取物对鲜虾的保鲜评价

将经过0.5%FX-6发酵提取物浸泡处理的鲜虾于4℃冷藏,隔天测定其p H、TVB-N值、细菌总数等鲜度指标及进行感官评价。同时,以相同浓度的山梨酸钾、乳酸链球菌素为阳性对照组。实验结果表明:随着鲜虾冷藏时间的延长,其p H、TVB-N值、细菌总数等鲜度指标均出现不同程度的上升,以TVB-N值为25 mg/100 g和菌落总数为106 CFU/g作为判断货架期终点的界限,空白对照组冷藏第6 d时其TVB-N值和菌落总数已超过界限,0.5%山梨酸钾、0.5%乳酸链球菌素组第8 d时超过界限,而0.5%FX-6发酵提取物组则在第10 d时才超过界限。因此,综合各项鲜度指标及感官评分可知,经过0.5%山梨酸钾、0.5%乳酸链球菌素处理后的鲜虾的货架期可由4 d延长至6 d,而0.5%FX-6发酵提取物能够延长鲜虾货架期至8 d。说明0.5%FX-6发酵提取物对鲜虾具有较好的保鲜效果,优于0.5%山梨酸钾、0.5%乳酸链球菌素。     

番石榴叶中广寄生苷和番石榴苷的降糖作用

目的：研究番石榴叶、广寄生苷和番石榴苷的降糖活性和相关性。方法：采用反相高效液相色谱法测定不同月份番石榴叶中番石榴苷和广寄生苷的含量;建立降糖脂肪细胞模型,测定不同季节番石榴叶提取物的降糖活性;给药干预后,测定细胞培养液中游离脂肪酸的含量,采用Western blotting法测定脂肪细胞膜葡萄糖转运蛋白4（glucose transporter 4,GLUT4）表达。结果：6-9月份番石榴叶中番石榴苷和广寄生苷的含量较高,同时6-9月份番石榴叶的降糖活性也最好,降糖活性与化合物含量存在正相关性。番石榴叶提取物、番石榴苷和广寄生苷均能显著促进脂肪细胞膜上GLUT4蛋白的表达;番石榴叶提取物、番石榴苷和广寄生苷均能显著抑制游离脂肪酸的释放,降糖活性和抑制脂肪分解也存在正相关性。结论：番石榴苷和广寄生苷两种黄酮苷类化合物是番石榴叶降糖、抑制游离脂肪酸释放的主要活性物质基础。     

广林9号桉叶多酚抗氧化活性研究

采用不同极性有机溶剂对广林9号桉叶提取物进行系统萃取分离,用福林-酚法测定各组分的总酚含量,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2＇-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)、还原能力3种体外抗氧化活性方法测定了桉叶各组分的抗氧化活性。结果表明,不同萃取组分中,乙酸乙酯组分总酚含量最高,达到502.67mg/g;其对DPPH自由基和ABTS＋·的清除能力和还原能力也最强,优于阳性对照物茶多酚,其清除两种自由基的IC50分别为0.097mg/mL 和0.034mg/mL;通过总酚含量与抗氧化活性比较发现,其抗氧化活性与总酚含量成正相关,由此判断桉叶提取物的抗氧化活性成分主要为多酚类物质;桉叶粗提物中多酚含量达到30%以上,与茶叶粗提物中多酚含量相当,具有开发意义。     

人参酶解物中的皂苷成分及其对髓源抑制性细胞的作用研究

本文建立了同时测定人参酶解物中12种人参皂苷的高效液相色谱检测方法,探索人参提取物及酶解物主要皂苷成分差异,并以酶解前后的人参提取物作为对象,探讨其对髓源抑制性细胞(Myeloid derived suppressed cell,MDSC)的影响。人参提取物和酶解物的总皂苷含量差异不明显,而酶解物中12种人参皂苷和稀有皂苷含量(Rh1、F1、F2、Rg3、CK和Rh2)均显著高于人参提取物;稀有皂苷含量增加了4.48倍,尤其是酶解后转化生成了大量的F2和少量的F1、CK和Rh2等稀有皂苷。人参提取物及酶解物均能显著抑制MSC2细胞增殖和降低结肠癌荷瘤小鼠脾脏中的MDSC细胞比例。其中人参酶解物效果更佳,相对人参提取物,对MSC2细胞增殖抑制率提高30.00%和MDSC细胞比例降低40.50%。人参酶解物含有丰富的稀有皂苷,具有更高的生物活性,能够有效改善肿瘤微环境,从而加强了抗肿瘤能力。     

火麻仁油提取、化学成分及功能研究进展

文章综述了火麻仁油提取方法、化学成分,对其生物活性功能的研究概况进行归纳总结,并展望火麻仁油的发展前景。     

高效液相色谱法测定奶粉中酪蛋白磷酸肽的含量

采用高效液相色谱(HPLC)法对奶粉中酪蛋白磷酸肽(CPP)含量进行测定,样品通过调节p H、超声提取、离心分离和浓缩等方式进行前处理,C18柱分离,流动相为乙腈+0.1%TFA和水+0.1%TFA,梯度洗脱,检测波长215 nm,以保留时间定性,外标法定量,并与钡-乙醇沉淀法测定的结果进行对比。结果表明,HPLC检测CPP与杂质分离效果良好,线性范围0.1~2.0 mg/m L,加标0.1%~0.3%,回收率97.59%~100.00%;并测定多个厂家奶粉中的微量CPP,与实际添加量较接近,适用性良好,表明该方法简便,准确度和灵敏度高,其检测限为15.34 mg/kg、定量限为51.14mg/kg,适用于奶粉中微量CPP含量检测。钡-乙醇沉淀法测定奶粉中CPP含量结果与实际差别太大,不适用于奶粉中CPP含量的测定。     

罗非鱼皮胶原蛋白肽制备的工艺优化

以罗非鱼鱼皮为原料,研究利用酶法制备胶原蛋白肽制品。测定了罗非鱼皮的基木组成成分,利用低温连续相变萃取技术进行脱脂处理;以水解度、水解产物分子量和感官评定为指标,研究蛋白酶种类对酶解的影响;以水解度为指标,研究酶解条件对水解度的影响,并采用响应面试验对鱼皮胶原肽制备工艺进行优化;用凝胶过滤色谱法测定酶解液分子质量分布。结果表明:采用碱性蛋白酶水解鱼皮效果最好,酶解的最佳工艺条件为:时间7 h、加酶量7%、温度60℃、pH值10.38,在此条件下碱性蛋白酶水解罗非鱼皮的水解度最高可达23.01%。由本法所得胶原肽是以分子质量180~1000 u之间的寡肽(约2~8个氨基酸残基)为主的物质,具有较好的生理活性,可作为功能因子广泛应用于保健食品、化妆品、医药等各个行业当中。     

酪蛋白磷酸肽活性单体分离纯化、固相合成及结构差异研究

本文利用反相高效制备液相色谱对酪蛋白磷酸肽(CPPs)进行初步分离,根据色谱图峰形收集得到4个组分,用分析型反相高效液相色谱进一步分离纯化组分F2,得到亚组分P3,低温减压浓缩回收溶剂,冷冻干燥得到CPPs单体P3粉末。通过已知CPPs单体P3的氨基酸序列人工固相化学合成CPPs单体P3,经质谱和高效液相色谱鉴定,合成CPPs单体P3的分子量与天然单体分子量一致且纯度为98.13%。天然与合成CPPs单体P3的液相保留时间一致,相同浓度条件下合成单体的紫外吸收显著高于天然单体,可能与空间结构差异有关。经红外光谱和圆二色光谱分析,天然与合成CPPs单体P3均含有α-螺旋、β-转角、β-折叠和无规卷曲特征结构,主要以β-折叠-反平行式和无规卷曲形式存在,但不同二级结构形式比例存在差异。天然与合成CPPs单体P3的α-螺旋、β-转角和无规则卷曲比例存在显著差异。天然与合成CPPs单体P3浓度从2 mg/m L上升到4 mg/m L时,天然单体P3不同形式二级结构变化较小,主要由α-螺旋和无规则卷曲向β-折叠-反平行式转变,合成单体P3不同形式二级结构变化显著,主要由α-螺旋和β-转角向β-折叠-反平行式和无规则卷曲转变。     

黑曲霉N5-5单宁酶的纯化及酶学性质测定

采用中空纤维膜超滤和葡聚糖凝胶层析相结合的方法对黑曲霉N5-5单宁酶进行纯化,然后对纯酶性质进行测定。结果显示,黑曲霉N5-5单宁酶用该方法纯化后,可纯化近20倍,酶活力可回收23.30%。对纯酶作十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,可知黑曲霉N5-5单宁酶为分子质量64.2 k D的单肽链蛋白。纯酶的酶促反应最适温度为45℃,且在25~45℃范围内热稳定性良好;酶促反应最适p H值为5.0,且在p H 5.0~5.5范围内酸碱稳定性良好。另外,反应动力学测定结果表明,该酶对底物没食子酸丙酯的米氏常数K_m为0.916 mmol/L,最大反应速率vmax为0.877 mmol/(L·min)。