酪蛋白磷酸肽活性单体分离纯化、固相合成及结构差异研究

本文利用反相高效制备液相色谱对酪蛋白磷酸肽(CPPs)进行初步分离,根据色谱图峰形收集得到4个组分,用分析型反相高效液相色谱进一步分离纯化组分F2,得到亚组分P3,低温减压浓缩回收溶剂,冷冻干燥得到CPPs单体P3粉末。通过已知CPPs单体P3的氨基酸序列人工固相化学合成CPPs单体P3,经质谱和高效液相色谱鉴定,合成CPPs单体P3的分子量与天然单体分子量一致且纯度为98.13%。天然与合成CPPs单体P3的液相保留时间一致,相同浓度条件下合成单体的紫外吸收显著高于天然单体,可能与空间结构差异有关。经红外光谱和圆二色光谱分析,天然与合成CPPs单体P3均含有α-螺旋、β-转角、β-折叠和无规卷曲特征结构,主要以β-折叠-反平行式和无规卷曲形式存在,但不同二级结构形式比例存在差异。天然与合成CPPs单体P3的α-螺旋、β-转角和无规则卷曲比例存在显著差异。天然与合成CPPs单体P3浓度从2 mg/m L上升到4 mg/m L时,天然单体P3不同形式二级结构变化较小,主要由α-螺旋和无规则卷曲向β-折叠-反平行式转变,合成单体P3不同形式二级结构变化显著,主要由α-螺旋和β-转角向β-折叠-反平行式和无规则卷曲转变。