不同来源氨基脲在刺参体内的富集和消除规律研究

目的分析刺参中低浓度氨基脲的残留分布特征,明确不同来源引起的低浓度氨基脲的变化趋势。方法采用超高效液相色谱-串联质谱法对不同来源氨基脲在刺参(Apostichopusjaponicus)体内的富集和消除规律进行研究。结果非呋喃西林源氨基脲, 1 d后氨基脲在刺参体壁的含量为0.57μg/kg,之后含量逐渐上升,到3d时含量度达到最大值1.00μg/kg。富集实验共持续3d,按天计算平均富集速率,分别为0.57、0.24、0.19μg/(kg·d),第140 d时体壁未检出,平均消除速率为0.0073μg/(kg·d);呋喃西林源氨基脲, 1 d后体壁的含量为0.52μg/kg,之后含量逐渐上升,到3 d时,含量达到最大1.00μg/kg。富集实验共持续3 d,按天计算平均富集速率,分别为0.52、0.26、0.22μg/(kg·d),第160 d时体壁未检出,平均消除速率为0.0064μg/(kg·d)。跟踪监测至180 d时,非呋喃西林源氨基脲和呋喃西林源氨基脲在刺参体壁内均未检出,半衰期分别为1045.7 h和1224.2 h,呋喃西林源大于非呋喃西林源。内脏的富集和消除速率相对较快,但内脏中氨基脲残留量大于体壁,所以降至未检出所需时间更长。结论在投喂过呋喃西林或暴露于一定浓度氨基脲的刺参,需经较长时间净化后才能降至未检出。     

小麦粉及其制品中偶氮甲酰胺检测方法研究进展

偶氮甲酰胺（azodicarbonamide,ADA）是小麦粉常用的食品添加剂,具有增白、强筋作用。ADA在湿热环境下不稳定,能够转化为联二脲（biurea,BIU）和氨基脲（semicarbazide,SEM）。SEM是兽药呋喃西林的代谢物,具有较强的致癌、致畸、致突变作用。小麦粉及其制品中ADA检测方法可分为直接检测法和间接检测法,直接检测法以ADA为目标检测物,间接检测法以BIU和SEM为目标检测物。本文综述了小麦粉及其制品中ADA检测方法研究进展,分析了我国现行ADA检测标准存在的问题,展望了ADA分析检测研究的发展趋势,为ADA分析检测研究与实践提供参考。     

对甲苯磺酰氨基脲的合成工艺研究

以甲苯、氯磺酸、水合肼、氰酸盐等为原料 ,通过三步反应合成聚丙烯用高效发泡剂对甲苯磺酰氨基脲。研究表明 ,加入一定量的铵盐可提高制备对甲基苯磺酰氯中间体的反应温度 ,从而使其收率增加 ;用四氢呋喃做溶剂比用苯做溶剂可以得到较高产率的对甲基苯磺酰肼中间体 ;反应温度对终产物的收率影响较大。     

间接竞争化学发光酶免疫法检测动物源食品中的 呋喃西林代谢物

目的建立动物源食品中呋喃西林代谢物间接竞争化学发光酶免疫检测方法。方法采用活化酯法将衍生后的呋喃西林代谢物半抗原与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)偶联成为包被原;其次,对化学发光液体系、包被原和单克隆抗体的最优稀释倍数及其他反应条件进行优化;最后对该法的灵敏度、特异性、精密度及准确度进行评价。结果化学发光液A液为8 mmol/L对碘苯酚溶液和10 mmol/L鲁米诺溶液(1:1,V:V)混合,B液为每10 m L三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲液加5μL 30%H_2O_2溶液,A液与B液临用前体积比1:1混匀;最优反应条件是包被原和单抗稀释倍数均为800,封闭液为1%脱脂乳,竞争时间30 min,酶标二抗孵育60 min;该法的线性方程为Y=-0.4654X+0.3768(r~2=0.993),线性范围为0.123~2.398 ng/m L,IC50为0.544 ng/m L,批内和批间变异系数分别为1.9%~4.1%和2.8%~5.3%,空白鸡肉样品添加回收率为89.6%~98.0%。结论该检测方法简单快速,可用于实验室或现场动物源食品中呋喃西林代谢物的筛查。     

双标记1-氨基乙内酰脲盐酸盐-(2-~(13)C,~(15)N_3)的合成

以氨基脲盐酸盐-(2-13C,15 N3)为原料,经与苯甲醛缩合,在乙醇钠催化作用下,与氯乙酸乙酯缩合环化制得1-苯亚甲基氨基乙内酰脲,最后盐酸水解,制得1-氨基乙内酰脲盐酸盐-(2-13 C,15 N3)。合成路线优势在于反应条件温和,产物总收率高于65%。产品经IR、HPLC、NMR和MS表征结果表明:化学纯度>98.4%,13C同位素丰度>98%,15 N同位素丰度>99%。     

呋喃西林代谢物单克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定

为建立呋喃西林代谢物氨基脲（semicarbazide，SEM）的免疫学检测方法，采用碳化二亚胺法成功合成人工免疫抗原SEM-牛血清白蛋白（bovine serum albumen，BSA）（SEM-BSA），并用该抗原免疫BALB/c小鼠，采用聚乙二醇介导的细胞融合技术制备SEM的单克隆抗体（SEM mAb），采用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单抗，并对其效价、敏感性、特异性和亲和力等免疫学特性进行鉴定。结果表明：成功制备SEM单克隆抗体SEM-3D9，抗体效价达到1∶5×106，敏感性半抑制质量浓度为0.42 μg/L，亚型为IgG1，亲和常数Ka=2.1×108 L/mol，与呋喃唑酮代谢物2-NP-3-氨基-2-恶唑酮、呋喃它酮代谢物2-NP-5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮类似物的交叉反应率（cross reaction，CR）均小于0.01%，与呋喃妥因代谢物2-NP-1-氨基-2-乙内酰的CR为0.016 8%，特异性良好。     

氨基脲诱导的SD大鼠氧化应激与肝脏代谢损伤研究

目的 研究氨基脲(semicarbazide, SEM)诱导的SD雄性大鼠氧化应激与肝脏代谢损伤。方法 随机将44只SD雄性大鼠均分4组: 对照组(C组)与SEM低、中、高剂量组(L组、M组、H组), SEM剂量分别为0、7.5、15、30 mg/(kg·bw), 连续灌胃28 d。利用ELISA法测定大鼠血清SEM含量、血清与肝脏活性氧(reactive oxygen species, ROS)与8-异前列腺素F2α (8-isoprostane F2α, 8-iso-PGF2α)含量、肝脏代谢酶细胞色素P450(cytochromeP450, CYP450)、鸟苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(uridine diphosphoglucuronosyl transferases, UGT)、谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase, GST)与谷胱甘肽硫转移酶pi (glutathione S-transferase pi, GSTpi)指标以及大鼠尿液SEM含量。结果 对比C组, 各组血清SEM含量极显著升高(P<0.01), M组、H组血清ROS与H组肝匀浆8-iso-PGF2α含量显著上升(P<0.01) 。L组(P<0.05)、M组、H组(P<0.01)肝脏CYP450活力均显著下降。M组、H组UGT活力与GSTpi含量显著降低(P<0.05), GST活力无显著性。SEM尿液排泄量随时间波动, 第10 d达到排泄峰值。结论 SEM短期重复染毒使其在大鼠体内蓄积, 影响机体氧化应激与肝脏代谢酶活性, 氧化应激可能对不同代谢酶产生不同抑制作用。     

氨基脲胁迫下刺参的组织学和酶学反应

根据急性毒性试验,推导了氨基脲在刺参中的半数致死浓度值(LC_(50)),96hLC_(50)为3.72 g/L(以盐酸氨基脲计),95%置信区间为3.43 g/L～4.02 g/L。氨基脲能对刺参呼吸树、肠道和肌肉的组织结构产生一定影响。在1/5 LC_(50)组,呼吸树病变严重,肠道组织基本解体,平滑肌病变紊乱;在1/25 LC_(50)组和1/50 LC_(50)组,呼吸树、肠道和肌肉组织均呈现病变缓慢且逐步积累的现象。刺参对氨基脲的毒性作用表现为毒物兴奋效应,抗氧化酶和神经传导关键酶活性均显示先升高后降低的趋势,即先诱导后抑制,1/5 LC_(50)组刺参中毒反应最为明显。1/25 LC_(50)组超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及乙酰胆碱酯酶(ACh E)酶活性最高,其次是1/5 LC_(50)组和1/50 LC_(50)组。中浓度1/25 LC_(50)组呼吸树、肠道和肌肉最大SOD活性值分别是对照组的1.78倍、1.67倍和2.50倍。中浓度1/25LC_(50)组呼吸树、肠道和肌肉最大CAT活性是对照组的1.87倍、1.96倍和2.04倍。中浓度1/25 LC_(50)组呼吸树、肠道和肌肉最大ACh E是对照组的7.86倍、6.24倍和2.86倍。最终均趋于对照组水平,推测可能与刺参免疫疲劳有关。     

2-氨基-5-(4-甲氧苯基)-1,3,4-二唑的合成工艺研究

以对甲氧基苯甲醛为原料,通过腙化、分子内环化两步反应合成了标题化合物。实验考察了投料物质的量比,反应温度及反应时间对收率的影响,结果表明:盐酸氨基脲与对甲氧基苯甲醛的物质的量比为1.2∶1,第1步反应温度为65℃,反应时间为1.5 h,第2步反应时间为16 h,溴与1-对甲氧基苯甲亚甲基氨基脲的物质的量比为1.2∶1时为最佳反应条件,总收率68.5%。目标化合物结构经红外光谱、核磁共振氢谱及质谱等确证。     

Residues of nitrofuran antibiotic parent compounds and metabolites in eyes of broiler chickens

Nitrofuran antibiotic residues in food continue to be of international concern. The finding of sources of semicarbazide (SEM), other than through the misuse of nitrofurazone, present a challenge to the use of SEM as a definitive marker residue for this drug. Detection of intact (parent) nitrofurazone would avoid confusion over the source of SEM residues. Broiler chickens were fed sub-therapeutic nitrofuran-containing diets and their tissues were analysed for parent compounds and metabolites by liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry detection (LC-MS/MS). Depletion half-lives in muscle were longer for tissue-bound metabolite residues, 3.4 days —3-amino-2-oxazolidinone (AOZ), 3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidone (AMOZ)?—?to 4.5 days (SEM), than total metabolite residues, 2.0 days (AOZ) to 3.2 days (SEM). Metabolite concentrations were higher in eyes than in muscle. Metabolite half-lives in eyes ranged from 8.5 days (1-aminohydantoin (AHD)) to 20.3 days (SEM). Nitrofuran parent compounds were also detected in eyes. Furaltadone was detected in single eyes after 21 days’ withdrawal of a 6 mg kg^?1 furaltadone diet. When 50 eyes from broilers containing metabolites in muscle close to the 1 µg kg^?1 minimum required performance level (MRPL) were pooled into single samples, 1.2 ng of furazolidone and 31.1 ng of furaltadone were detected, but nitrofurazone was not detected due to the long depletion half-life of SEM in muscle. Further studies are required to improve LC-MS/MS nitrofurazone sensitivity and refine the sample size necessary to use nitrofurazone detection in pooled eyes as a complement to SEM detection in muscle.