护肤生物制品辅料中重组人表皮细胞生长因子抑制剂的筛选

目的筛选护肤生物制品辅料中重组人表皮细胞生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)抑制剂。方法以BALB/3T3细胞构建模型,采用MTT法对配制好的rhEGF及单组分辅料样品进行生物活性检测,筛选出对rhEGF活性有影响的辅料。通过建立的动物模型,观察rhEGF对皮肤切割伤的促愈合作用,进一步验证筛选出的辅料对rhEGF生物活性的影响。结果经细胞模型筛选的25种辅料中,大分子透明质酸钠和黄原胶显著抑制rh EGF活性。动物模型进一步验证rhEGF具有促兔表皮切割伤愈合的作用,平均愈合时间较生理盐水组提前1～3 d,并呈现良好的剂量效应,随剂量升高,促愈合作用进一步增强,剂量为100μg/m L时,促创面愈合效果最佳。0. 4%黄原胶组和10μg/mL rhEGF+0. 4%黄原胶联合给药组兔创面愈合时间均较生理盐水组晚1 d,黄原胶抑制rhEGF促皮肤切割伤愈合的作用,与细胞模型结果一致。0. 4%透明质酸钠组和10μg/m L rhEGF+0. 4%透明质酸钠联合给药组的兔创面愈合时间均较生理盐水组提前2 d,并且与10μg/mL rhEGF组愈合时间相同,与细胞模型结果不一致。结论黄原胶在细胞和动物模型中均可抑制rhEGF活性,为rhEGF在护肤生物制品中的应用配方提供了理论依据。     

混合模式介质的制备及用于清除抗体中蛋白A

针对抗体纯化过程中脱落蛋白A的清除,设计和制备了以N-苄基-N-甲基乙醇胺为功能配基的混合模式层析介质Adhere NUPharose FF,该配基兼有疏水、静电和氢键作用。采用烯丙基缩水甘油醚活化法,并对琼脂糖微球基质的活化和配基偶联条件进行了优化,优化后活化密度达260 μmol·ml^-1以上,配基密度达120 μmol·ml^-1。同时以抗体和蛋白A的混合物为研究对象来考察该介质对抗体中蛋白A的清除能力,结果表明对蛋白A的有效去除率达到83.1%,为抗体制品中蛋白A的清除提供了一种可行性方法。     

β-半乳糖苷酶的微生物细胞表面展示及其应用

β-半乳糖苷酶是一种在乳制品生产、医药、生化分析等领域得到广泛应用的酶制剂。商品化β-半乳糖苷酶多以游离形式存在,但游离的β-半乳糖苷酶制造过程复杂、稳定性低、易失活、有机溶剂耐受性差、重复利用率低,这些制约因素限制了β-半乳糖苷酶的进一步应用。将β-半乳糖苷酶通过基因工程技术固定在微生物细胞表面,该系统的优点有:1)在工业生产过程中,无需经复杂的分离纯化和固定化操作,成本低;2)稳定性高、有机溶剂耐受性强,既可用于反应条件温和又能满足复杂体系、反应条件剧烈的催化需求;3)拓展β-半乳糖苷酶在蛋白质工程研究、生物传感器制造等领域的应用。β-半乳糖苷酶表面展示所用宿主包括乳酸菌、酵母和芽孢,该文分别综述这3种宿主中β-半乳糖苷酶表面展示系统的研究进展及其在酶的生产、作为报告蛋白和全细胞生物催化方面的应用。     

交联聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)对山核桃多酚去除效果的毒理学评价

有关植物源饮料和食品原料中多酚的去除已有报道,但大多数是用多酚去除率等理化指标进行效果评估,很少有用生物学毒性指标来评估多酚去除的效果。本研究以山核桃鲜果仁水提物为例,用PVPP吸附法去除山核桃水提物中的多酚,并利用神经细胞模型的毒理学检测,评估PVPP去除多酚的效果。数据显示,用PVPP吸附法处理山核桃水提物可以显著地去除多酚(p0.01),以40mg PVPP对500mg山核桃仁的比例处理10min,多酚去除率可达到84.6%。进一步用荧光显微镜观察细胞形态和MTT法测定细胞活力的细胞毒理学测定表明,未经PVPP处理的山核桃水提物显著(p0.01)地增加了人类SH-SY5Y-EGFP神经肿瘤细胞和人类HUVEC正常细胞的死亡率,并呈现明显的剂量效应;而PVPP去除多酚的山核桃水提物没有显著地引起SH-SY5Y-EGFP神经肿瘤细胞和HUVEC正常细胞的死亡(p0.05)。以上结果表明山核桃鲜果仁水提物因为含有较多的多酚物质,对人类肿瘤细胞和正常细胞都具有显著的体外细胞毒性(p0.01),以此为毒理学评估指标,发现PVPP处理可以大量地去除多酚,降低山核桃果仁水提物中多酚的细胞毒性。     

混合模式介质的制备及用于清除抗体中蛋白A

针对抗体纯化过程中脱落蛋白A的清除,设计和制备了以N-苄基-N-甲基乙醇胺为功能配基的混合模式层析介质Adhere NUPharose FF,该配基兼有疏水、静电和氢键作用。采用烯丙基缩水甘油醚活化法,并对琼脂糖微球基质的活化和配基偶联条件进行了优化,优化后活化密度达260μmol·ml~(-1)以上,配基密度达120μmol·ml~(-1)。同时以抗体和蛋白A的混合物为研究对象来考察该介质对抗体中蛋白A的清除能力,结果表明对蛋白A的有效去除率达到83.1%,为抗体制品中蛋白A的清除提供了一种可行性方法。     

碱性木聚糖酶高产菌株的筛选鉴定、酶学性质检测及培养条件优化

目的 筛选碱性木聚糖酶的高产菌株，并对其进行分子鉴定、酶学性质检测及培养条件优化。方法 采集山西、河南和浙江农田土壤样品，通过富集培养及分离后进行16S rDNA鉴定，筛选碱性木聚糖酶的高产菌株，并检测其酶学性质。单因素试验优化发酵条件，包括培养基碳源(木聚糖、乳糖、可溶性淀粉、蔗糖、麸皮、葡萄糖)、氮源[草酸铵、蛋白胨、酵母粉、(NH₄)₂SO₄、NH₄Cl、NaNO₃、尿素、牛肉膏、大豆粉、KNO₃、(NH₄)₂HPO₄或以蛋白胨、酵母粉、牛肉膏、(NH₄)₂HPO₄、大豆粉两两随机组合]、金属离子[CuCl₂、MgCl₂、ZnCl₂、Al₂(SO₄)₃、CoCl₂、Mn...