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研究大肠杆菌表达的重组人角质细胞生长因子-Ⅰ型N端缺失突变体(△N23KGF-Ⅰ)的mPEG-马来酰亚胺(mPEG-maleimide、mPEG-Mal)修饰工艺及修饰位点和初步体外生物活性。首先修饰得到聚乙二醇化的△N23KGF-Ⅰ,然后对△N23KGF-Ⅰ作还原和非还原质量肽图,确定其各肽段,对△N23KGF-Ⅰ-m PEG-Mal-20K做还原质量肽图,确定修饰位点。最后,通过BAF-3细胞对△N23KGF-Ⅰ国际标准品、△N23KGF-Ⅰ、△N23KGF-Ⅰ-m PEG-Mal-20K测活。结果表明,在尿素环境下,mPEG-MAl被均一修饰在△N23KGF-I的Cys40位。与国际活性标准品相比,△N23KGF-Ⅰ的活性保留了116%,△N23KGF-Ⅰ-m PEG-Mal-20K的活性保留了36%。 相似文献
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将重组可逆转水蛭素(G4-HV1)的cDNA序列插入工程质粒pPIC9K,构建表达质粒pPIC9K-G4-HV1,并电转至毕赤酵母GS115;然后进行高表达筛选,表达后的菌液经离心、纯化得到了纯度95%以上的G4-HV1;最后通过生色底物法测定G4-HV1抗凝活性约为14 000ATU。与凝血酶结合的动力学实验表明,G4-HV1可被凝血酶逆转,可逆转率为30%～40%。 相似文献
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