C、Y、W 135群脑膜炎球菌荚膜多糖化学结构核磁共振检测方法的建立

目的建立基于核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)技术检测C群脑膜炎球菌荚膜多糖(group C meningococcal capsular polysaccharide,GCMP)、Y群脑膜炎球菌荚膜多糖(GYMP)和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖(GWMP)化学结构的方法。方法建立1H-NMR检测方法:使用布鲁克600 MHz超导傅里叶核磁共振谱仪,配置5 mm BBO正向宽带高分辨液体探头。脉冲程序为水峰压制(zgpr),温度为298 K(25℃)。具体参数设置如下:中心频率约为4.7 ppm;图谱宽度为7 211 Hz;采样时间为2.272 s;弛豫延迟时间为2 s;扫描次数为512次;信号经傅里叶转换后加入1.0 Hz的窗口函数,检测结果使用Topspin 3.0软件进行处理。验证该方法的专属性、重复性及中间精密性。结果 5批GCMP、GYMP和GWMP检测结果的CV值均小于0.35%;3个浓度GCMP、GYMP和GWMP在相同的操作条件下以及不同工作日间、不同实验员间的检测结果的CV值均小于0.35%。结论建立的1H-NMR检测方法简便、快速、准确,检测GCMP、GYMP和GWMP具有极高的专属性、重复性和中间精密性,适用于疫苗生产研究中GCMP、GYMP和GWMP样品的定性结构鉴定。     

重组铜绿假单胞菌外毒素A工程菌发酵及表达产物的纯化

目的建立稳定、高效表达重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA)的工程菌发酵及表达产物纯化工艺。方法规模化发酵表达rEPA的重组大肠杆菌rPE553D,离心收集菌体,渗透压调解使菌体周质间隙蛋白释放后,高速离心收集蛋白溶液。经DEAESepharoseFF、PhenylSepharose6FF疏水层析和SOURCE30Q强离子交换层析,超滤浓缩纯化rEPA。用HPLC、SDS-PAGE和Westernblot等方法检定生化和免疫学特性,并用小鼠和Vero细胞检定毒性。结果每55L培养基中rEPA产量超过4g,纯度在95%以上,细胞毒性降低了至少32000倍。其余各项指标均符合《中国生物制品规程》要求。结论已建立了收率高、纯度好、稳定、适合规模化生产rEPA的工艺。     

冷铁在压铸模排气系统中的应用

要获得优质的压铸件,除了合理设计浇注系统,正确地控制工艺参数外,排气系统的设计也是极为重要的一个环节.无数的事实证明在压铸过程中有效地从型腔中排除气体,对提高压铸件质量有着重要的现实意义.     

18C型肺炎球菌荚膜多糖-TT结合物中多糖片段长度对其免疫原性的影响

目的研究18C型肺炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素(TT)结合物中多糖片段的大小对其免疫原性的影响。方法采取乙酸水解多糖,Sephacryl S-300(XK-50)柱纯化多糖片段,ADH法制备结合物,免疫小鼠,检测血清的ELISA抗体滴度、亲和力以及调理吞噬能力。结果得到重复单位数分别为27、25、19、12、10、9和8的多糖片段。与TT制备的结合物在小鼠体内均能诱导产生IgG型抗体,并存在加强免疫效应,表现出T-细胞依赖型抗体免疫反应。随着链长度的缩短,血清GMT有增加的趋势,但只有8RUPn18C-TT与27RUPn18C-TT组之间差异有显著意义。当吞噬率为50%时,血清的稀释倍数分别为35.10、39.60、45.71、104.71、117.00、145.50和478.60。此趋势与抗体滴度呈正相关,但各组间亲和力差异无显著意义。结论较短多糖片段制备的结合物免疫原性高,血清GMT高,调理吞噬能力也强。     

血清抗b型流感嗜血杆菌磷酸多聚核糖基核糖醇抗体杀菌活性体外检测方法的建立

目的 建立免疫血清中抗b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)磷酸多聚核糖基核糖醇(Polyri-bosylribitol phosphate,PRP)抗体体外血清杀菌试验(Serum bacterialcid assay,SBA)方法。方法通过对补体和指示菌株的筛选,建立体外测定血清中抗Hib-PRP抗体杀菌试验方法,并对实验体系的耐变性、特异性及精密性进行验证。结果指示菌Hib-EAGAN株与Hib阳性血清显示出良好的杀菌特异性,其平均非特异性杀菌率为0;Pel-Freez公司提供的4批补体中,批号为17830的补体具有良好的杀菌稳定性和特异性;经验证,建立的Hib-SBA体系具有良好的耐变性和特异性,其精密性CV值在16%～28%之间。结论成功建立了血清抗Hib-PRP抗体杀菌活性体外检测方法,该方法具有检测样本量大、省时、易标准化等优点。     

C群脑膜炎球菌家兔免疫血清的制备及其群特异性和相关方法专属性分析

目的制备C群脑膜炎球菌家兔免疫血清,并进行群特异性和相关方法专属性分析。方法用制备的C群脑膜炎球菌菌液免疫青紫兰家兔,经耳缘静脉注射8×109个/ml菌液,0.5~1.0 ml/只,每周1、3、5免疫,共免疫4周,于第6周开始加强免疫,每周2次,连续3周,于末次免疫1周后,经颈动脉采血,分离血清,采用免疫双扩散法检测血清效价。采用ELISA、Western blot及火箭免疫电泳法分析其群特异性和相应方法专属性。结果建立了家兔免疫血清制备方法,制备的3份(1、2、3)免疫血清相应多糖抗体效价分别为1︰8、1︰8和1︰16。自制免疫血清1、3在使用工作浓度下,符合免疫学质量控制ELISA方法的特异性和专属性要求。自制免疫血清3可作为C群脑膜炎球菌结合物Western blot检测的Anti-PS血清,在该检测灵敏度下可完全达到与破伤风类毒素(TT)无交叉反应;血清1、2的轻微交叉反应可通过相应抗原预吸收血清消除,从而达到结合物Western blot检测的Anti-PS使用要求。自制3份免疫血清均可用于火箭免疫电泳分析。结论自制的家兔免疫血清可替代商品诊断血清,并达到了ELISA、Western blot及火箭免疫电泳法群特异性和相应方法专属性要求,可用于对C群脑膜炎球菌结合物制备过程的多糖抗原性分析及结合疫苗质量控制。     

不同方法制备的1型肺炎球菌多糖-蛋白结合疫苗生化及免疫学特性比较

目的对两种方法制备1型肺炎球菌荚膜多糖-蛋白结合疫苗的生化及免疫学特性进行比较。方法分别采用溴化氰活化法与胺还原法制备结合物,并对其进行生化及免疫学检测。结果采用溴化氰活化法制备的结合物,较胺还原法具有较高的结合率及高分子结合物含量,免疫小鼠产生的抗体效价较胺还原法明显提高。结论采用溴化氰活化法制备1型肺炎球菌荚膜多糖-蛋白结合疫苗优于胺还原法。     

人血清中A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖IgG抗体含量ELISA检测方法的建立

目的建立人血清中抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖Ig G抗体含量的ELISA定量检测方法,并进行验证。方法筛选适用的酶标板,优化抗原包被浓度,确定ELISA检测过程的关键条件,对建立的ELISA方法的特异性、线性、准确性、精密度、最低检测值和稳定性进行验证,并建立实验室质控血清的质控检测范围。结果酶标板的板内CV为9.8%,板间CV为16.4%,符合检测使用要求。免疫血清经多糖吸收后,群特异性抗体含量与同群多糖吸收剂量呈明显的剂量依赖关系。12份美国CDC质控血清中各群Ig G抗体含量与血清的稀释度呈负相关,相关系数(r)和斜率(slope)均接近-1,线性关系良好;检测结果与CDC公布数据一致性良好,一致性相关系数A、C、W135、Y群分别为0.912 5、0.939 6、0.963 7和0.920 6,准确度较好。实验室内部质控血清Men20中各群Ig G抗体含量试验内和试验间精密度分别小于10%和20%,精密度较好;各血清群别的CV值均30%,稳定性较好;A、C、Y、W135群多糖Ig G抗体含量最低检测值分别为0.092、0.118、0.067和0.035μg/ml,质控血清的检测范围分别为:92.49~36.53、37.29~17.69、66.18~25.54和50.15~23.31μg/ml。结论建立了标准化的检测人血清中抗A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖Ig G抗体含量的定量ELISA方法,并确定了实验室日常用质控血清Men20的质控检测值范围。     

汽车电喷节气门体压铸模的设计构思

ＨＧＤ5 0产品是我公司为德尔福 (ＤＥＬＰＨＩ)公司开发的汽车电喷节气门体系列之一。为保证产品的内在组织品质 ,采用液压抽芯器将两怠速旁通斜孔抽成 ,但因两怠速旁通斜孔型芯须穿越动模和侧型 ,且角度又为空间角 ,为了保证模具动作无误 ,采用三维软件ＳｏｌｉｄＷｏｒｋｓ设计模具。1　零件的工艺性该零件属铝合金压铸件 ,由于铝合金浇注温度高 ,容易粘模具 ,且零件结构紧凑 ,尺寸精度、形位精度及内在组织品质要求较高。特别是两怠速旁通斜孔和步进电机孔 3孔汇聚处 ,是铸件组织肥大部位。容易形成热节点、气孔、缩孔等压铸缺陷 ,在铸…     

双价痢疾结合疫苗的安全性及免疫原性

目的　研究双价痢疾结合疫苗的安全性及免疫原性。方法　将福氏 2aO -SP- rEPA结合疫苗和宋内氏O -SP- rEPA结合疫苗混合制备成双价痢疾结合疫苗 ,对该双价结合疫苗的安全性及免疫原性与痢疾单价结合疫苗进行比较。结果　双价痢疾结合疫苗安全可靠 ,在 4℃放置 0月、6月、12月与单价结合疫苗相比 ,小鼠血清抗体应答水平差异无显著性意义。结论　混合后没有改变两个单价结合疫苗的特性 ,且稳定性良好 ,可预防福氏 2a、宋内氏痢疾菌所引起的感染。