腐植酸钠在提高球磨效率中的机理研究

腐植酸钠是一种表面活性剂,在粉碎泥料的球磨加工过程中作助磨剂,它不仅能使泥料粘度降低,易分散,不易沉聚集;而且能降低泥料的表面自由焓,并可自动地渗入到泥料颗粒的微细裂缝中,起着劈裂作用。球磨机旋转的外力作用和球石的打击作用,能加大泥料颗粒裂缝或将其分解成更小的颗粒,从而提高球磨效率。     

鸡贫血病毒VP3基因诱导人肺癌细胞SPC-A1凋亡的作用机制

探索了重组质粒pVVP3对人肺癌细胞SPC-A1的作用及机制.将pVVP3经脂质体介导转染人肺癌细胞SPC-A1,通过MTT方法检测了细胞活力;采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色分析了肿瘤细胞凋亡;采用罗丹明123和DCFA染色测定了线粒体跨膜电位(△Ψm)和活性氧水平变化;通过底物染色反应检测了Caspase-3活性.检测分析结果表明:重组质粒pVVP3转染人肺癌细胞SPC-A1后,细胞活力明显降低; AO/EB染色可见明显的细胞凋亡形态学变化;与空质粒对照相比,线粒体△Ψm下降(P＜0.01),活性氧水平升高(P＜0.05),Caspase-3活性增强(P＜0.01).以上结果提示,重组质粒pVVP3能够通过上调ROS水平,下调线粒体△Ψm,进而激活Caspase-3,最终诱导人肺癌细胞凋亡.     

基因治疗用质粒DNA的制备工艺

目的探索基因治疗用质粒DNA的制备工艺。方法以CaCl2沉淀法去除大分子RNA,Q-Sepharose和SOURCE两步离子交换层析法去除染色体DNA、小分子RNA、蛋白质等杂质,并对各步骤样品进行检测。结果质粒pIRVP3HNIL18终产品的产量为1.638mg质粒DNA/g细菌,纯度为1.839,相对回收率为12.55%,蛋白质含量为0.0028mg/ml,未检测到RNA和染色体DNA。结论此工艺可有效去除质粒DNA制备过程中产生的杂质,可应用于药剂水平质粒DNA的制备。     

鸡贫血病毒VP3基因与人IL-18基因的共表达对人肝癌细胞BEL-7402的作用

目的利用凋亡素和IL18基因的抗肿瘤优势,设计构建共表达凋亡素和hIL-18基因的真核重组子,检测其在体外对人肝癌细胞BEL7402的作用效果,旨在探索新的肿瘤基因治疗方法。方法将凋亡素VP3基因与hIL-18基因一同克隆到真核表达载体pVAX1上,构建重组质粒pVVP3IL-18,经脂质体介导,转染人肝癌细胞BEL7402,AO/EB染色,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪分别分析凋亡细胞的形态学变化、DNA断裂情况和不同细胞周期的DNA含量变化,透射电镜分析凋亡细胞超微结构变化。结果随着转染时间的延长,重组质粒pVVP3IL18所表达的目的蛋白对BEL7402细胞的杀伤作用逐渐增强,作用48h,形态学观察表明BEL7402细胞发生明显的凋亡,凋亡率可达(56.5±11.9)%,并且大部分细胞为TUNEL阳性着色,流式细胞术分析可见明显的亚二倍体凋亡峰,透射电镜观察可见细胞核固缩、染色质聚集等典型的凋亡超微结构变化。结论联合应用凋亡素与hIL18基因,在体外对人肝癌细胞BEL7402具有明显的凋亡诱导作用。