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目的:探讨 p53正向细胞凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA)/p53促凋亡蛋白(apoptosis stimulating protein of p53,ASPP)1融合基因及单个基因对胃癌 SGC-7901细胞的杀伤作用。方法通过脂质体(lipofectamine)2000TM 将 PUMA/ASPP1融合基因及 PUMA、ASPP1单个基因分别转染胃癌SGC-7901细胞系[实验设5组,分别为胃癌细胞无转染空白对照(SGC-7901)组,空载质粒转染细胞对照(SGC-7901-pcDNA3.1)组以及重组 ASPP1质粒转染细胞实验(SGC-7901-ASPP1)组、重组 PUMA 质粒转染细胞实验(SGC-7901-PUMA)组、重组 PUMA/ASPP1质粒转染细胞实验(SGC-7901-PUMA/ASPP1)组],再次经 G418筛选,获得稳定表达融合基因 SGC-7901-PUMA/ASPP1细胞株。通过 MTT 法及使用流式细胞仪测定各组胃癌SGC-7901系细胞的存活数(光吸收度即 A 值)及细胞周期。结果SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3.1组 A 值比较差异无统计学意义(P >0.05);SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA 组和 SGC-7901-PUMA/ASPP1组 A值明显低于 SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3.1组(均 P <0.01);SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA 组和SGC-7901-PUMA/ASPP13组中,SGC-7901-PUMA/ASPP1细胞组 A 值最低(P <0.01)。与 SGC-7901组、SGC-7901-pcDNA3.1组比较,SGC-7901-ASPP1、SGC-7901-PUMA、SGC-7901-PUMA/ASPP1组的 G1期明显增多,S 期明显减少,尤以 SGC-7901-PUMA/ASPP1组 S 期减少为甚(均 P <0.01);SGC-7901-pcDNA3.1组与 SGC-7901组比较 G1期、S 期差异无统计学意义(P >0.05)。结论双抑癌基因可有效抑制胃癌 SGC-7901系细胞增殖,双抑癌基因较单个抑癌基因具有更强的抗肿瘤作用。 相似文献
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目的:研究外源性 p53正向细胞凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA)基因对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响。方法制备 PUMA 基因并插入 pcDNA 3.1(-)质粒,观察其转染胃癌SGC-7901细胞后 PUMA 蛋白的表达并用 MTT 法检测细胞的增殖力[实验设3组,分别为无转染空白胃癌细胞对照(SGC-7901)组,空载质粒转染胃癌细胞对照(SGC-7901-pcDNA3.1)组及重组 PUMA 质粒实验(SGC-7901-pcD-NA3.1-PUMA)组]。结果PUMA 经限制性核酸内切酶切及测序分析,与预期结果吻合。转染质粒后,SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3.1组 PUMA 表达比较差异无统计学意义(P >0.05,相对表达量分别为0.24±0.01和0.23±0.01),SGC-7901-pcDNA3.1-PUMA 组与另2组比较 PUMA 表达明显增高(P <0.05,相对表达量为0.39±0.01)。SGC-7901、SGC-7901-pcDNA3.1和 SGC-7901-pcDNA3.1-PUMA 组的 A 值分别为0.43±0.04、0.46±0.04和0.32±0.03,SGC-7901-pcDNA3.1-PUMA 组与另2组比较明显下降(均 P <0.01),SGC-7901组与SGC-7901-pcDNA3.1组比较差异无统计学意义(P >0.05)。结论外源性人类 PUMA 基因对胃癌细胞增殖有抑制作用。 相似文献
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