苏丹红Ⅰ多克隆抗体的制备研究

研究制备抗苏丹红Ⅰ的多克隆抗体.采用混合酸酐法合成免疫抗原苏丹红Ⅰ明胶,按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗苏丹红Ⅰ多克隆抗体.采用酶联免疫吸附法鉴定抗血清中抗苏丹红Ⅰ多克隆抗体效价.结果表明,苏丹红Ⅰ抗体的效价为1:8 000,可用于苏丹红Ⅰ的免疫学检测.     

胶体金免疫层析法快速检测食品中苏丹红I残留

通过设计合成苏丹红I衍生物,将其与明胶用混合酸酐法合成苏丹红I-明胶免疫抗原,免疫新西兰白兔制备抗苏丹红I多克隆抗体.采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒大小为24.5 nm的胶体金,并制备苏丹红I-BSA抗原-胶体金复合物,组装检测试纸.实验结果表明,试纸条法的苏丹红I检测线为15 μg/kg,抗苏丹红I抗体与苏丹红Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ均无交叉反应性,与高效液相测定差异不显著.检测时间5min,适用于食品中苏丹红I残留的快速检测.     

隐性孔雀石绿多克隆抗体的制备及鉴定

研究制备孔雀石绿(MG)代谢物隐性孔雀石绿(LMG)多克隆抗体进而间接鉴定鱼体中孔雀石绿的残留。首先利用化学方法合成含羧基的隐性孔雀石绿衍生物(CLMG),然后采用碳化二亚胺法偶联牛血清白蛋白(BSA)合成免疫抗原隐性孔雀石绿-BSA,按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗隐性孔雀石绿多克隆抗体。采用间接酶联免疫吸附实验(iELISA)测定抗血清中抗隐性孔雀石绿多克隆抗体效价。结果表明：抗隐性孔雀石绿的抗体效价为1: 32000,可用于隐性孔雀石绿的免疫学检测。     

麦角碱的提取与分离纯化

通过大孔树脂D-101吸附法提取雀稗麦角菌发酵液中麦角总碱粗品。采用硅胶薄板层析确定粗品组分及洗脱条件,进行碱性硅胶柱低压层析,单因素实验确定洗脱溶剂的比例及洗脱次数,最终分离纯化得到麦角总碱,计算总回收率。结果表明：总生物碱回收率为77.6%。硅胶层析分离上样量与硅胶质量比为1∶20,去杂洗涤剂为氯仿：甲醇=5∶1（V/V）的混合液,依次洗涤5次。用氯仿-甲醇2∶1（V/V）的洗脱剂洗脱,得到麦角总碱;从雀稗麦角菌发酵液中提纯麦角碱法回收率及纯度较高,具有广阔的应用前景。     

胶体金免疫层析法快速检测食品中金霉素残留

研究食品中金霉素残留的胶体金免疫层析法的快速检测方法。采用戊二醛交联法制备金霉素-BSA 免疫抗原,按照常规的免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗金霉素多克隆抗体。纯化后的抗体用ELISA 法检测其特异性和效价。采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒大小为15nm 的胶体金,并制备抗体- 胶体金复合物,以组装检测试纸。通过可见的颜色深浅,检测样品中金霉素的残留量。结果表明：试纸条法的金霉素检测限为0.7μg/mL,在四环素质量浓度大于1.0μg/mL 时,与金霉素存在交叉反应性,其结果与高效液相色谱法测定的结果一致。本方法检测时间仅需5min,适用于食品中金霉素残留的快速检测。     

ELISA法测定热加工食品中的丙烯酰胺

该研究建立了热加工食品中丙烯酰胺的间接竞争ELISA检测方法.首先用戊二醛法合成丙烯酰胺-BSA免疫抗原,注入兔体内以产生抗丙烯酰胺多克隆抗体.结果显示,在包被抗原为1.5μg/mL,抗体稀释度为1∶16000倍的优化条件下,间接ELISA法检测范围为50μg/L～1280μg/L,IC50为检测限为350μg/L,最低检测限为50μg/L.加标回收率为92.6%～95.5%.该检测方法准确快速,特异性强,适用于热加工食品中丙烯酰胺的快速检测.     

雀稗麦角菌原生质体诱变育种及发酵条件研究

为获得麦角碱高产菌株,提高雀稗麦角菌（Claviceps paspali strain 3103）发酵的产碱率,用溶壁酶水解处理菌丝体、不同浓度的亚硝基胍诱变处理制备的原生质体,经再生培养获得诱变菌株,再经紫外初筛后进行发酵复筛,采用Van—Urk方法测定产碱量。筛选得到的高产菌株进行二级发酵并优化其发酵条件。实验结果表明,经亚硝基胍诱变处理,麦角总碱的产率由90mg／L提高到了1600mg／L,增加了约16倍;单位产碱率由22．5mg／L／g提高到了400mg／L／g,增加了约17倍;连续传代培养可以得到稳定的高产菌株,接种量为20％时可有效缩短发酵周期。结果表明,用亚硝基胍对原生质体进行诱变处理可有效提高C．papspali的产碱率。     

不同纯化兔抗苏丹红ⅠIgG方法的比较

采用辛酸-硫酸铵法和亲和层析法两种方法纯化兔抗苏丹红I IgG。纯化产物通过BCA法、琼脂双向扩散、SDS-PAGE凝胶电泳试验进行蛋白浓度、效价及纯度的验证。实验结果表明,利用辛酸硫酸铵纯化的产物蛋白质浓度高于亲和层析法,但经亲和层析纯化的产物纯度和效价均优于饱和硫酸铵。因此亲和层析法是一种快速高效的纯化方法,纯化产物可适用于免疫学检测方法的研究,为今后食品中苏丹红添加剂的快速检测奠定了良好的基础。