大豆主要过敏原Gly m Bd 28K基因的克隆表达、纯化及多抗血清的制备

RT-PCR克隆大豆主要过敏原Gly m Bd 28K基因,根据序列设计引物,扩增目的基因的开放阅读框,与MBP载体连接,测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,并用IPTG诱导表达.亲和层析法纯化重组蛋白,SDS-PAGE验证蛋白的纯度,免疫新西兰大白兔,收集多抗血清,用ELISA法测效价.扩增出含Gly m Bd 28K目的基因片段,诱导并获得高浓度和预期相符的表达产物,经层析纯化出Gly m Bd 28K蛋白,免疫新西兰大白兔,获得效价为1∶1.6×106多抗血清.     

细菌发酵产黄姜薯蓣皂苷元的分离纯化

黄姜经细菌发酵水解其薯蓣皂苷糖基,产物皂苷用正丁醇萃取法收集;采用经硅胶柱层析法分离纯化转化的皂苷,得到两种转化的单体皂苷产物Ⅰ和产物Ⅱ。采用薄层层析法及高效液相色谱法进行检测,得知产物Ⅰ为目的产物薯蓣皂苷元,得率为20%,纯度为96.9%,产物Ⅱ的结构和特征有待进一步研究。     

细菌发酵产黄姜薯蓣皂苷元的分离纯化

黄姜经细菌发酵水解其薯蓣皂苷糖基,产物皂苷用正丁醇萃取法收集;采用经硅胶柱层析法分离纯化转化的皂苷,得到两种转化的单体皂苷产物Ⅰ和产物Ⅱ。采用薄层层析法及高效液相色谱法进行检测,得知产物Ⅰ为目的产物薯蓣皂苷元,得率为20%,纯度为96.9%,产物Ⅱ的结构和特征有待进一步研究。     

苏丹红Ⅰ多克隆抗体的制备研究

研究制备抗苏丹红Ⅰ的多克隆抗体.采用混合酸酐法合成免疫抗原苏丹红Ⅰ明胶,按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗苏丹红Ⅰ多克隆抗体.采用酶联免疫吸附法鉴定抗血清中抗苏丹红Ⅰ多克隆抗体效价.结果表明,苏丹红Ⅰ抗体的效价为1:8 000,可用于苏丹红Ⅰ的免疫学检测.     

牛布鲁氏杆菌杂交瘤细胞株的筛选及其单克隆抗体鉴定

采用牛型A544布鲁氏杆菌膜蛋白为抗原,筛选出BBH—C_9杂交瘤细胞株。所分泌免疫球蛋白亚类为IgG_1,染色体数为105.1±3.3,培养液抗体滴度为1:100,小白鼠腹水抗体滴度为1:12800;单克隆抗体亲积力为4.5×10~8L/M,分子量重链5.6×10~4道尔顿,轻链为2.4×10~4道尔顿。用免疫亲和层析法和辛酸——硫酸铵法纯化抗体导致其蛋白质含量和抗体活性分别为15％、30.03％和55％、75％。     

穿山龙薯蓣皂苷酶解产物的分离纯化

用柱层析法对穿山龙薯蓣皂苷酶解产物进行分离纯化(硅胶柱中以氯仿甲醇洗脱),得到2种单体皂苷和皂苷元。经薄层层析检测,纯化的单体皂苷1为3 (O) (β D 吡喃葡萄糖基) 薯蓣皂苷,得率为样品的33.95%,用高效液相色谱法检测其纯度为93.82%。产物2的结构和特征有待进一步研究。     

苏丹红的单扫描极谱分析研究

采用单扫描极谱法研究了苏丹红Ⅰ的极谱行为,旨在建立一种简单、快捷和灵敏的检测苏丹红Ⅰ含量的单扫描极谱分析方法。实验采用三电极系统（DME为工作电极,Pt电极为对电极,SCE为参比电极）,以KCl和丙酮为底液,发现苏丹红Ⅰ在-1.35 V左右处有一个灵敏的二阶导数的极谱峰,其二阶导数极谱波峰高与苏丹红Ⅰ的浓度在0.10-3.50μg/mL范围内呈较好的线性关系,相关系数为0.992 8,苏丹红Ⅰ的回收率为95%-105.2%,最小检测限为0.089 0μg/mL。在最佳实验条件下,考察了可能共存的金属离子Al^3＋、Fe^3＋、Fe^2＋、Cu^2＋、Pb^2＋对苏丹红Ⅰ测定的影响,峰高和峰电位有不同程度的变化。利用二阶导数的极谱波建立了苏丹红Ⅰ含量的单扫描极谱分析方法,并应用这种方法对5种可能添加苏丹红Ⅰ的食品进行了测定,实验结果显示利用苏丹红Ⅰ在Ep约为-1.35 V时的二阶导数极谱波对样品进行极谱分析的方法快速、准确。     

穿山龙薯蓣皂苷酶解产物的分离纯化

用柱层析法分离纯化穿山龙薯蓣皂苷的酶解产物,硅胶柱中的流动相为氯仿与甲醇的不同比例,经硅胶柱分离得到薯蓣皂苷酶解产物的两种单体,为产物Ⅰ和产物Ⅱ,用薄层层析法和高效液相色谱法检测,得到产物Ⅰ为3-(O)-(-βD-吡喃葡萄糖基)-薯蓣皂苷元,得率为17.85%,纯度为69.41%。同时得到产物Ⅱ,得率为1.64%。产物2为反应副产物,其结构、性质及药理作用有待于进一步研究。     

穿山龙薯蓣皂苷酶解产物的分离纯化

用柱层析法对穿山龙薯蓣皂苷酶解产物进行分离纯化(硅胶柱中以氯仿甲醇洗脱)，得到2种单体皂苷和皂苷元。经薄层层析检测，纯化的单体皂苷1为3-(O)-(β-D-吡喃葡萄糖基)-薯蓣皂苷，得率为样品的33．95％，用高效液相色谱法检测其纯度为93．82％。产物2的结构和特征有待进一步研究。     

高灌蓝越橘多酚氧化酶的提取和纯化

采用丙酮粉沉淀抽滤法、硫酸铵分级沉淀法及苯基琼脂糖疏水性层析法对高灌蓝越橘多酚氧化酶进行提取和纯化。在提取和纯化中,用加入不同的酚吸收剂和抑制剂并比较酶活性的高低来确认最佳方法。结果表明在粗提中加入酚吸收剂、增溶剂和抑制剂提取效果较好,苯基琼脂糖疏水性层析法对此类酶纯化效果较佳并为后来的辅酶的分离提供了较高的纯化倍数。     

醛化鸡红细胞吸附释放结合NP-40法纯化新城疫病毒蛋白

采用醛化鸡红细胞吸附释放结合NP-40法纯化鸡胚尿囊液中的新城疫病毒蛋白.通过收集纯化的新城疫病毒,并测定新城疫病毒血凝效价和进行9%SDS-PAGE电泳,以测定新城疫病毒蛋白的纯度.用该方法纯化的新城疫病毒血凝效价为1∶256,进行9%SDS-PAGE电泳后,发现得到的新城疫病毒蛋白不含鸡胚尿囊液蛋白,是纯度较高的新城疫病毒蛋白.以上结果表明,醛化鸡红细胞吸附释放法结合NP-40法是一种经济实用、操作简便,并有较高纯化效率的方法.     

穿山龙薯蓣皂苷酶解产物的分离纯化

用柱层析法分离纯化穿山龙薯蓣皂苷的酶解产物,硅胶柱中的流动相为氯仿与甲醇的不同比例,经硅胶柱分离得到薯蓣皂苷酶解产物的两种单体,为产物Ⅰ和产物Ⅱ,用薄层层析法和高效液相色谱法检测,得到产物Ⅰ为3-（O） -（β-D-吡喃葡萄糖基） -薯蓣皂苷元,得率为17.85%,纯度为69.41%.同时得到产物Ⅱ,得率为1.64%.产物2为反应副产物,其结构、性质及药理作用有待于进一步研究.     

酶转化制备人参皂苷Rg2及其对巨噬细胞增殖分化的影响

利用Absidia sp.G8r菌产酶液,以人参皂苷Re为底物进行酶转化制备人参皂苷Rg2。采用硅胶柱层析法分离纯化人参皂苷Rg2,探讨了人参皂苷Rg2对巨噬细胞增殖及单核-巨噬细胞分化的影响。结果表明,人参皂苷Re转化为Rg2,酶转化率为66.3%。硅胶柱层析法对产物分离纯化,得到高纯度Rg2,HPLC检测纯度达95%,得率为13.1%。人参皂苷Rg2对巨噬细胞增殖分化的研究表明,低质量浓度(25～100μg/mL)对巨噬细胞的增殖抑制作用不明显,高质量浓度(大于100μg/mL)时对巨噬细胞的增殖抑制作用明显;当Rg2质量浓度为100μg/mL时,能促进单核-巨噬细胞的分化。     

自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体的纯化与检测

为了提纯并鉴定自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体,探讨其在部分组织中的免疫定位．首先合成带谷胱甘肽转移酶标签的自噬基因融合蛋白,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测抗体浓度,最后用免疫亲和纯化方法提纯抗血清中的多克隆抗体,酶联免疫吸附法检测抗体效价,蛋白印迹检测抗体特异性及在组织中的表达情况．结果表明：制备得到自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其质量浓度为每10μL含5μg,用酶联免疫吸附法显示此抗体效价及特异性较高,蛋白印迹显示蛋白大小为55kD左右．     

二步超离心法分离纯化人血浆ApoB100及兔抗人ApoB100抗血清制备

建立一种从人血浆中分离纯化ApoBl00的方法,并制备兔抗人ApoBl00抗血清。将血浆用溴化钾调成1．019g／mL的密度液进行差分超速离心,将分离产物在溴化钾不连续密度梯度液（1．006-1．210g／mI。）中进行等密度超速离心。用G-100葡聚糖凝胶柱纯化ApoB100,以ELISA双抗体夹心法检测浓度,真空冷冻干燥。取冻干粉与弗氏佐剂混合后免疫新西兰白兔,制备兔抗人ApoB100抗血清,利用双向免疫扩散检测抗原纯度与抗血清效价。结果是一步超离法分离的ApoB100最高浓度为0．91μg／mL;二步超离法分离的ApoB100最高浓度为1．40μg／mL,对应的抗血清效价为1：64。结果表明二步超离心法提高了人血浆ApoB100的分离效果。     

人参皂苷20(R)-25-OH-Rg3的分离纯化及结构鉴定

采用硅胶柱层析法和结晶法,从人参皂苷酶转化产物中分离得到了一种未知人参皂苷,并对其结构进行分析。10g人参皂苷酶转化产物,分离纯化得到该人参皂苷单体0.25g。经HPLC检测,其纯度达99.7%。核磁共振检测结果表明,该人参皂苷单体为12β,20(R),25-trihydroxydammar-3-O-β-Dglucopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside,命名为20(R)-25-OH-Rg3。     

麦冬皂苷D的分离提纯

以10 kg麦冬为原料,采用甲醇浸提法提取,经过脱脂、脱糖处理后得到18.1 g较纯的麦冬总皂苷,得率为0.181%。通过硅胶柱层析法分离纯化麦冬皂苷D,以氯仿-甲醇为洗脱剂进行洗脱,得到麦冬皂苷D样品2.31 g,其收率为12.8%,经高效液相色谱检测,分离得到的麦冬皂苷D的纯度为91.2%。结果表明,用硅胶柱层析法可快速分离出纯度较高的麦冬皂苷D。     

人参稀有皂苷C-K的分离与纯化

研究了硅胶柱层析法对酶反应产物-皂苷C-K粗品进行的分离纯化。当流动相V(氯仿)：V(甲醇)=9：1时分离效果最好，可以得到纯度较高的产品。用核磁共振法对产品进行分析，确认产品为人参稀有皂苷C-K，即20-O-(β-D-葡萄糖基)-达玛-24烯，3β，12β，20(S)-三醇。经高效液相色谱进行纯度检测，分离得到的人参皂苷GK的纯度为95％以上，纯品得率为33％，理论得率为60％以上。     

单糖基白头翁皂苷的分离纯化

用柱层析法在氯仿和甲醇液中对白头翁皂苷酶解产物进行分离纯化,得到1种单糖基皂苷和皂苷元。经薄层层析和高效液相色谱检测确定:单糖基皂苷为3-O-α-L-阿拉伯糖-3β,23-二烃基-Δ20(29)-羽扇豆烯-28-酸,其得率为5.1%。高效液相色谱检测结果显示所得纯品纯度可达95%以上。     

酶解产物黄芩素的分离提纯

用乙醚结晶法分离提纯了黄芩苷酶解产物———黄芩素。经薄层层析法检测确定纯化的产物为黄芩素单点,得率为理论得率的88.6%。高效液相色谱检测分离的黄芩素的纯度可达93%。