纯化大肠杆菌表达胆固醇氧化酶的两种亲和分离介质的研究

建立了从重组菌中高效亲和制备胆固醇氧化酶的方法,将一种源自Brevibacterium sp.(DQ345780)的胆固醇氧化酶基因转入Escherichia co●BL21(DE3)表达,,选择核黄素-5’磷酸(FMN)及7-氯-异咯嗪作为亲和配体,构建胆固醇氧化酶亲和制备介质。通过两种介质的一步亲和吸附,获得纯度较高的胆固醇氧化酶样本,蛋白回收率分别为9.4%与9.9%(质量百分比),活性回收率分别为85.2%与93.4%(活性百分比)。使用SDS-PAGE分析,纯化得到蛋白分子量为约50 000,纯度分别为98.0%与97.5%(纯度百分比)。通过静态吸附分析,胆固醇氧化酶相对两种亲和介质的最大理论吸附值分别为71.0与78.5 mg/g介质;解离常数分别为12.8和7.3μg/g介质。     

啤酒酵母谷胱甘肽的高效抽提方法

建立了一种从酿酒酵母干细胞中高效抽提谷胱甘肽(GSH)的新方法,料液比为1:8,采用醋酸-盐酸调节抽提pH值为3.5,抽提温度(70±1)℃的条件下,GSH抽提量可达5.50 mg/g,比已报道的其它抽提法提高54.49%～62.24 0A.抽提液经微滤(膜孔径0.45、0.22μm)、超滤(膜截留相对分子质量5 000)处理,蛋白质总去除率为60.98%.所得超滤液经高效液相法和氨基酸分析仪分析表明,粗提物中的杂质除蛋白质、小肽外,氨基酸类杂质主要为谷氨酸,为GSH的进一步精制提供了基础数据.     

综合防治冲技术在回采孤岛煤柱中的应用

随着煤矿开采深度的增加,高地应力与煤岩动力灾害耦合作用,进一步加剧了深井冲击等地压灾害。基于深井高地应力区的孤岛工作面冲击地压耦合作用分析,设计采用深孔松动爆破和卸压钻孔相结合的综合防治冲击地压技术,有效扩大了卸压影响范围,实现全工作面充分卸压,提高了孤岛煤柱安全回采的安全系数,对深井开采生产安全管理将起到重要作用。     

裙带菜α-葡萄糖苷酶抑制活性肽的制备

通过响应面法优化裙带菜α-葡萄糖苷酶抑制活性肽的制备工艺,以期得到一种调控餐后血糖的新型有效成分。选择五种蛋白酶酶解裙带菜蛋白筛选最佳水解酶,研究底物浓度、加酶量、pH、酶解温度、酶解时间对产物抑制率和水解度的影响,并根据单因素实验结果运用Box-Behnken设计原理进行三因素三水平的响应面优化试验,测定酶解液的分子量并绘制酶抑制动力学曲线。结果表明,最佳酶解条件为碱性蛋白酶,底物浓度7.11%,pH10.14,温度47 ℃,加酶量10000 U/g,反应时间1 h,在此条件下,酶解液的抑制率为51.17%,与预测值接近;裙带菜酶解液多为小肽,半抑制浓度为46.079 mg/mL,抑制类型为典型的可逆混合型抑制。本研究获得了裙带菜α-葡萄糖苷酶抑制活性肽的最佳制备工艺和理化性质,为开发新型降血糖活性肽提供理论基础和实验依据。     

高压水力压裂技术在突出煤层井下应用分析

针对平顶山矿区单一低渗透突出煤层透气性差、钻孔瓦斯抽放难的特性，研究分析了井下高压水力压裂钻孔壁四周应力分布、裂缝启裂机理。在压裂过程中，结合井下特殊生产环境的要求，优化设计清水重复压裂施工工艺，有效改善了压裂目标层的透气性能，使其钻孔瓦斯抽放流量成倍增加，增透效果明显。     

不同产地梅干菜差异分析与营养评价

为探讨梅干菜品质差异,采用氨基酸自动分析仪、气相离子迁移谱等,对9个产地的梅干菜的基础组分、游离氨基酸和挥发性物质进行分析,采用聚类分析与主成分分析进行综合评价。结果表明,9种梅干菜在水分、粗蛋白、总糖和食盐含量等理化性质上均呈现出显著性差异。9种梅干菜之间氨基酸总量、必需氨基酸、呈味氨基酸等均存在明显差异;各氨基酸之间基本为正相关,绝大部分为显著正相关,其中Thr与Tyr相关性最强,相关系数为0.982。对梅干菜的游离氨基酸进行主成分分析,提取出2个主成分,累计贡献率可达90%,能反映原指标的大部分信息。四川、湖北、江西、安徽等地梅干菜游离氨基酸综合评分高于均值,聚类分析结果验证了此结论。基于气相色谱-离子迁移谱技术构建梅干菜挥发性物质指纹图谱,分析9种梅干菜的风味物质,同时利用NIST数据库和IMS迁移时间数据库共鉴定出123种挥发性化合物,主要为酯类、醛类、醇类和酸类等物质,9种梅干菜的挥发性物质所占比例差异较大,可能与它们采用不同加工工艺有关。其中8种梅干菜醛类物质占挥发性物质总量的30%以上,醛类物质可能对梅干菜总体风味有重要贡献。     

低苦味花生多肽的制备

以花生分离蛋白为原料,研究复合酶协同酶解法制备低苦味花生多肽的最佳条件,并分析其体外抗氧化活性。根据单因素实验的结果,筛选出低苦味花生多肽的最佳水解条件,并通过测定清除DPPH、ABTS+自由基的能力来评价其抗氧化活性。结果表明,复合蛋白酶协同酶解花生分离蛋白的最佳反应条件为:使用碱性蛋白酶(pH8.5,温度55℃,时间4 h)、蛋白酶P(pH7.0,温度50℃,时间3 h)和风味酶(pH7.0,温度50℃,时间2 h)依次分步酶解花生分离蛋白,三种酶添加量分别为0.8%、0.4%和0.2%。此工艺下,酶解液苦味值为1.3,多肽得率为86.75%,相对分子质量低于1 kDa的多肽含量达85.93%。酶解液质量浓度为4 mg/mL时,对DPPH自由基和ABTS+自由基清除率分别为80.70%和87.92%,表明花生粗多肽抗氧化活性较好。     

低聚木糖对慢性腹泻症状的改善作用

本研究旨在探讨低聚木糖（xylooligosaccharides,XOS）对慢性腹泻的改善作用。基于随机平行对照实验原则,将临床慢性腹泻患者随机分为3 组：安慰剂组（CK组,每天3 g麦芽糊精）、低剂量组（3X组,每天3 g XOS）和高剂量组（6X组,每天6 g XOS）;干预4 周后,记录患者腹泻症状评分,测定患者血清生化指标、粪便中短链脂肪酸和肠道菌群的变化。随后用3 组干预后患者粪菌液分别灌胃3 组小鼠,连续灌胃24 d,测定其肠道通透性及炎症因子水平。结果表明,与安慰剂组相比,XOS干预患者4 周后,患者腹泻症状和脂代谢有改善趋势,粪便中丁酸含量提高。与干预前相比,XOS干预患者粪便中Blautia、Bifidobacterium、Lachnospiraceae_unclassified等物种相对丰度增加,Prevotella等菌属相对丰度下降。与灌胃安慰剂组患者粪菌液的小鼠相比,灌胃XOS干预组患者粪菌液的小鼠肠道屏障趋于稳定状态,结肠炎症显著缓解,肠道通透性相关指标明显改善,血清中D-乳酸水平显著降低（P＜0.05、P＜0.01）,闭锁小带蛋白（zonula occludens-1,ZO-1）和紧密连接蛋白Occludin表达量增加。综上,XOS在慢性腹泻的改善中发挥了较好的效果,具有潜在缓解慢性腹泻的作用。     

保护剂对胆固醇氧化酶稳定性机理的研究

利用荧光光谱、圆二色性光谱及凝胶电泳等方法,研究液态胆固醇氧化酶失活机理。根据失活机理,选择添加两种不同保护剂提高酶稳定性,研究提高酶稳定性的机理。37℃下,添加15%甘油的液态酶稳定性较佳,45 h后酶活保留率提高58%,核黄素对酶基本无保护作用。经研究分析,甘油主要通过有效抑制分子间聚集,维持二级结构,增强酶稳定性;核黄素不能抑制酶自身聚集,对酶保护作用不明显。     

基于低渗透煤层深孔预裂爆破工艺优化的考察分析

针对单一低渗透突出煤层深孔预裂爆破存在的装药难、封孔难的技术问题,以深孔预裂爆破理论为指导,进一步优化了施工工艺,指导现场施工。现场应用表明,利用深孔预裂爆破卸压增透新工艺,可有效解决突出煤层深孔预裂爆破存在的装药难、封孔难等技术难题,大幅度提高工作效率,为突出矿井安全生产提供技术支撑。