抑制α-葡萄糖苷酶的花生蛋白活性肽制备工艺研究

目的研究超声波辅助蛋白酶酶解制备抑制葡萄糖苷酶的花生蛋白活性肽工艺方法。方法以冷榨花生蛋白粉为原料,以底物浓度、pH值、加酶量、温度、时间、超声波功率为考察因素,以α-葡萄糖苷酶抑制率为考察指标,在单因素实验基础上,通过响应面的Box-Benhnken实验设计进行工艺优化。结果超声波辅助蛋白酶酶解制备的α-葡萄糖苷酶抑制活性肽复合物的最优工艺条件为底物浓度11.13%、pH值9.45、加酶量1.2%、温度42℃、时间44min、超声波功率1200W;此工艺条件下的α-葡萄糖苷酶抑制率的响应面模型预测值为91.07%,验证实验的抑制率为(88.70±0.63)%,与模型预测值相差2.60%,说明模型与实际情况拟合较好,验证了预测模型的正确性。结论响应面法对超声波辅助蛋白酶解制备抑制α-葡萄糖苷酶的花生蛋白活性肽工艺条件参数优化是可行的,得到的工艺条件具有实际应用价值。     

响应面法优化微波辅助酶解制备α-葡萄糖苷酶抑制活性肽工艺

为了优化微波辅助酶解制备α-葡萄糖苷酶抑制活性肽工艺,以冷榨花生蛋白粉为原料,以酶解得到的α-葡萄糖苷酶抑制活性肽复合物对α-葡萄糖苷酶的抑制率为考察指标,在单因素实验基础上,通过响应面Box-Benhnken实验设计进行工艺优化。结果表明,最优工艺条件为底物浓度9.77%、加酶量0.94%、温度59 ℃、时间10 min、pH9.0、微波功率1000 W;此工艺条件下的α-葡萄糖苷酶抑制活性肽复合物对α-葡萄糖苷酶的抑制率的响应面模型预测值为84.80%,验证实验的抑制率为90.21%±0.93%,两者的差异值为6.38%。本研究结果为花生α-葡萄糖苷酶抑制活性肽的分离、纯化和应用等研究提供了理论基础。     

酶解鹰嘴豆制备α-葡萄糖苷酶抑制肽的工艺研究

以鹰嘴豆为原料,以其酶解产物对α-葡萄糖苷酶的抑制率和水解度为指标,比较中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对鹰嘴豆的酶解效果,并进一步对碱性蛋白酶的酶解工艺参数进行响应面法优化。结果表明碱性蛋白酶的酶解效果最好,响应面法优化得到碱性蛋白酶酶解鹰嘴豆制备α-葡萄糖苷酶抑制肽的最佳工艺条件为:酶解时间5.1 h,酶解温度57℃,底物浓度5.2%,p H 10.0,加酶量4 000 U/g。在该工艺条件下,鹰嘴豆蛋白水解度为14.51%,酶解产物对α-葡萄糖苷酶的抑制率可达32.79%。     

具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的苦杏仁醇溶蛋白酶解物制备及稳定性表征

以苦杏仁醇溶蛋白（BAKG）为原料,以α-葡萄糖苷酶活性抑制率及水解度为指标,筛选出酶解苦杏仁醇溶蛋白制备α-葡萄糖苷酶抑制酶解物（AGIH）的最佳蛋白酶,以α-葡萄糖苷酶活性抑制率为指标,采用单因素和响应面设计实验选定制备AGIH所需的底物浓度、加酶量、pH值、最佳温度、酶解时间。并对该最佳酶解条件下制备活性酶解物的物理（pH、温度）稳定性和胃肠道稳定性进行研究。结果表明,木瓜蛋白酶为最佳蛋白酶,酶解最优工艺条件为底物浓度4.0% (m/V)、加酶量6000 U/g、pH 7.0、温度55 ℃、酶解时间6 h。根据上述条件下制备的AGIH抑制率为18.10%,IC50为17.66 mg/mL。制得的AGIH在高温、低pH、高pH条件下,或者经胃肠道模拟消化后,都具有较好的稳定性。研究结果为苦杏仁醇溶蛋白功能活性酶解物的开发利用提供了新的思路。     

响应面法优化酶法制备驴血红蛋白源二肽基肽酶Ⅳ抑制活性肽

食源性二肽基肽酶Ⅳ（dipeptidyl peptidase Ⅳ,DPP-Ⅳ）抑制活性肽成为近年来健康产品研究的方向之一。本研究以驴血红蛋白为原料,采用计算机模拟蛋白水解方法筛选最佳蛋白酶,研究酶解时间、温度和加酶量对蛋白水解度（degree of hydrolysis,DH）和酶解产物DPP-Ⅳ抑制率的影响,响应面优化酶解法制备DPP-Ⅳ抑制活性肽的工艺条件。结果表明,最佳蛋白酶为蛋白酶K,驴血红蛋白源制备DPP-Ⅳ抑制活性肽的最佳酶解条件为：底物质量浓度1 g/100 mL、酶解时间3.15 h、温度65 ℃、pH 8、加酶量400 U/g,此条件下2 mg/mL酶解产物对DPP-Ⅳ的抑制率为53.44%。     

龙须菜蛋白的提取工艺优化及降血压组分制备

目的 优化龙须菜蛋白的提取工艺,并制备降血压组分。方法 从胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选能获得最佳蛋白提取率的蛋白酶,采用单因素试验考查pH、底物浓度、酶解温度、酶底比、酶解时间对蛋白提取率和ACE抑制率的影响,采用响应面法确定最佳工艺条件,采用超滤膜分离技术龙须菜蛋白酶解液中制备血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme, ACE)抑制肽,并考察其ACE抑制率。结果 最佳酶解工艺条件为:pH 8.4、底物浓度18%、温度55℃、酶底比2.0%、碱性蛋白酶酶解3 h,酶解液的蛋白提取率为(19.54±0.56)%、ACE抑制率为(91.12±0.17)%;将酶解液分别通过10、5、1 kDa超滤膜,利用ACE抑制率来验证降血压活性, 1 kDa超滤膜的酶解液ACE活性最高,达到(71.37±0.22)%。结论 龙须菜可作为分离纯化制备龙须菜降血压肽的优质资源。     

基于BP神经网络的牡蛎α葡萄糖苷酶抑制剂活性肽制备工艺优化

为获得α-葡萄糖苷酶抑制率活性较好的活性肽,采用牡蛎为原料,选取中性蛋白酶和动物蛋白水解酶进行酶解。以牡蛎酶解活性肽的α-葡萄糖苷酶抑制率为评判指标,进行均匀设计实验,获得了酶解温度、加酶量和底物浓度三者与牡蛎活性肽α-葡萄糖苷酶抑制率之间的关系。将前三者作为BP神经网络的输入,后者作为输出设计神经网络,对牡蛎酶解过程进行模拟以及对牡蛎活性肽的活性进行预测,并得出最优酶解工艺参数。结果表明:酶解温度为55℃,酶解时间为5 h,加酶量为600 U/g,底物浓度为0.25 g/m L时,酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率最大为89.22%。因此,利用BP神经网络可对牡蛎酶解非线性过程进行较好的模拟,并且对酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率可进行较好预测,有利于牡蛎酶解活性肽的产业化制备。     

酶解鮰鱼皮明胶制备ACE抑制肽的工艺条件优化

以斑点叉尾鮰鱼皮明胶为原料,采用风味蛋白酶对其进行水解,制备ACE抑制肽。通过单因素实验考察温度、pH、底物浓度、加酶量及酶解时间对明胶水解物ACE抑制率的影响,在此基础上,采用Box-Behnken实验设计和响应面分析对风味蛋白酶水解鮰鱼皮明胶制备ACE抑制肽的工艺条件进行优化。实验结果表明,风味蛋白酶水解鮰鱼皮明胶制备ACE抑制肽的优化工艺条件为水解温度50℃,pH7.0,底物浓度4.5%,加酶量2.5%,酶解时间3h,在此条件得到的明胶水解物的ACE抑制率为91.45%,验证实验结果为89.81%。     

酶解法制备牡丹籽ACE抑制肽及其稳定性

以牡丹籽粕为原料,用酶解法制备ACE抑制肽及其稳定性研究。以血管紧张素转化酶(angiotension converting enzyme,ACE)抑制率为指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶中筛选出最佳ACE抑制肽制备酶为中性蛋白酶。以单因素实验为基础,进行酶解条件的响应面优化,结果显示牡丹籽ACE抑制肽酶法制备的最优条件为:底物浓度2%,pH7.5,加酶量7200 U/g,酶解温度43℃,酶解时间2 h,此时酶解液ACE抑制率可达到86.93%±2.38%。此外,稳定性分析显示该ACE抑制肽具有良好的温度和酸碱稳定性,在温度20~100℃与pH2~10的环境下,ACE抑制活性没有显著变化(P>0.05),并且经过体外胃肠模拟消化后,ACE抑制活性变化不显著(P>0.05),仍能保持良好的抑制活性。     

响应面法优化猪血红蛋白制备ACE抑制肽的酶解工艺条件

以猪血红蛋白为原料,采用胃蛋白酶水解猪血红蛋白制备ACE抑制肽。以体外ACE抑制率和水解度为指标,通过单因素试验对酶解温度、酶解pH值、底物质量浓度、加酶量、酶解时间等酶解工艺参数进行研究,并用响应面法优化酶解工艺,建立二次多项数学模型。结果表明,胃蛋白酶水解猪血红蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺参数为酶解温度37.60℃、酶解pH 1.98、底物质量浓度4.98g/100mL、加酶量3.04%、酶解时间4h,酶解产物的最大ACE抑制率为70.09%。     

酶解丝素蛋白制备ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的研究

探讨利用碱性蛋白酶酶解丝素蛋白制备ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的工艺条件。以丝素肽对ɑ-葡萄糖苷酶的体外抑制活性和水解度(DH)为主要评价指标,通过正交试验优化了ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的工艺条件。结果表明,在最佳工艺条件为温度60℃、反应pH8.5、底物质量浓度5%、加酶量为1200 U/g、反应时间100 min下测得丝素肽对ɑ-葡萄糖苷酶具有较高抑制率,为44.90%,此时DH为16.80%。其抑制活性与浓度有较大的依赖关系,而作用时间控制在40 min即可。此外,通过对丝素蛋白肽蔗糖和葡萄糖含量的检测,结果表明,尽管丝素肽中含有微量的葡萄糖,但抑制干扰作用甚微。     

响应面优化酶法制备茶叶蛋白抗氧化肽的工艺研究

以茶渣为原料,选用碱性蛋白酶,以酶解液的还原能力作为评价指标,制备抗氧化肽,对酶解温度、酶解时间、加酶量、pH、底物浓度五个因素进行研究,并通过响应面分析对酶解工艺进行了优化,结果表明:在最佳条件:底物浓度3.3％、加酶量1.8％、提取温度51℃、pH9、酶解时间2.5h时进行酶解,所得酶解液还原能力最强.     

酶法制备花生α-葡萄糖苷酶抑制肽的工艺优化

为促进花生蛋白资源的开发利用及发挥花生肽的降血糖作用，采用碱溶酸沉法制备花生蛋白，并利用不同商品蛋白酶水解花生蛋白制备花生肽。以α-葡萄糖苷酶抑制率为评价指标，对蛋白酶进行了筛选。在此基础上，采用单因素试验和响应面试验对花生α-葡萄糖苷酶抑制肽的制备工艺进行了优化。另外，考察了花生蛋白水解度和花生肽α-葡萄糖苷酶抑制活性的相关性。结果表明：与其他商品蛋白酶相比，胰蛋白酶制备的花生肽的α-葡萄糖苷酶抑制活性最高；酶法制备花生α-葡萄糖苷酶抑制肽的最优工艺条件为将花生蛋白于95 ℃加热5 min进行预处理，采用胰蛋白酶水解，水解时间62 min，加酶量8.9%，底物质量浓度4.1 g/100 mL，在最优条件下花生肽α-葡萄糖苷酶抑制率达到(68.82±0.24)%，此时花生蛋白的水解度为10.09%；水解度在8.0%~11.5%范围内与花生肽的α-葡萄糖苷酶抑制活性呈显著正相关。综上，花生蛋白经胰蛋白酶水解后得到的花生肽对α-葡萄糖苷酶具有显著的体外抑制活性。     

响应面法优化超声辅助酶解制备大豆降血糖肽的研究

超声预处理大豆蛋白,响应面分析(RSA)试验优化酶法制备新型降血糖肽。以酶解产物对α-葡萄糖苷酶的抑制率为评价指标,筛选蛋白酶;在单因素试验的基础上,对超声预处理工艺及酶解过程进行RSA试验。实验结果表明,最佳蛋白水解酶为胰蛋白酶;经过RSA优化得到最佳条件为:酶解时间22.0min,加酶量6 416.61 U/g,酶解底物浓度2.10%;超声预处理时间20.9 min,超声功率245.9 W,超声底物浓度6.27%,在此条件下大豆蛋白源多肽的抑制率64.79%,多肽质量浓度4.15 mg/m L。RSA试验优化后,多肽的α-葡萄糖苷酶抑制率比相同条件未使用超声预处理的提高了19.01%。     

双酶法制备马鹿茸降血糖肽工艺优化及其对α-葡萄糖苷酶的抑制效果

为探索制备马鹿茸降血糖肽的最佳工艺条件,以α-葡萄糖苷酶抑制率为指标,从碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选出两种酶,根据其体外降血糖效果确定酶的作用顺序,再以水解度、α-葡萄糖苷酶抑制率和蛋白质回收率为指标进行单因素试验和正交试验,优化降血糖肽制备工艺条件。结果表明:碱性蛋白酶和风味蛋白酶比中性蛋白酶和胰蛋白酶更适合用于制备马鹿茸降血糖肽。采用碱性蛋白酶-风味蛋白酶顺序对马鹿茸进行水解,所得酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率、蛋白质回收率和水解度较高,分别为21.11%、39.12%、19.88%。通过单因素试验和正交试验确定双酶酶解最佳工艺条件为先用碱性蛋白酶在p H 8.0、60℃、底物质量分数12%、加酶量5 000 U/g条件下酶解3 h,再用风味蛋白酶于p H 6.5、45℃、底物质量分数5%、加酶量6 000 U/g条件下酶解1 h。双酶分步水解终产物的α-葡萄糖苷酶抑制率受质量浓度的影响,当质量浓度为3 mg/m L时,α-葡萄糖苷酶抑制率可达94.09%,IC50值为1.82 mg/m L。碱性蛋白酶-风味蛋白酶双酶分步水解马鹿茸可获得高α-葡萄糖苷酶抑制率的降血糖肽。     

具α-葡萄糖苷酶抑制作用的蚕豆蛋白酶解物的制备

以蚕豆为原料,通过碱溶酸沉法得到蚕豆蛋白,再通过酶解制备具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的蚕豆蛋白酶解物。以α-葡萄糖苷酶抑制率与水解度为指标,考察蛋白酶种类、酶解温度、酶解pH、料液比、加酶量与酶解时间对蚕豆蛋白酶解的影响,在此基础上采用响应面法对工艺参数进行优化。结果表明：酶解蚕豆蛋白制备具有α-葡萄糖苷酶抑制作用酶解物的最优工艺条件为以碱性蛋白酶为最适用酶、酶解温度50 ℃、酶解pH 8.5、酶解时间4.3 h、料液比1∶ 10、加酶量14 000 U/g,在此条件下酶解物α-葡萄糖苷酶抑制率为（38.58±0.87）%,蛋白水解度为22.87%。     

酸枣仁ACE抑制肽酶解工艺优化

本试验以脱脂后的酸枣仁渣通过碱溶酸沉法提取得到的酸枣仁蛋白为研究对象,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率和水解度为指标,筛选复合酶种类,采用响应面分析法,以中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例、pH、底物浓度、酶解温度、酶解时间为试验因素,优化酸枣仁ACE抑制肽最佳酶解工艺参数。结果表明:筛选出中性蛋白酶和碱性蛋白酶作为复合酶,最适酶添加量确定为6000 U/g,5个因素对ACE抑制率和水解度的影响由大到小的顺序为:酶解温度、酶解时间、pH、中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例、底物浓度。通过拟合方程分析,得到酸枣仁ACE抑制肽酶解的最佳工艺条件为:中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例为2.1:1、酶解温度为54 ℃,底物浓度为3.1%,pH为7.5,酶解时间为62 min。在此条件下,复合酶解酸枣仁蛋白酶解液的实际ACE抑制率和水解度分别为（79.46%±0.49%）和（31.45%±0.85%）,与理论值接近。制备得到酸枣仁ACE抑制肽与阳性对照组卡托普利对比,酸枣仁ACE抑制肽的ACE抑制率大小为（79.46%±0.49%）,与卡托普利的ACE抑制率偏差为（19.28%±0.12%）,证明酸枣仁ACE抑制肽具有显著降压效果。本研究证明了酸枣仁蛋白通过酶解有效得到ACE抑制肽并优化其酶解工艺,旨在为酸枣仁渣废物再利用提供参考方向和理论依据。     

分步酶解法制备菜籽降血压肽

以菜籽蛋白为原料,用两种蛋白酶将其分步水解制备降血压肽。从4种酶的两两组合中筛选出了最佳酶组合碱性蛋白酶和中性蛋白酶,采用紫外检测法对酶解产物中血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽活性进行测定。对酶解工艺进行优化,在单因素试验的基础上采用Box-Behnken模型响应面设计试验,运用Design-Expert软件处理,建立制备菜籽降血压肽的三元二次回归正交模型。结果确定最佳酶解条件为:碱性蛋白酶和中性蛋白酶为分步水解的酶、底物的质量浓度5.65g/100mL、加酶量6.5%、酶解温度54.9℃,ACE抑制率理论值为50.303%,在此条件下进行验证实验制备出ACE抑制率为50.12%的菜籽降血压肽。     

龙须菜蛋白酶解制备ACE抑制肽的工艺优化

通过酶解法酶解龙须菜蛋白制备ACE抑制肽,考察风味蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶的龙须菜蛋白酶解液对ACE抑制活性,并对酶解工艺进行优化。最后选出胰蛋白酶为ACE抑制肽的适宜蛋白酶,在单因素的基础上,采用响应面分析法对胰蛋白酶的酶解工艺进行优化。结果表明：最佳酶解工艺为：pH为8.0,酶底比为6%,温度为35℃,在此条件下,制备的多肽（2.0 mg/mL）对ACE的抑制率为72.37%。     

泥鳅蛋白酶解工艺条件的优化

以泥鳅蛋白为原料,酶解制备具有降血压活性的短肽。从9种蛋白酶中筛选出菠萝蛋白酶的酶解液具有较高降压活性,IC50值为0.65mg/mL。在单因素试验的基础上,采用和Box-Behnken和响应面法(RSM)优化了酶解泥鳅蛋白的工艺条件,以ACE抑制率为指标,探讨酶与底物的比值([E]/[S])、酶解温度和酶解时间对ACE抑制率的影响。结果表明：制备降血压肽的最佳酶解条件为[E]/[S]4.9‰、酶解时间5.9h、酶解温度54.4℃、pH6.5、底物质量分数30%,该条件下制备的泥鳅蛋白酶解产物的ACE抑制率为88.92%。