SinChERS结合超高效液相色谱-串联质谱法同时测定禽类产品中磺胺类药物及其增效剂

摘 要: 目的 建立SinChERS结合超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS)同时测定禽类产品中磺胺类药物及其增效剂的分析方法。方法 样品经甲酸乙腈提取后,经基质分散净化装置(SinChERS)净化,采用C18色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.8 μm)进行分离,以0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,质谱采集采用电喷雾正离子模式,通过多反应监测方式检测。结果 磺胺类药物及其增效剂在1~50 μg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数(r2)为0.9994~0.9999。在1.0、2.0、10.0 μg/kg 3 个添加水平下,其平均回收率均在70.2%~99.5%之间,相对标准偏差(relative standard deviations, RSDs)均小于8.6%,方法定量限为1.0 μg/kg。结论 该方法快速简便、准确可信、灵敏度高,适合禽类产品中磺胺类药物及其增效剂的残留检测。     

海参肠碱性磷酸酶的提取及粗酶的特性研究

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)是最重要的磷酸酶之一,在生物体内直接参与磷酸基团的转移和代谢过程。本文研究了海参肠碱性磷酸酶粗酶的提取,并分析了其酶学特性。经含有0.2%Triton X-100的Tris-HCl缓冲液(pH 8.9)浸提、正丁醇处理、70%硫酸铵沉淀和超滤等步骤获得海参肠ALP粗酶,纯化倍数达到2.74倍,得率为63.32%。ALP粗酶的最适反应pH为11.0,在pH 10.0～12.0稳定性较好;最适反应温度为45℃,在20～45℃具有很高的稳定性。金属离子Mg2+(1～30mmol/L)、Zn2+(<10mmol/L)对海参肠ALP粗酶具有显著的激活作用;Fe3+、Fe2+、Cu2+和Mn2+(10mmol/L)可明显抑制该酶活力。EDTA-Na2、DTT、Na2WO4及Na2HPO4对海参肠ALP粗酶有明显的抑制作用,抑制程度依次为:EDTA-Na2>DTT>Na2WO4>Na2HPO4。     

紫外线诱导海参体壁基因表达的研究

本论文对紫外线(58μW/cm2,30 min)诱导的海参体壁自溶进行了基因表达的研究。采用TRIzol法提取海参体壁中的总RNA,以细胞色素B(Cyt B)为内标,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对组织蛋白酶C(CC)、纤维蛋白原A(FGL)、衰老相关蛋白(SAP)和主要卵黄蛋白2(MYP2)、组织蛋白酶L(CL)、钙网蛋白(Calreticulin)、基质金属蛋白酶14(MMP14)、乙酰胆碱酯酶(Ach E)等29种分子进行基因扩增。结果显示,紫外线照射30 min后,海参体壁组织蛋白酶C、纤维蛋白原A、衰老相关蛋白和主要卵黄蛋白2的基因表达水平显著上调(p0.05),上调水平分别较对照组提高了71.4±44.8%、27.1±18.4%、43.7±21.6%和165.5±122.7%,而组织蛋白酶L、钙网蛋白、基质金属蛋白酶14、乙酰胆碱酯酶等基因表达没有显著变化。这些结果表明组织蛋白酶C、纤维蛋白原A、衰老相关蛋白和主要卵黄蛋白2可能参与海参体壁的自溶过程。