重组超氧化物歧化酶1/3杂合酶在大肠杆菌中表达的优化

目的获取活性高的重组SOD 1/3杂合酶。方法用含pET-SOD 1/3的工程菌诱导表达重组SOD 1/3杂合酶,通过分析SDS-PAGE及SOD酶活性,考察诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度、Cu 2+、Zn 2+浓度对重组酶表达量和活性的影响。结果正交试验表明,用1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在A600=1.2时诱导,Cu2+、Zn2+浓度分别为2.4 mmol/L,诱导温度15℃,诱导时间12 h,能获得高活性重组SOD 1/3,其比活性为1681U/mg。结论培养温度和Cu2+、Zn2+浓度是优化表达的最主要因素。降低诱导温度有利于重组酶的可溶性表达,添加Cu2+、Zn2+能促进重组酶活性提高。     

重组超氧化物歧化酶1/3杂合酶在大肠杆菌中表达的优化

目的获取活性高的重组SOD1／3杂合酶。方法用含pET—SOD1／3的工程菌诱导表达重组SOD1,3杂合酶,通过分析SDS—PAGE及SOD酶活性,考察诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度、Cu^2＋、Zn^2＋浓度对重组酶表达量和活性的影响。结果正交试验表明,用lmmol／L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）在A600=1．2时诱导,Cu^2＋、Zn^2＋浓度分别为2．4mmol／L,诱导温度15℃,诱导时间12h,能获得高活性重组SOD1／3,其比活性为1681U／mg。结论培养温度和Cu^2＋、Zn^2＋浓度是优化表达的最主要因素。降低诱导温度有利于重组酶的可溶性表达,添加CU^2＋、Zn^2＋能促进重组酶活性提高。