Paenibacillus puldeungensis LK18普鲁兰酶基因的克隆表达及酶学性质研究

本研究根据类芽孢杆菌的普鲁兰酶基因的保守区设计兼并引物,从Paenibacillus puldeungensis LK18中扩增出普鲁兰酶基因(pul A),将其连接至p ET-28a(+)载体上,构建出重组表达载体p ET-28a(+)-pul A,转入到EscherichiacoliBL21(DE3)中,成功地表达了重组普鲁兰酶。结果表明:该普鲁兰酶基因全长1968 bp,编码655个氨基酸。通过Ni柱亲和层析纯化出重组蛋白,测定其比酶活为508.8 U/mg,分子量约为76.95 ku。该重组酶的最适反应温度为45℃,在35℃～40℃下保温120 min后剩余酶活达60%以上;最适作用p H为6.0,在p H 6.0～8.0条件具有较好的稳定性;10 mmol/L的K+和Mg~(2+)对该重组普鲁兰酶有激活作用,而Zn~(2+)、Mn~(2+)、Ni~(2+)、Fe~(2+)、Cu~(2+)、Co~(2+)、Ca~(2+)等对其有不同程度的抑制作用。本研究成功地构建出一株可高效表达普鲁兰酶的重组菌株,具备一定的工业应用价值。     

豆豉纤溶酶液体发酵生产条件的研究

研究了芽孢杆菌菌株WMIl发酵生产豆豉纤溶酶的条件．结果表明,最佳发酵条件为：氮源w（带鱼蛋白胨）=3％,w（酵母膏）=0．5％;碳源w（水溶性淀粉）=3％;无机盐的用量为w（K2HPO4）=0．6％,w（KH2PO4）=0．1％,w（MgSO4）=0．1％,w（CaCl2）=0．04％,c（MnCl2）=10^-4mol／L;w（青霉素）=0．01％;培养基pH=6．0,培养温度为37℃．在此条件下,纤溶酶活性可达2345IU／mL．     

利用活性真菌转化简单儿茶素为酯型儿茶素

研究从茶树的鲜叶、茎部和茶树土壤中分离出活性真菌,通过利用天然微生物的转化能力,使简单儿茶素转化为功能性较强的复杂型酯型儿茶素。实验结果表明:筛选出了具有转化能力的活性菌种,能有效地将简单儿茶素转化为酯型儿茶素,而且其转化能力良好。并对此种活性真菌进行形态学和生理生化的初步检测,判断其属于丝状真菌藻状菌纲,毛霉目,内囊霉科,内囊霉属。     

短小芽孢杆菌β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及在大肠杆菌中的分泌表达

从一株产碱性纤维素酶的短小芽孢杆菌H12中克隆了编码β-1,4-葡聚糖内切酶的基因,对其基因序列及其酶的结构域进行了分析预测,同时将该酶的基因构建于大肠杆菌表达载体pET20b中,获得重组表达载体pET20b-EglA,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行表达。结果表明,该基因大小为1980 bp,共编码659个氨基酸;对β-1,4-葡聚糖内切酶结构域分析表明,该酶由两个不连续的结构域组成,其一为N-端催化结构域,由糖基水解酶家族9组成,其二为C-端底物结合结构域,由碳水化合物绑定结构域家族3组成;平板实验结果表明,β-1,4-葡聚糖内切酶基因在重组大肠杆菌中得到了良好的分泌表达;SDS-PAGE电泳图谱表明该酶的分子大小约为73 kDa。     

一株碱性纤维素酶高产菌株的分离、鉴定、系统发育分析及酶学性质的研究

对从土样中分离得到的一株碱性纤维素酶高产菌株H9进行了鉴定,该菌株呈长杆状,革兰氏染色为阳性,产芽孢.通过对其形态、生理生化特性、16S rDNA基因序列(该序列已收录于Genebank,登录号为EF501974)同源性分析的多相分类研究,确定该菌株为短小芽孢杆菌.对酶的性质研究表明,其最适pH值为8,最适温度为55℃,在pH值5～9范围内具有良好的稳定性.     

银杏细胞黄酮苷的分离纯化条件研究

探讨了从银杏干细胞内分离纯化黄酮的最佳条件。正交试验确定最佳浸提条件为:料液比(A)1∶50,提取温度(B)80℃,提取时间(C)4h,乙醇浓度(D)60%,超声波破碎细胞时间(E)10min。五个因素的影响大小次序为A>E>B>D>C;环己烷是较有效的除杂萃取剂;用吸附层析法精制银杏黄酮时,LSA-5B树脂是较适合的吸附剂;用70%乙醇洗脱效果最佳;pH7.0的上柱液层析效果最好。     

甲基营养型芽孢杆菌产氨肽酶的发酵优化

氨肽酶能从多肽链的N端顺序水解并释放氨基酸,广泛应用于食品、工业、医学等领域.该研究利用单因素试验、正交试验及响应面设计试验方法,优化了甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophilus) CC发酵产氨肽酶的条件.其发酵最佳培养基组成为1％蔗糖、1.5％黄豆饼粉、0.1％氯化钠、0.05％磷酸二氢钾和0.02％硫酸镁.最适发酵条件为初始pH值为8.5,发酵温度37℃,摇床转速180r/min,接种量6％,发酵时间15h.在上述条件下,氨肽酶的产量从优化前的83.09U/mL提高为310.05U/mL,比优化前增加了2.73倍.     

解淀粉杆菌DC-12产纤溶酶发酵条件的优化

用响应面法对产纤溶酶的解淀粉芽孢杆菌D-12的发酵条件进行了优化。首先通过单因素实验考察了各因素对产酶的影响,后在此基础上采用Plackett-Burman设计得出发酵时间、糊精浓度、细菌学蛋白胨浓度三个最重要的影响因素,接着通过最陡爬坡实验逼近酶活的最高区域,然后通过中心组合设计实验对显著因素进行优化,最后响应面法进行分析,得到的最佳发酵条件为:细菌学蛋白胨浓度2.25%,糊精浓度2.65%,发酵时间45 h。在此条件下,酶活为96.340 IU/mL。验证实验所得酶活为98.947 IU/mL,因此本优化工艺结果比较可靠。     

从银杏细胞中分离纯化黄酮的初步研究

探讨了从银杏干细胞内分离纯化黄酮的最佳条件.经过正交试验,选择其最佳浸提条件为:料液比(A)为1:50,提取温度(B)为80℃,提取时间(C)为4h,乙醇体积分数(D)为60％,超声波破碎细胞时间(E)为10min.5个因素的影响大小次序为A>E>B>D>C.环己烷是较有效的除杂萃取剂.LSA-5B树脂较适合精制银杏黄酮.体积分数为70％的乙醇作为洗脱剂的洗脱效最最佳.pH7.0的上柱液层析效果最好.     

助朋基因在Bacillus subtilisWB800中的克隆表达

对源自Bacillus subtilis168的具有纤溶活性的基因序列（WprA）进行克隆,然后将wpra基因克隆到大肠杆菌．枯草杆菌穿悛载体pBE3中,构建表达载体pBE-WprA,将重组载体转化到Bacillus subtilisWB800中,实现了WprA基因在Bacillus subtilisWB800中的表达。结果表明,WprA基因在Bacillus subtilisWB800中的对数生长期和平衡期均获得了表达,且产物被分泌到胞外。