基于RPA-LFD法的多黏菌素耐药基因mcr-1可视化快速检测方法建立与应用

目的：建立一种快速、高效、可视化的细菌多黏菌素耐药基因mcr-1检测方法，为其基层检测的展开提供依据和便利。方法：利用重组酶聚合酶扩增结合胶体金侧向流试纸条技术(Recombinase polymerase amplification combined with a lateral flow dipstick,RPA-LFD)，辅以手持式胶体金读数仪；根据mcr-1基因保守序列设计合成一对特异性RPA引物，通过对反应条件和体系的优化，以及特异性试验、灵敏度试验、模拟食样试验和实际样品试验，成功建立了可视化定量检测细菌多黏菌素耐药基因mcr-1的RPA-LFD方法。结果：在引物浓度400 nmol/L，引物比例1:1时，该方法最佳反应条件为Mg²⁺浓度14.0 mmol/L，反应温度37℃，反应时间20 min；灵敏度好，标准曲线方程为y=0.117x+0.051，定量限为10¹～10⁸ copies/μL，检出限为10¹ copies/μL，比PCR法低一个数量级且模拟样品检出结果与PCR法一致。利...     

浅议如何做好高校学生助理班主任

在高校学生管理工作中实施助理班主任制度是高校学生工作的重要内容,有利于培养学生“自我管理,自我教育,自我服务”的意识和能力,同时,作为班主任和辅导员的得力助手,有效地促进了学生的管理工作,特别是对新入学大学生的入学教育过程中起到了重要的作用。本文从一名助理班主任角度出发,就如何做好高校学生助理班主任做一粗浅的探讨。     

链霉素人工抗原及多克隆抗体的制备与鉴定

通过研究链霉素(SM)人工抗原的合成和多克隆抗体的制备,建立链霉素残留的免疫分析方法。以氧-缩甲基羟胺肟化链霉素的醛基,引入羧基,再用碳二亚胺法将半抗原与蛋白质载体连接,合成免疫原SM-cBSA。用戊二醛法合成包被原SM-OVA。用紫外扫描、SDS-PAGE分析偶联情况,计算得链霉素与cBSA、OVA的分子偶联比分别为7.6:1与17.7:1。经动物免疫获得效价为1:40000的链霉素多克隆抗体,采用间接竞争ELISA测定IC50为3.32ng/mL,与双氢链霉素的交叉反应率为105.21%,与同类的其他药物均无交叉反应。     

水稻淀粉去分支酶相关转录因子基因克隆

本研究在前期电子克隆到susiba—like基因序列的基础上,通过逆转录和巢式PCR的方法从水稻品种BP034的胚乳中克隆到了该基因的中间片段序列,经测序分析验证所获得的中间片段的序列与预期序列完全一致。该susiba—like基因中间片段的获得为进一步研究SUSIBA—like对水稻淀粉去分支酶isol的表达调控机制提供了可能。     

一般本科院校大学生就业能力培养体系的探索

当前,高校的教育培养质量已成为影响大学生就业的重要因素。从总体上看,提高教育教学质量的关键就是培养大学生的就业能力,形成有效的就业能力培养体系。本文在论述大学生就业能力培养意义的基础上,对大学生就业能力的结构进行了分析和探讨,有针对性的提出了大学生就业能力培养的策略。     

副溶血性弧菌PMA-LAMP方法的建立

副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)是一种常见的食源性致病菌,在海鲜等食物中检出率很高,食用没有煮熟的带菌食物或者腌制品,极易引起食物中毒。目前用以检测副溶血性弧菌的快速检测方法都不能区别死活菌,容易出现假阳性结果。本研究基于DNA结合染料叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA),利用荧光染料钙黄绿素(Calcein)的特性,建立了一种实时的可视化环介导等温扩增方法(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),并与q PCR方法进行比较。实时可视化LAMP方法的反应结果,既可以肉眼直接观测,也可以借助荧光分析设备实时监测,并对半定量分析进行初探,为之后向定量分析深入研究打下基础。实验结果表明,实时可视化PMA-LAMP方法的灵敏度可达5.0×102 CFU/m L,模拟食样灵敏度为1.9×102 CFU/m L,与PMA-q PCR方法结果一致。除去前增菌时间,整个检测过程只需2 h,且准确率高,为副溶血性弧菌快速检测的开展提供了有效的技术支持。     

水产源大肠杆菌耐药可移动遗传元件II型整合子的结构特征及适应性代价

为分析水产源大肠杆菌耐药可移动遗传元件II型整合子的结构特征及适应性代价,采集了浙江省市售南美白对虾、牡蛎和大黄鱼样品各200份,分离鉴定大肠杆菌,分析其耐药特征和II型整合子携带情况。利用竞争试验和流式细胞术等方法,比较携带II型整合子的大肠杆菌在无抗环境和抗生素亚抑制浓度下适应性代价的差异。结果表明,分离到的278株大肠杆菌中,有28株多重耐药菌携带II型整合子,其结构均含功能缺陷型整合酶,其中27个含典型耐药基因盒dfrA1-sat2-aadA1,1个含非典型基因盒dfrA1-catB2-sat2-aadA1。在无抗LB培养条件下,上述两类II型整合子的选择系数S依次为-0.068和-0.117,均小于0,表明携带II型整合子的大肠杆菌在无抗环境下存在适应性代价。在抗生素亚抑制浓度(40%MIC和20%MIC)下,两类II型整合子的选择系数S均大于0,适应性良好。综上,II型整合子在水产源大肠杆菌中已有一定比例,且低浓度抗生素有利于其维持和富集,从而促进其有效应对外界抗生素压力,以及在细菌间传播扩散。     

sbeIIb基因hpRNA结构植物转化载体的构建

hpRNA介导基因沉默技术是一种下调某个内源目的基因表达的有效技术.本研究将淀粉分支酶基因sbeIIb启动子控制下的sbeIIb基因的hpRNA结构构建于植物双元表达载体pCAMBIA1305.1中,并将该重组载体导入农杆菌超毒力菌株AGL1中,构建了一种适于禾本科的植物转化载体.     

在校大学生上网行为分析与教育引导初探

信息社会使得网络日益成为人们学习、工作、生活中不可或缺的媒体,大学生网民的比例和对网络利用程度也日益增大,一方面,网络带给大学生学习工作的便利与帮助,丰富娱乐生活;另一方面,部分大学生也由于使用网络过度,甚至网络成瘾,直接导致大学生心理问题增多、理想信念的缺失、道德品质的滑坡,身心健康与人格发展受到严重影响。如何教育引导大学生能够正确评价网络,正确使用网络,预防和解决网络给大学生身心发展带来的诸多负面影响,是当前学生工作的重要课题。本文从大学生上网行为分析人手,对大学生病态上网行为对思想政治教育的影响与对病态上网行为的教育引导做了简要探讨。     

磺胺二甲嘧啶人工抗原的合成与鉴定

采用重氮化法将磺胺二甲嘧啶(SM2)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)交联合成人工抗原SM2-BSA与SM2-OVA,并通过紫外扫描、SDS-PAGE电泳、凝胶层析和红外光谱等方法扫描进一步检测合成效果.紫外扫描检测结果显示,SM2与BSA、OVA偶联成功,SM2-BSA与SM2-OVA的特征波长分别为2762、77 nm;经计算SM2-BSA与SM2-OVA的分子结合比例分别为5.3∶1和18.4∶1;SDS-PAGE电泳迁移率、凝胶层析出峰时间和红外光谱曲线特征均显示SM2与BSA、OVA偶联成功.