谷糠多酚对酒精性胃黏膜损伤的保护作用

目的：初步阐明谷糠多酚对酒精性胃黏膜损伤的保护作用以及具体分子机制,为谷糠多酚在饮酒人群胃黏膜损伤营养干预方面的应用提供科学依据。方法：雄性Wistar大鼠连续3 周每天灌胃50 mg/kg mb谷糠多酚,干预结束后通过灌胃体积分数75%乙醇溶液建立急性酒精性胃黏膜损伤模型;利用不同剂量（1～15 μg/mL）谷糠多酚对人胃黏膜上皮细胞（GES-1）处理24 h,继而通过1 000 mmol/L酒精继续作用12 h建立酒精性GES-1细胞损伤及干预模型;通过解剖观察大鼠胃组织形态学及病理结构,评价谷糠多酚对大鼠胃黏膜组织的保护作用;结合细胞形态变化及存活情况评价谷糠多酚对GES-1细胞的保护作用;通过测定氧化应激和细胞凋亡相关指标,评价谷糠多酚对急性酒精性胃黏膜损伤大鼠及GES-1细胞的抗氧化和抑制凋亡能力的影响。结果：谷糠多酚可以有效预防酒精引起的大鼠胃黏膜及GES-1细胞损伤,极显著缓解酒精引起的GES-1细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平升高（P＜0.01）;同时极显著缓解大鼠胃黏膜组织和GES-1细胞中丙二醛（methane dicarboxylic aldehyde,MDA）水平升高（P＜0.01）,提高超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力,明显抑制酒精引起的细胞凋亡。结论：谷糠多酚能够通过缓解酒精引起的胃黏膜上皮细胞氧化损伤从而保护胃黏膜。     

水电开发风险因素研究

我国水电开发需求巨大。水电项目规模大、结构复杂和影响面广的特点使得水电开发所面临的风险因素较多。本文调研了水电行业的55种风险因素,给出了这些风险的重要性排序,其中安全居于首位。并进一步分析了业主和承包商的主要风险:移民、不足或不当设计和生态环境影响等风险需业主特别重视;成本与利润、企业信誉、索赔与争端和技术不足等风险与承包商关系密切。各水电开发参与方应充分了解自身风险,以及其它组织在同一风险中的作用,合理地处置风险。     

麦麸结合态多酚对肝癌HepG-2细胞增殖及凋亡效应研究

目的 本文主要研究麦麸结合态多酚对肝癌HepG-2细胞的抑制效应。方法 小麦麸皮粉碎后,采用丙酮-碱消化法,获得麦麸结合态多酚物质,命名为：WBBP,用福林酚比色法测定该多酚的含量及提取得率;通过MTT法检测WBBP处理对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制效应,倒置显微镜观察WBBP处理对HepG-2肝癌细胞形态学的影响;采用流式细胞仪检测WBBP处理对HepG-2肝癌细胞周期、凋亡情况以及线粒体膜电位的影响;利用caspases试剂盒检测WBBP作用下肝癌HepG-2细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的酶活性变化。结果显示,不同浓度的WBBP通过诱导HepG-2肝癌细胞周期在S期阻滞,显著抑制了细胞增殖,且具有浓度依赖性;同时WBBP通过caspase依赖的线粒体凋亡路径诱导HepG-2肝癌细胞凋亡率以浓度依赖的方式增加。结论 麦麸结合态多酚WBBP能够通过显著抑制HepG-2肝癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡来发挥抗肝癌效应。     

重组植物毒素gelonin的纯化及性质研究

采用pET28a载体系统在E.coli BL21中进行了植物毒素gelonin的原核表达，产物经SP-Sepharose，Superdex 75二步纯化，获得了电泳纯的重组植物毒素gelonin。将重组的gelonin与从植物种子中提取的天然gelonin进行了Western blot，ELISA，无细胞体系中蛋白质合成抑制实验以及超螺旋DNA裂解研究。结果都表明，重组植物毒素gelonin与天然gelonin具有相似的生物活性。     

地皮菜中一种新型水应激蛋白基因的克隆表达及其抗人结肠癌细胞SW480的作用

利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增出地皮菜（Nostoc commune Vauch.）一种新型水应激蛋白（water stress protein,WSP）的基因（GenBank 序列号：KF003026）,连接到原核表达载体pET28a上,测序鉴定后转化入大肠杆菌BL21,获得一种新型水应激蛋白表达工程菌;经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG）诱导表达及镍离子亲和层析柱（Ni-NTA）纯化后,得到了带6×His标签、分子质量大小为40 kD的可溶性目的蛋白,称其为重组水应激蛋白1（recombinant water stress protein 1,Re-WSP1）。细胞增殖抑制实验结果表明,Re-WSP1蛋白可以抑制结肠癌细胞SW480的增殖,而对正常结肠上皮FHC细胞无明显作用;DAPI细胞核染色结果表明,该蛋白能够诱导SW480细胞凋亡小体的形成;Western blotting结果显示,Re-WSP1蛋白能够促进Procaspase-3和Procaspase-8的活化剪切。以上结果表明：Re-WSP1蛋白能够明显的抑制结肠癌SW480细胞的增殖,并可能通过Caspase依赖途径诱导SW480细胞凋亡。     

以融合蛋白形式在E·Coli中表达人神经生长因子

将人神经生长因子基因（hNGF）克隆到pMalC2质粒中，构建了表达产物为麦芽糖结合蛋白（MBP）与hNGF的融合蛋白重组质粒。经由内切酶再水解及DNA序列测定等分析表明，重组质粒含hNGF基因（360bP），该质粒在E·Coli中的表达产物为融合蛋白MBP－hNGF（55kd），光密度扫描表明，其表达量约为30％。     

酸枣自由态和结合态多酚对人主动脉平滑肌细胞表型转化的影响

为研究酸枣肉、酸枣仁、酸枣叶中自由态和结合态多酚对人主动脉平滑肌细胞（human aortic smooth muscle cell,HASMC）表型的转化作用,将酸枣肉、酸枣仁、酸枣叶粉碎后,采用乙醇-酸碱消化法提取多酚;并用福林-酚比色法测定多酚质量浓度,对酸枣肉、酸枣仁、酸枣叶中自由态和结合态多酚质量浓度进行比较评价;倒置显微镜和荧光染色法观察酸枣多酚干预对HASMC表型转化的影响。结果表明：3 种自由态多酚中,酸枣叶自由态多酚（Ziziphus jujuba leaves free polyphenol-ethyl alcohol,ZSLFP-E）得率最高,结合态多酚中酸消化法提取的酸枣叶结合态多酚（Ziziphus jujuba leaves bound polyphenol-2-ethyl alcohol,ZSLBP-2-E）得率最高;ZSLFP-E和酸消化法提取的酸枣仁结合态多酚（Ziziphus jujuba seeds bound polyphenol-2-ethyl alcohol,ZSSBP-2-E）可以明显促进HASMC的形态由合成型（峰谷状）向收缩型（梭形）转变,且呈现时间和剂量依赖性。因此,ZSLFP-E和ZSSBP-2-E可以有效促进HASMC由合成型向收缩型转变,在动脉粥样硬化的预防和治疗中具有一定的应用前景。     

藜麦活性蛋白的制备及抗结肠癌效应评价

本研究以藜麦全谷为原料，采用丙酮-硫酸铵沉淀法经Q柱进一步分离纯化，结合MTT法确定了具有抗结肠癌活性的藜麦蛋白(WQP)，并在细胞水平上探究WQP的抗结肠癌活性。采用MTT试验表明WQP能够显著抑制结肠癌DLD1和HCT-8细胞的增殖，并具有质量浓度梯度依赖性，而对人正常结肠上皮细胞FHC无影响；细胞克隆形成试验及细胞形态学试验进一步证明了WQP具有显著的抗结肠癌作用；流式细胞技术检测结果表明WQP能够诱导结肠癌细胞凋亡。此外，细胞划痕试验表明WQP通过抑制DLD1、HCT-8细胞的增殖，阻滞了结肠癌细胞迁移。本研究为将WQP进一步开发成为天然抗结肠癌特医功能食品及保健品提供了理论依据，同时为藜麦蛋白的深度利用奠定了基础。     

用温度诱导融合表达含内蛋白子的人神经营养因子-3

将重组质粒 pTXB NT3(6 9kb)与载体 pJLA50 3(4 9kb)分别用Nde 1/BamH 1双酶切 ,然后将前者的人神经营养因子 3 内蛋白子 几丁质结合区 (hNT3 in tein CBD)DNA片段插入后者载体中 ,构建成一个含内蛋白子的温度诱导型表达载体pLZY0 1。经转化后 ,工程菌E coliBL2 1/ pLZY0 1在LB培养基中培养 ,表达产物约为4 2kD的hNT3 intein CBD融合蛋白 ,经DTT不完全化学拆除后 ,可得约 15kD的hNT3,2 7kD的intein CBD及 4 2kD的融合蛋白 ,产物经鸡胚背根神经节测定其生物活性 ,融合蛋白在 80ng ,hNT3在 2 5ng时能较好地促进神经纤维的伸长。     

胡麻粕多酚对肠癌细胞凋亡的促进作用

为了探究胡麻粕多酚的肿瘤细胞抑制活性,本研究以胡麻粕为原材料,采用超声提取法和福林-酚法提取并检测提取物中的多酚质量浓度;利用细胞克隆等实验评价胡麻粕多酚对结肠癌以及正常肠上皮细胞增殖的抑制效应;借助流式细胞术和蛋白免疫印迹技术检测胡麻粕多酚对肠癌细胞凋亡的调控;并检测胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平以分析胡麻粕多酚对结肠癌细胞内ROS产生的调节作用。结果显示：胡麻粕多酚具有明显的肿瘤细胞抑制活性,并能够促进促凋亡因子Bak和Bax蛋白的表达,抑制抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-XL蛋白的表达,且促进细胞色素c的释放;此外,随着胡麻粕多酚质量浓度的增大,DLD1和HCT-116细胞内ROS水平升高。综上所述,胡麻粕多酚能够通过提高肠癌细胞内的ROS水平并促进其进入线粒体凋亡途径从而发挥抗肿瘤作用。