双水相法萃取生姜蛋白酶体系的建立

以生姜为原料,研究了采用双水相萃取技术分离提取生姜中生姜蛋白酶的提取条件,利用单因素试验与正交试验进行优化,优化得到的萃取方案为:PEG分子质量为4 000 u,PEG浓度为30%,选择盐种类为(NH4)2SO4,浓度为10%,体系pH为8.0。此双水相体系的生姜蛋白酶上相酶活力回收和纯化倍数都最高,分别可达393.77%和1.85。     

Sephadex G-50纯化生姜蛋白酶的研究

采用Sephadex G-50为填料对粗提生姜蛋白酶进行了纯化,充分利用了尺寸排阻层析简便、高效、重复性好的特点,以酶得率、纯化倍数、柱效分析等参数为指标,研究了凝胶柱床高度、洗脱速度、上样量等条件对纯化效果的影响。确定了最佳纯化方案为:柱床高度50cm,上样量3mL粗酶,流速45cm/h,洗脱液总用量150mL。纯化后的生姜蛋白酶比活性是姜汁的4.192倍,粗酶的2.113倍,而且还去除了色素、不溶物等杂质,纯化效果极佳。     

唾液乳杆菌XH4B的a-半乳糖苷酶纯化及性质研究

本研究通过超滤、SephedaxG200凝胶过滤层析纯化来源于唾液乳杆菌XH4B（GeneBank索引号：JXl25456）的a-半乳糖苷酶,并对其酶学性质进行了研究。结果表明,超滤时采用100kDa的滤膜,分子量大于100kDa的组分有酶活。利用SephadexG200进行柱层析洗脱至370-400min时得到的组分表现出明显的a-半乳糖苷酶活力。SDS．PAGE电泳结果表明,该酶的蛋白质单体分子量为70-80kDa,未变性的酶蛋白应为多聚体,总分子量大于100kDa。利用酶比活力计算的结果,相对于粗酶,超滤纯化效率为149．80％,柱层析纯化效率为391．91％。经响应面优化,确定唾液乳杆菌XH4B来源的a-半乳糖苷酶最佳酶促反应条件为：柠檬酸缓冲液pH值5．5,离子强度0．15mol／L,反应温度52℃。该酶对pNPG的Km值为0．817。相对于纯水,各类金属离子中,仅有心和Na＋对酶活力有正向的激活作用,酶活力分别达到了102．50％和104．18％。EDTA（96．54％）,Mg”（91．53％）,ca2＋（82．51％）,以及DTT（79．38％）能够较大限度保留酶活力,而Zn2＋、cu2＋、pb2＋、Fe3＋和vc则显著阻碍了酶促活力,仅能保留5-7％。     

玫瑰茄发酵酸乳生产工艺研究

目的:将具有抗氧化活力的玫瑰茄与酸乳发酵结合起来,开发玫瑰茄发酵酸乳。方法:玫瑰茄活性物质采用温水浸提法,获得玫瑰茄花茶并将p H调整至6.0后进行酸乳的发酵。玫瑰茄活性物质通过测定540nm和280 nm吸光度值,分别对应玫瑰茄色素与精油的含量;玫瑰茄发酵酸乳的生产工艺以感官评价分数为响应值,通过单因素试验与响应面优化,最终获得玫瑰茄发酵酸乳的最佳生产工艺。结果:玫瑰茄浸液会对乳酸菌的生长造成一定的影响,玫瑰茄用量要小于0.5%;玫瑰茄浸提活性物质最佳条件为40℃温水浸提40 min。结论:最终确定的玫瑰茄发酵酸乳最佳生产工艺为玫瑰茄用量0.3%、奶粉用量5%、发酵时间24 h。     

生姜蛋白酶的双水相法萃取研究

以生姜为原料,研究双水相萃取技术分离提取生姜中生姜蛋白酶的提取条件。利用单因素试验与正交试验进行优化,得到最佳萃取方案为PEG分子量为4000,PEG浓度为20%,缓冲盐pH为6.5,缓冲盐浓度为10%。此双水相体系的上相酶活回收和纯化倍数都是最高,分别达279.05%和1.86。     

唾液乳杆菌XH4B的α-半乳糖苷酶纯化及性质研究

本研究通过超滤、Sephedax G200凝胶过滤层析纯化来源于唾液乳杆菌XH4B(GeneBank索引号:JX125456)的α-半乳糖苷酶,并对其酶学性质进行了研究。结果表明,超滤时采用100 kDa的滤膜,分子量大于100 kDa的组分有酶活。利用Sephadex G200进行柱层析洗脱至370~400 min时得到的组分表现出明显的α-半乳糖苷酶活力。SDS-PAGE电泳结果表明,该酶的蛋白质单体分子量为70~80 kDa,未变性的酶蛋白应为多聚体,总分子量大于100 kDa。利用酶比活力计算的结果,相对于粗酶,超滤纯化效率为149.80%,柱层析纯化效率为391.91%。经响应面优化,确定唾液乳杆菌XH4B来源的α-半乳糖苷酶最佳酶促反应条件为:柠檬酸缓冲液pH值5.5,离子强度0.15 mol/L,反应温度52℃。该酶对pNPG的Km值为0.817。相对于纯水,各类金属离子中,仅有K+和Na+对酶活力有正向的激活作用,酶活力分别达到了102.50%和104.18%。EDTA(96.54%),Mg2+(91.53%),Ca2+(82.51%),以及DTT(79.38%)能够较大限度保留酶活力,而Zn2+、Cu2+、Pb2+、Fe3+和Vc则显著阻碍了酶促活力,仅能保留5~7%。     

培养基pH调控法高密度发酵唾液乳杆菌XH4B研究

本研究以MRS培养基为基础,通过优化碳、氮源及无机盐的配方和用量,再结合补料发酵,最终实现唾液乳杆菌XH4B高密度培养的目的。以乳酸菌的生物量为指标,同时考查发酵液pH值、乳酸含量等,最终确定酵母粉和蔗糖为最佳氮、碳源,同时增加乙酸钠用量至2%、磷酸二氢钠0.6%,可以对发酵液酸化时提供一定的缓冲作用。采用优化的PY-Suc培养基,唾液乳杆菌XH4B的生物量最高能达到6.91 g/L,明显高于MRS培养基的5.01~6.30 g/L(P0.05)。等量补料培养并且采用NaOH中和发酵液pH值时,乳酸最高积累速度可以达到5.958 g/(L·h),但是随着培养时间延长,积累速度迅速下降。发酵酸化较严重时(乳酸含量9~10 g/L),唾液乳杆菌XH4B的生物量积累变缓。结论:优化MRS培养基,并加大乙酸钠、磷酸二氢钠等能够缓冲发酵液的无机盐用量,结合补料发酵,可以实现唾液乳杆菌XH4B的高密度培养。