红河传统发酵豆豉中高纤溶活性菌株的分离筛选及其纤溶酶基因分析

运用脱脂乳固体培养基及纤维蛋白固体培养基的两步分离筛选法,从云南红河传统发酵豆豉中分离筛选具有高产豆豉纤溶酶活性的菌株,同时对它们的豆豉纤溶酶基因进行克隆分析,以期为新型功能性豆豉的研发提供备选菌株及理论依据。研究结果表明,两步分离筛选法能有效地从云南红河传统发酵豆豉中筛选到高产豆豉纤溶酶的菌株Bacillus subtilis LC-2-1,对该高产菌株的豆豉纤溶酶成熟肽基因分析及预测结果表明,菌株B subtilis LC-2-1确实能分泌一种由825个碱基编码275个氨基酸残基且分子量约为27.4kDa的豆豉纤溶酶,与纳豆激酶及其他豆豉纤溶酶相比差异显著,同源性仅为85.1%。同时其豆豉纤溶酶活性分析结果则表明,菌株B subtilis LC-2-1所产纤溶酶活性较高,可达79.84 U/mL。因此,本研究结果将为新型且具有溶血栓功能发酵豆豉的研发提供备选菌株及理论依据。     

利用高通量测序分析云南两个地区豆豉微生物群落的多样性

豆豉是一种具有独特风味的传统发酵食品。研究豆豉的微生物群落多样性,对于提高豆豉质量和食用安全性具有重要意义。本研究分别采取云南西双版纳州的景洪市和勐海县的两个豆豉样品,提取DNA,PCR扩增细菌16S r DNA和真菌ITS区域并进行焦磷酸测序,通过分析测序所得结果比较两个豆豉样品中的细菌和真菌群落多样性。结果表明:景洪样品的最优势细菌是Leuconostoc mesenteroides,其次是Leuconostoc fallax。勐海样品中丰度最高的细菌是Staphylococcus gallinarum,其次是Tetragenococcus halophilus。两个样品中都含有少数序列与能够产细菌素的Weissella confusa和Weissella cibaria具有较高相似性。两个样品的优势真菌都是耐盐的Candida etchellsii和Candida versatilis。总之,西双版纳的豆豉具有较高的微生物群落多样性,以嗜盐菌居多。     

利用高通量测序分析云南豆豉中细菌群落多样性

发酵食品是人类饮食的重要组成之一,其中豆豉风味独特,富含多种生理活性物质。微生物在食品发酵过程中起着极为重要的作用。作者选择云南豆豉为研究对象,使用焦磷酸高通量测序,可以全面地分析豆豉中的细菌群落,能够得到其中稀少群落(rare biosphere)的信息。乳酸杆菌是丰度最高的细菌,占总序列数的72%,在豆豉发酵中起重要作用;芽孢杆菌也是重要的细菌,占序列总数的10%。此外,还发现了属于人类致病菌(Shigella flexneri)和植物病原菌(Erwinia persicina)的序列,显示出传统方法制作的豆豉中存在着食品安全隐患。     

微生物色素的生物合成及其遗传工程研究进展

微生物色素的批量生产是目前生物技术研究的热点之一.本文从色素微生物生物合成途径、相关基因的分离、遗传工程等方面来介绍微生物色素研究进展,并讨论了微生物色素遗传工程中的关键问题和发展趋势.     

具有高效ACE抑制活性乳酸菌的筛选及其益生特性研究

本研究运用紫外分光光度法初筛,再以HPLC法进行复筛,从31株源自云南传统发酵食品的乳酸菌中筛选具有高效ACE抑制活性菌株,同时研究其益生特性及脱脂乳发酵过程中ACE抑制率的动态变化。综合各项研究结果,最终筛选出ACE抑制率较高、抑菌谱广、耐酸耐胆盐性强,且对抗生素敏感的Lactobacillus plantarum YM-4-3作为研究菌株。益生特性研究表明,该菌株对Escherichia coli O 157:H 7和Listeria monocytogenes的抑菌圈直径可分别达41.30 mm和42.00 mm,甚至在高胆盐(0.3%)及强酸(p H 2.5)处理后仍保持较高活菌数(大于105 cfu数量级)。脱脂乳发酵过程中ACE抑制活性的动态监测表明,37℃发酵48 h是Lb.plantarum YM-4-3菌株发酵产生ACE抑制肽的最适培养条件,该发酵条件下获得的发酵乳的ACE抑制率可高达81.23%,菌体生物量、游离氨基酸及多肽含量也均达到最大值。本研究成果将为新型具有高效ACE抑制活性发酵乳制品的研发提供理论依据及菌株保证。     

华南忍冬总酚酸提取工艺优化及体外抗氧化活性研究

以华南忍冬为原料,采用微波辅助提取华南忍冬总酚酸,在单因素实验基础上,结合Box-Behnken响应面设计,探讨乙醇浓度、液料比、提取温度、提取时间和微波功率对总酚酸含量的影响,优化华南忍冬总酚酸最佳提取工艺条件,并通过DPPH自由基清除作用和铁离子还原能力来评价华南忍冬总酚酸提取物的抗氧化活性。结果表明最佳提取工艺条件为乙醇浓度80%、液料比12:1 mL/g、提取温度70℃、提取时间30 min、微波功率400 W,总酚酸含量达到59.45±0.13 mg/g,与模型预测值57.76 mg/g相近。提取物DPPH自由基清除率IC₅₀值为21.26 μg/mL,铁离子还原能力EC₅₀值为39.37 μg/mL。本试验表明华南忍冬总酚酸提取物具有较好的抗氧化活性,为华南忍冬综合研究提供理论依据。     

植物乳杆菌素产生条件及分离方法的优化

目前植物乳杆菌常规发酵产生的植物乳杆菌素产量一般较低,优化植物乳杆菌素的产生条件和分离纯化方法是提高其产量的有效途径。本文以3株Lb.plantarum为实验材料,研究了发酵时间、温度、培养液初始pH值和培养基成分等因素对Plantaricin产量的影响。基于优化培养条件的研究结果,再探究五种不同Plantaricin的分离纯化方法,使两者达到最佳组合。研究发现:(1)发酵时间在28~35 h内,温度30~37℃,培养液初始pH在6.5~7.0,10 g/L葡萄糖和10 g/L蔗糖为碳源,10 g/L蛋白胨、5 g/L牛肉膏和5 g/L酵母粉为氮源,2 g/L磷酸氢二钾、0.2 g/L硫酸镁、0.05 g/L硫酸锰、2 g/L柠檬酸铵和5 g/L乙酸钠为无机盐,1 mL/L吐温-80为乳化剂,优化后Plantaricin产量较优化前提高了1.5倍以上;(2)最佳分离方法为超滤法。发酵液通过超滤法分离后,回收率达到了71%。本研究为获得尽量多的Plantaricin以及Plantaricin工业化开发利用提供理论基础和技术支撑。     

植物乳杆菌近亲种中叶酸生物合成途径的基因多态性分析

研究从传统发酵食品中分离植物乳杆菌并进行近亲种鉴定,通过直接测序法对8株植物乳杆菌近亲种的叶酸生物合成途径中5个关键基因fol B,fol E,fol K,fol P和fol Q进行扩增,并采用系统进化分析、核苷酸和氨基酸序列比对对基因多态性进行分析.结果发现,fol B,fol E和fol K基因具有较高的同源性,同时存在1处同义替换的SNP位点,fol P基因存在的14处SNP位点中,仅1处发生非同义替换,说明这些基因在氨基酸水平上相对保守.8株植物乳杆菌近亲种存在fol Q基因,但编码蛋白与Fol Q蛋白不具有同源性,故推测其拥有与Fol Q蛋白功能相似的生物酶,这些拟似酶有待进一步克隆鉴定与功能研究.本实验为植物乳杆菌近亲种中叶酸生物合成途径的分子调控机理提供前期基础.     

微生物几丁质酶的研究进展及应用现状

几丁质酶（chitinase）是一类可催化几丁质水解为N-乙酰氨基葡萄糖寡聚体或单体的糖苷水解酶,广泛存在于微生物（真菌、细菌、放线菌与病毒）及动植物中,因其特殊的生理功能而被广泛应用于生物防治、医学应用、废弃物处理及环境保护等领域。文章综述了微生物几丁质酶的来源与分类、发酵条件、酶学性质及应用领域,以期为几丁质酶的进一步开发应用提供理论指导。     

基于混合培养和高通量测序分析云南传统发酵豆豉中活性细菌群落

选择两个使用传统发酵的豆豉样品,先进行混合预培养,再对混合培养液进行DNA提取和16S rRNA基因扩增及焦磷酸测序,最后对得到的序列进行分析。结果表明：两个样品在序列相似度为98%时多样性均较高。其中XG_1的主要细菌为肠球菌、甲基营养型芽孢菌和乳酸片球菌,在XG_2中的主要细菌为枯草芽孢杆菌和甲基营养型芽孢杆菌。