尼古丁诱导人肠道上皮细胞自噬水平的研究

  目的  探讨尼古丁对人肠道上皮细胞自噬水平的影响和可能的分子机制。  方法  正常培养人肠道上皮细胞, 采用不同浓度(0、2.5、5、10μM)尼古丁处理细胞24h。倒置显微镜观察细胞形态变化; 通过CCK8法检测肠道上皮细胞的增殖情况; 通过Western blot检测自噬标志物LC3、beclin1和p62变化; 通过透射电子显微镜(TEM)检测自噬小体形成情况; 通过GFPLC3转染后激光共聚焦显微镜检测自噬斑点形成情况。同时, 也检测了内质网应和mTOR/AMPK/Akt信号通路变化。  结果  细胞增殖随着尼古丁浓度的增加受到明显抑制, 2.5μM尼古丁对细胞形态和增殖无显著影响。尼古丁能够上调LC3B-II和beclin1蛋白表达水平, 同时下调P62的表达, 且成浓度依赖性。TEM和激光共聚焦显示尼古丁作用后, 肠道上皮细胞自噬体数量显著增加。  结论  低浓度的尼古丁能够诱导肠道上皮细胞的自噬, 且对细胞增殖无影响, 机制与内质网应激和mTOR/Akt信号通路激活相关。