食品中空肠弯曲菌荧光重组酶聚合酶扩增检测方法的建立

本研究为了实现空肠弯曲菌的快速和便捷检测,建立了一种基于荧光重组酶聚合酶扩增技术(exo-RPA)快速检测空肠弯曲菌的方法。通过对空肠弯曲菌和对照菌株的exo-RPA检测来判断该方法的特异性。用梯度稀释的空肠弯曲菌作为模板进行检测来分析exo-RPA方法的灵敏度。通过对模拟污染样品检测来分析exo-RPA的应用效果。分别以exo-RPA和荧光PCR检测实际食品样品来分析二者的检测效果。空肠弯曲菌exo-RPA方法可特异检出空肠弯曲菌,检测灵敏度达到6.0×102CFU/m L。在模拟污染试验中,含2.5×101 CFU/m L空肠弯曲菌的增菌液在培养24 h后可以被exo-RPA检测出阳性信号。exo-RPA和荧光PCR对于40份样品的检测结果相同。本研究建立的空肠弯曲菌exo-RPA具有特异、灵敏和抗干扰性强的特点,方法操作简便快速,具有较好的应用前景。     

侧向流动型重组酶聚合酶扩增技术检测食品中大肠埃希氏菌O157

研究内容基于侧向流动型重组酶聚合酶扩增(Lateral flow-based recombinase polymerase amplification,LF-RPA)技术原理,建立大肠埃希氏菌O157(Escherichia coli O157)的LF-RPA快速检测方法。应用该方法对3株大肠埃希氏菌O157和27株非大肠埃希氏菌O157进行检测,结果表明该方法具有良好的特异性。分别以10倍浓度梯度稀释插入靶基因序列的质粒pUC57-rfbE和大肠埃希氏菌O157菌液DNA作为模板进行LF-RPA检测。结果表明LF-RPA方法可检出1.0×10²拷贝/μL的pUC57-rfbE质粒和1.2×10⁴ cfu/mL的大肠埃希氏菌O157菌液。以大肠埃希氏菌O157污染食品样品,增菌4 h后,大肠埃希氏菌O157初始浓度为1.2×10¹ cfu/mL的食品增菌液可以被LF-RPA检出阳性信号。该研究建立的方法可快速、准确、灵敏地检测食品中大肠埃希氏菌O157,无需专业设备,在食品生产企业和基层检测机构具有一定的应用前景。