响应面优化酶法辅助提取山楂果胶及其体外抗氧化和抗糖化活性

本研究以山楂粉为原料,在木聚糖酶添加量、酶解温度、溶剂pH以及酶解时间4个单因素实验的基础上,采用响应面实验优化木聚糖酶提取山楂果胶的工艺,并对提取果胶的体外抗氧化和抗糖化能力进行了研究。结果表明,木聚糖酶提取山楂果胶的最优工艺条件为:木聚糖酶添加量70 U/g、pH7.0以及50.5℃,酶解时间为3.0 h,实得山楂果胶得率为16.8%±0.2%。在体外抗氧化和抗糖化实验中,随着果胶多糖浓度的增加,DPPH·清除率从19.4%增至63.7%,·OH清除率从10.1%增加到69.3%,O₂-·清除率从12.8%增加到59.2%;在BSA-果糖模拟反应体系下,果胶的糖化抑制率从20.9%增加到55.4%,BSA-MGO(B)模拟反应体系下,果胶的糖化抑制率从10.7%增加到了55.9%,因此酶法提取的果胶多糖具有明显的体外抗氧化和抗糖化活性,并且其活性与浓度成正相关,是一种天然的食源性体外抗氧化和抗糖化试剂。     

应用基因芯片技术检测肉及肉制品中5种致病菌

建立一种运用多重聚合酶链式反应(PCR)结合基因芯片技术检测大肠埃希氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和单核细胞增生李斯特菌5种食源性致病菌的快速、准确、灵敏的方法。分别选取编码大肠埃希氏菌的slt基因、沙门氏菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、志贺氏菌ipaH基因和单核细胞增生李斯特菌inlA基因,并以细菌16S rDNA基因作为阳性对照,设计引物和探针,进行多重PCR扩增,产物与含特异性探针的芯片杂交。结果表明：该基因芯片可同时特异性地检测5种致病菌,多重PCR检测灵敏度为20pg,而DNA芯片检测灵敏度可达2pg;用所制备的基因芯片检测实际肉及肉制品样品,准确率高于传统培养法。所建立的基因芯片检测方法特异性好、灵敏度高,可为食源性致病菌的检测提供理想手段。     

基于DNA染料EMA的RT-PCR技术定量检测海产品中病原性副溶血弧菌活细胞

将一种DNA染料叠氮溴化乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)与实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术相结合,建立一种能选择性定量检测牡蛎中trh阳性副溶血弧菌活细胞的新方法。结果表明：使EMA成功插入死细胞DNA并且光解溶液中游离EMA的最佳曝光时间为20min;不抑制副溶血弧菌活细胞DNA扩增的最大EMA质量浓度为2.0μg/mL;完全抑制热致死细胞DNA扩增的最小EMA质量浓度为1.0μg/mL;人工污染牡蛎样品,不经过富集,在2.0×103～2.0×107CFU范围内细胞数的常用对数值与Ct值之间呈严格的负相关性,并且纯培养与人工污染牡蛎样品的RT-PCR检测限均为2×103CFU,即人工污染牡蛎样品的RT-PCR检测灵敏度为每克牡蛎样品400个活细胞;冻融实验表明,在温度低于55℃的水浴中对冷冻海产品进行解冻时,冻融过程对副溶血弧菌活细胞几乎没有影响。该方法是一种快速、灵敏且能有效鉴别并定量检测病原活细胞的新方法。     

不同方法提取的山楂果胶理化性质及体外抗糖化活性的对比

本研究以山楂粉为原料,采用热水浸提、超声辅助热水浸提、酶法辅助热水浸提三种方法提取果胶,探究不同提取方法对果胶得率、总糖含量、总酚含量、半乳糖醛酸含量、酯化度和粘度等理化性质及体外抗糖化活性的影响。结果表明,酶法辅助热水提取果胶的得率最高,达到17.7%,且相应酯化度和粘度最高,但操作过程复杂;热水浸提法果胶得率次之,为10.1%,但总酚含量和酯化度最低;超声辅助热水提取法得率最低,仅有6.4%,但其总糖含量及多聚半乳糖醛酸量最高。体外抗糖化活性分析表明,超声辅助热水法提取的果胶抗糖化活性最强,在BSA-果糖以及BSA-丙酮醛模拟体系中的糖化抑制率分别为82.7%和79.8%,抗糖化活性与半乳糖醛酸酸含量成正比。由此可见,不同提取方法对山楂果胶得率、理化特性以及抗糖化活性均具有很大的影响。     

一株菲降解细菌的培养条件优化及特性研究

通过选择性富集培养,从沈抚灌区石油污染土壤中分离到1株菲降解细菌L2,该菌株能以菲为唯一碳源和能源生长.通过对L2菌株培养基及培养条件优化,确定其最佳培养基为玉米粉4%,蛋白胨1%,NaCl1%,酵母膏0.5%;最佳培养条件为pH值7.0～7.2,温度28～30℃,150 mL三角瓶装液量50 mL.在此基础上测定了L2菌株在不同浓度菲中邻苯二酚2,3-双加氧酶活力.结果表明,随着菲浓度从50 mg·mL-1增加到350 mg·mL-1,邻苯二酚2,3-双加氧酶活力呈先增加后减小趋势.     

山楂多糖的分离纯化及抗氧化和抗糖化活性研究

本研究以山楂果为原料,热水浸提法提取山楂多糖,脱色和除蛋白后采用DEAE-52纤维素进行分离纯化,在此基础上对各多糖组份的单糖组成以及体外抗氧化和抗糖化活性进行了检测,并对其构效关系进行了简单分析。结果表明,分离纯化分别得到水洗中性多糖(water-washed polysaccharide,WPS)以及盐洗酸性多糖SPS-1(salt-washed polysaccharide 1,SPS-1)、SPS-2和SPS-3,其层析回收产量分别为46.33%、7.86%、37.94%和7.12%。单糖组成分析发现,WPS的主要单糖组成为半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖和葡萄糖,而SPS-2、SPS-1和SPS-3的单糖组成主要为半乳糖醛酸、半乳糖、鼠李糖和阿拉伯糖,其中半乳糖醛酸含量依次为25.65%、74.93%和85.77%。结合单糖组成和红外光谱结果,SPS-1、SPS-2和SPS-3可能是果胶。体外活性研究结果表明,盐洗多糖的体外抗氧化和抗糖化活性明显强于水洗多糖,且盐洗多糖中SPS-3的活性最强,其次是SPS-2和SPS-1,这可能与其分子中较高的半乳糖醛酸含量和较低的分枝度有关。本研究结果在食源性天然抗氧化剂和抗糖化剂的开发方面具有重要意义。     

山楂果胶寡糖及其复合物对枯草杆菌的抗菌作用

由于独特的胶凝性和增粘稳定性而在食品添加剂领域表现出广泛用途的山楂果胶,其低分子的分解产物—山楂果胶寡糖对枯草芽孢杆菌具有很强的抗菌性。进一步对山楂果胶寡糖与其他天然食品添加剂进行复配后的抗菌性进行分析的结果表明,山楂果胶寡糖与乳酸钠的复合物与二者单独使用相比对枯草芽孢杆菌具有更强的抗菌作用,在pH=5的条件下,5mg/mL的山楂果胶寡糖与10mg/mL乳酸钠的复配物即可完全抑制枯草芽孢杆菌的生长,在天然食品防腐添加剂的开发利用领域表现出了良好的应用前景。     

肉及肉制品中沙门氏菌活细胞的PCR检测研究

将荧光染料叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与普通聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结合,通过对PMA的曝光时间、浓度进行优化,确定PMA-PCR区别死活细胞的最佳条件,并制作活细胞定量标准曲线,建立肉及肉制品中沙门氏菌活细胞的PMA-PCR检测方法。结果表明：使插入死细胞DNA中的PMA活化并且光解溶液中游离PMA的最佳曝光时间为15min;不抑制沙门氏菌活细胞DNA扩增的最大PMA质量浓度为10μg/mL;完全抑制热致死细胞DNA扩增的最小PMA质量浓度为4μg/mL。经PMA处理,含有不同比例的沙门氏菌热致死细胞和活细胞的混合液中活的沙门氏菌能够通过PCR被选择性的检测,最小检测限为20CFU/PCR。而且,经研究发现在20～2×105CFU/PCR范围内,电泳条带相对荧光强度与活细胞数的对数具有线性关系。采集30份肉及肉制品样品,利用PMA-PCR方法检测出两份生肉样品中存在沙门氏菌,经过6h的富集培养后的活菌浓度分别为2.5×103CFU/mL和3.4×103CFU/mL。     

荧光染料EMA在实时荧光PCR定量检测海产品中致病性副溶血弧菌活细胞中的应用

将荧光染料--叠氮溴乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)与实时荧光-聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)技术相结合,对其在RT-PCR定量检测海产品中致病性副溶血弧菌活细胞中的应用进行研究。纯培养条件下,在2.2×102～2.2×107CFU范围内细胞数的常用对数值与Ct值之间呈严格的负相关性,并且不添加EMA时的检测灵敏度(22CFU)略大于添加EMA(2.2×102CFU)时的检测灵敏度;人工污染牡蛎样品,利用RT-PCR和EMA RT-PCR以及平板计数法分别进行副溶血弧菌定量检测,结果表明EMA RT-PCR更接近于平板计数的结果,单纯RT-PCR定量的结果偏大;在采集的45份海产品样品中,不经富集培养,利用EMA RT-PCR方法仅有一份牡蛎样品呈阳性,牡蛎样品污染程度为114CFU/g。该方法能够快速、灵敏、准确地进行海产品中致病性副溶血弧菌活细胞的定量检测,具有很好的应用价值。