牛奶中兽药残留检测前处理技术研究进展

随着我国经济的发展,国内乳制品的消费比例及需求不断增加,如何把好乳制品源头关-“牛奶”,成为了提高我国乳制品质量安全的重要环节之一。其中,由于在奶牛生产中,不合理使用兽药引起的兽药残留超标,成为影响消费者身体健康的重要隐患之一。在牛奶兽药残留检测过程中通常分为前处理和仪器分析两部分,由于牛奶基质复杂及兽药种类多、极性不一,使得在牛奶前处理过程中一方面要求尽可能地去除基质干扰,另一方面又要求尽可能地减少待测物流失。因此,对牛奶前处理提出了更高的要求。本文对国内外牛奶兽药残留检测中常用的前处理技术进行了综述,对其优缺点进行了分析比较,并对其发展方向进行了展望,以期为提高牛奶检测水平及质量安全提供帮助。     

人组织型纤溶酶原激活剂转基因功能鸡蛋的研究及其活性分析

为探索人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)在鸡卵黄中积淀的可行性,开发具有抗心血管疾病的功能性鸡蛋,应用分子生物学技术分别构建含有人t-PA 基因和t-PA 与鸡卵黄高磷蛋白融合基因的真核表达质粒pcDNA3-tPA 和pPhosvitin-tPA,脂质体包裹后分别注射于初产蛋鸡的肝脏,Western blotting 和ELISA 检测t-PA 基因在鸡肝脏中的表达和在卵黄中的积淀情况,琼脂糖平板溶圈法检测期其活性。结果显示,注射重组质粒后7d,卵黄中有分子质量为63kD 的t-PA 积淀,表达可持续5 周,高峰表达量分别为39.16mg/L 和53.92mg/L;琼脂糖平板溶圈法检测其活性表明,卵黄中的t-PA 具有激活组织纤溶酶的活性。实验证明了外源基因表达产物在卵黄中积淀这一途径的可行性。     

甘草多糖对单核细胞增生性李斯特菌体内外生长的影响

目的：探讨甘草多糖对单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes,Lm）体内外生长的影响。方法：采用平板计数法和荧光显微镜、分光光度法及Bliss法分别分析甘草多糖对Lm生长速率和生物被膜形成的影响及计算细菌对小鼠半数致死量（median lethal dose,LD50）。观察低剂量（1 mg/kg）、中剂量（10 mg/kg）和高剂量（100 mg/kg）甘草多糖对感染100×LD50 Lm小鼠的保护力。小鼠感染0.01×LD50的Lm后1、7、14、21、28、35 d剖杀小鼠,检测脾脏、肝脏和肺脏中Lm分布的消长情况。结果：低质量浓度时（10、20、50 μg/mL）,甘草多糖随着质量浓度增加对Lm标准菌株10403S生长速率和生物被膜形成的促进作用呈上升趋势;但高质量浓度时（100、200 μg/mL）这种促进作用逐渐降低。Lm口服感染小鼠的LD50为2.70×108 CFU。高剂量甘草多糖对于100×LD50的Lm感染可提供50%的保护力。0.01×LD50的Lm感染小鼠,随着甘草多糖质量浓度增加小鼠脾脏、肝脏和肺脏的细菌量逐渐减少。结论：低质量浓度甘草多糖在体外对Lm的生长具有促进作用,但随着质量浓度增高促进强度逐渐降低,而甘草多糖可以提高小鼠抵抗Lm感染的能力。     

降胆固醇乳酸杆菌的筛选及对小鼠血清胆固醇的影响

目的：从羊新鲜粪便中分离筛选具有降胆固醇能力的乳酸杆菌,探讨其对小鼠血清胆固醇含量的影响。方法：以碳酸钙-MRS培养基和胆固醇-MRS培养基筛选具有高效降胆固醇能力的乳酸杆菌;利用形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定分离菌株L-3。为了验证其效果,将40 只8 周龄雄性BALB/c小鼠随机分为基础饲料组（A）、高脂模型组（B）、高脂模型＋生理盐水组（C）、高脂模型＋菌株L-3组（D）。分别饲喂第15、30天,采血,测定总胆固醇（total cholesterol,TC）、总甘油三酯（triglyceride,TG）和高密度脂蛋白胆固醇（highdensity lipoprotein-cholesterol,HDL-C）的含量。结果：筛选得到一株能够高效降解胆固醇的菌株L-3,胆固醇降解率达到（35.93±0.43）%,经鉴定为植物乳杆菌。饲喂第15天,成功构建出高脂血症小鼠模型。灌胃第30天,与B组相比,D组TC、TG、动脉硬化指数水平均极显著降低（P＜0.01）,HDL-C水平显著升高（P＜0.05）,HDL-C/TC水平极显著升高（P＜0.01）,而对照组几乎无降胆固醇效果（P＞0.05）。结论：实验获得了1 株在体内外均具有高效降胆固醇能力的植物乳杆菌Lactobacillus plantarum L-3,为进一步开发其为功能性微生态制剂提供了可能。     

双纤维素酶基因在乳酸杆菌中的融合分泌表达

为提高纤维素的降解效率,将两种不同的纤维素酶基因在乳酸杆菌中融合表达,实现双纤维素酶在乳酸杆菌中的高效表达。根据两纤维素酶的基因序列设计两对引物,并在两基因间引入一段连接肽。通过聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）分别扩增得到两纤维素酶基因CelL15和CelL73,将其融合后连接到乳酸杆菌分泌性表达载体pMJ67中,构建重组表达质粒pMJ-CelL15-CelL73,电转化入乳酸杆菌Lactobacillus casei,利用红霉素MRS平板筛选阳性克隆,通过PCR验证获得了分泌表达双纤维素酶的重组乳酸杆菌。电泳实验结果表明重组乳酸杆菌成功表达了1 个约为83 kD的融合蛋白。平板酶活力检测发现重组乳酸杆菌能明显降解底物中的羧甲基纤维素钠,培养液上清中纤维素酶酶活力可达1.25 U/mL。