复合酶法高效制备紫菜原生质体的研究

以紫菜(Porphyra yezoensis)为研究对象,通过复合酶水解获得原生质体,研究酶解温度、加酶量、酶解时间、摇床转速、盐度、复合酶中组分比例、金属离子对酶解后原生质体数的影响。在单因素试验的基础上,以原生质体数为指标,选取因子与水平进行正交实验,对酶解条件进行优化研究。结果表明,最佳酶解条件为:酶解温度28 ℃、转速125 r/min、纤维素粗酶含量3%、琼胶酶12 mL、盐度4%、酶解时间100 min。同时发现一些金属离子对原生质体制备有抑制作用。在最优酶解条件下,得到的原生质体活率较高,即1 g紫菜样品经酶解得到的原生质体活率高达(16.88±0.22)×106个/g。综上,复合酶法制备紫菜原生质体反应条件温和、成本低廉,为紫菜的遗传育种以及在水产养殖中的应用研究提供理论依据。