PMA-qPCR方法用于监测超声波灭菌效率的适用性及其应用

为研究PMA-qPCR方法的适用性问题,本文以超声波制备膜损伤细菌,用PMA-qPCR方法进行检测,并与平板计数的结果进行比较,证明该方法适用于监测超声波法灭菌率的监测.将该方法用于检测不同因素对超声波灭菌效率的影响,表明在温度和超声频率一定的条件下,处理时间和功率对灭菌效率的影响比较明显,而占空比对其影响较小.     

平板显色法同时计数生乳中的大肠菌群和菌落总数

为提高大肠菌群和菌落总数的计数效率，选用2-硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷作为平板培养基中的显色底物，利用大肠菌群lacZ基因编码的β-半乳糖苷酶将其分解产生黄色化合物，使得大肠菌群菌落区分于其他菌株，实现大肠菌群和菌落总数的同时计数，优化该培养基配方，评估培养基的特异性、准确性以及在生乳中的应用效果。最终确定该培养基配方：胰蛋白胨12.5 g/L、酵母浸粉2.5 g/L、磷酸氢二钾2.75 g/L、磷酸二氢钾1.75 g/L、氯化钠5.0 g/L、琼脂15.0 g/L，2-硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷0.1 g/L，pH值为7.0。在此基础上，添加0.05 g/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷或2.0 g/L乳糖均能够增强菌落显色效果，而葡萄糖则会抑制黄色化合物生成。特异性实验中，仅大肠菌群菌落颜色呈黄橙色，其他菌株则呈乳白色。在生乳样本中，该培养基与国标方法对于大肠菌群和菌落总数的计数结果基本一致。因此，该复合显色培养基能够大大提高大肠菌群和菌落总数的计数效率，降低检测成本，为生乳的卫生指标检测提供一种可行方案。     

腾冲嗜热厌氧菌耐热解旋酶Tte-uvrD的克隆表达及粗酶的初步应用

以腾冲嗜热厌氧菌(Thermoanaerobacter tengcongensis)基因组DNA为模版,通过PCR克隆编码解旋酶Tte-uvrD的基因tte-uvrd,将该基因插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达载体pET-32a(+)-tte-uvrd,转入E.coli BL21中,经蓝白斑筛选和双酶切法筛选阳性重组转化子,挑取测序正确的单个阳性菌落,在IPTG诱导下表达出重组蛋白Tte-uvrD。诱导后的菌体经超声破碎和离心,上清液用硫酸铵沉淀法初步纯化,透析除盐,冻干复溶后得到粗酶液。用tHDA反应来验证Tte-uvrD粗酶液的活性,比较不同储存温度下粗酶液酶活保持的时间,并比较-20℃下储存两个月的粗酶液与商品化纯酶的tHDA反应灵敏度。结果表明,用本研究建立的克隆方法可成功克隆出耐热解旋酶TteuvrD,其粗酶液能用于tHDA反应,说明粗酶液具有解旋活性;粗酶液在-20℃下第80d酶活仍能保持稳定,4℃下则只能保持酶活约一周;-20℃下储存两个月的粗酶液能达到与商品化纯酶相当的灵敏度。     

LAMP实时浊度法快速检测转基因玉米MON810

LAMP实时浊度法是采用环介导等温扩增（Loop Mediated Isothermal Amplification,LAMP）技术通过实时浊度仪实时检测反应过程中所产生的白色沉淀,从而实现对扩增全过程的监控,弥补了显色法只能观看反应终点的缺陷,使引物筛选和反应体系的优化有数据可依。本研究以转基因玉米MON810为研究对象,针对外源基因苏云金芽孢杆菌杀虫毒蛋白CryIA(b)与内源基因边界序列设计6条特异性引物,通过实时浊度法在63 ℃的恒温条件下完成检测,对检测的灵敏度、特异性、稳定性进行了评价。建立了转基因玉米MON810的LAMP实时浊度检测方法,该方法最低检出限为0.5%,与LAMP显色法和实时荧光PCR法进行结果比对,符合率为100%,经评价具有特异性高、稳定性强、准确简便等优点,非常适合转基因玉米MON810的快速检测,有较好的应用价值。     

Fe~(2+)和Fe~(3+)对菠萝蛋白酶活性和稳定性的影响

本文研究不同浓度的Fe~(2+)和Fe~(3+)对菠萝蛋白酶活性和60℃下酶稳定性的影响,以及通过圆二色谱检测Fe~(2+)和Fe~(3+)对酶构象的变化,并初步探究EDTA-2Na结合超滤膜法在菠萝蛋白酶制备工艺中清除铁离子的应用效果。结果表明:Fe~(2+)浓度在0~0.75 mmol/L范围内,对菠萝蛋白酶活性有促进作用,以0.5 mmol/L促进效果最佳,但浓度大于0.75 mmol/L时,抑制酶活,且随浓度增加,抑制程度增强。Fe~(3+)对菠萝蛋白酶只有抑制作用,抑制程度与Fe~(3+)浓度成正比,且Fe~(3+)对酶的抑制作用强于Fe~(2+)。60℃下,Fe~(2+)在浓度为0.5 mmol/L对菠萝蛋白酶的稳定性表现出促进作用,延长了酶的半衰期。Fe~(3+)对酶的稳定性呈现抑制作用。Fe~(2+)和Fe~(3+)浓度大于0.5mmol/L时,随离子浓度的升高,对酶稳定性的抑制作用增强。采用圆二色谱检测酶的二级结构表明:Fe~(2+)和Fe~(3+)对酶抑制作用表现为α-螺旋含量下降,β-折叠和β-转角含量稍下降,无规卷曲含量明显提高。EDTA-2Na结合超滤膜法除铁的效果很明显,铁含量(干重)从291.63 mg/kg降低到142.99 mg/kg,铁离子去除率达50.97%,其酶活也由597.27 U/mg上升到808.52 U/mg,酶活提高了26.13%。     

基于cgcA基因实时荧光PCR快速检测穆汀斯克罗诺杆菌的研究

为实现奶粉中常见污染菌穆汀斯克罗诺杆菌的快速检测与控制,本文根据cgcA基因序列设计出特异性探针和引物,建立了运用实时荧光定量PCR法检测穆汀斯克罗诺杆菌的反应体系和反应条件,并对该法的特异性、灵敏度、稳定性进行评价,并进行人工染菌样品检测实验。特异性结果表明,对穆汀斯克罗诺杆菌的荧光PCR检测结果的特异性为100%;灵敏度结果表明,穆汀斯克罗诺杆菌检出限在440 cfu/m L;稳定性结果表明,穆汀斯克罗诺杆菌组内实验CV在0.48~0.69%之间波动,而组间实验CV在0.69~0.73%之间波动;人工染菌样品试验表明,在增菌6 h后能检出阳性。本研究所建立的实时荧光定量PCR法特异性好、灵敏度高、稳定性强,有望成为快速检测食品中穆汀斯克罗诺杆菌污染的新方法,具有很好的研究价值和应用前景。     

百里香酚和肉桂醛联用对沙门氏菌的协同抑菌效应及其应用

研究了百里香酚和肉桂醛联用对沙门氏菌的抑菌效果,并将两者作为复配抗菌剂应用于盐焗鸡中以探究其保鲜效果。采用微量稀释法确定了百里香酚和肉桂醛对沙门氏菌的最小抑菌浓度及联合抑菌效果,结果显示百里香酚和肉桂醛的最小抑菌浓度均为0.25 mg/mL、最小杀菌浓度均为0.5 mg/mL;此外,两者联用时的分级抑菌浓度指数为0.75,表明百里香酚和肉桂醛具有较好的协同抑菌效应;该结论同样被时间-杀菌曲线、扫描电子显微镜、PI染色实验的结果所证实,百里香酚和肉桂醛联用可以显著地破坏沙门氏菌细胞膜的完整性,改变细菌形态,从而导致胞内物质泄漏、最终菌体裂解死亡,表明其具有一定的防腐保鲜应用潜力。因此,该研究以盐焗鸡作为食品模型从微生物和脂质氧化两方面探究了百里香酚和肉桂醛的防腐保鲜效果,结果显示百里香酚和肉桂醛联用可以显著地抑制盐焗鸡中细菌的增殖和脂质的氧化,表明百里香酚和肉桂醛联用可以作为一种天然复配抗菌剂应用于盐焗鸡等熟肉制品的保鲜中。     

中药提取物中重金属离子的去除方法研究

采用001×7强酸性阳离子交换树脂,对中药提取物中有害重金属离子pb2+、Cd2+、Cu2+进行吸附去除试验,并检测离子交换处理对其黄酮含量回收率的影响.结果表明:001×7强酸性阳离子交换树脂对于中药提取物所含重金属离子pb2+、Cd2+、Cu2+去除效果显著,黄酮回收率为95.3～97.9％.001×7强酸性阳离子...     

高致病性猪繁殖与呼吸系统综合症病毒荧光定量PCR检测方法的建立

为了对当前爆发流行的高致病性猪繁殖与呼吸系统综合症病毒建立快速准确的检测方法,根据该类病毒在Nsp2基因1594-1680处缺失87个碱基的特点,设计了一对特异性引物和一个Taqman探针,通过对反应条件的优化,建立了荧光定量PCR检测方法.该方法特异性强,灵敏度高,能很好地区分高致病性猪繁殖与呼吸系统综合症病毒和其它病毒,没有发现假阳性和假阴性现象,检测病毒滴度达到1TCID50.用该法对38份疑似样本进行检测,阳性率60.5%,与常规PCR法符合率100%.     

养殖大黄鱼脱脂脱腥处理前后挥发性成分的变化

采用不同方法对养殖大黄鱼进行脱脂脱腥处理,并用固相微萃取和气质联用法分析和鉴定养殖大黄鱼脱脂脱腥处理前后挥发性成分的变化。经NIST质谱数据库检索和文献对照,脱脂脱腥前的大黄鱼检测出48种成分,其中以羰基化合物和醇类为主,腥味成分主要为己醛、2,4-癸二烯醛、1-戊烯-3-酮、3,5-辛二烯-2-酮、1-戊烯-3-醇和1-辛烯-3-醇。碱法处理和碱盐结合法处理后的大黄鱼分别检测出24和18种成分。结果表明,碱法和盐法不仅有效得降低养殖大黄鱼的脂肪,还能促进鱼体内腥味成分的析出,从而改善养殖大黄鱼的肉质、风味等品质。