副溶血弧菌胶体金检测试纸条的改进

研制一种快速、灵敏、简便的胶体金免疫试纸条,用于改进副溶血弧菌的检测。通过胶体金与特异性针对于副溶血弧菌的单抗偶联,同时在NC膜上包被兔多抗、驴抗鼠的IgG分别作为检测线和质控线,制备免疫层系试纸条,测定试纸条的灵敏性与特异性。结果表明,当加入由胶体金标记的羊抗鼠二抗,能将显色强度提高5倍,明显有利于肉眼的观察。在纯培养物中试纸条的灵敏度为106CFU/mL,且与3株不同的副溶血弧菌均有阳性反应,与26株常见的菌均无交叉反应。同时在添加阪崎肠杆菌、志贺氏菌的鱼肉样本中,检测限为107CFU/mL。改良的副溶血弧菌胶体金免疫层系试纸条的建立,有助于加强食品中该菌的检测,提供了一种快速、灵敏、简便的方法。     

豆豉中主要分离细菌对小鼠生化指标及肠道菌群的影响

采用豆豉样品进行细菌分离培养和细菌16S rDNA基因PCR扩增、测序分析,并将分离所得细菌进行小鼠灌胃实验。结果显示,豆豉中的主要分离细菌为枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、类肠膜魏斯氏菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、发酵乳杆菌、表皮葡萄球菌。并且,各菌对小鼠丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)各项生化指标基本无影响。然而,其中解淀粉芽孢杆菌DC02能极显著性地降低小鼠血糖(GLU)水平,该菌有望成为治疗糖尿病的潜在菌株。活菌计数结果表明,除表皮葡萄菌以外,豆豉中分离所得其它细菌均能改善肠道菌群结构。可见,豆豉中分离所得主要细菌对正常机体安全、无致病性。     

副溶血弧菌的磁珠捕获及检测

建立结合免疫磁珠和PCR快速检测副溶血性弧菌的新方法.本研究选用副溶血弧菌作为抗原免疫日本大耳兔制备了多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价.利用辛酸硫酸铵沉淀结合逆向吸附对多抗血清进行纯化,经SDS-PAGE和斑点杂交检测验证纯化后抗体的特异性.将纯化后的抗体偶联于羧基化修饰的纳米磁珠表面,用来进行菌体的捕获.结果表明,抗体的效价达到106,纯化获得只与副溶血弧菌发生反应的高纯度抗体.制备的免疫磁珠捕获率在55％ ～70％之间,且稳定性较好,盐离子浓度(3.5％ NaCl、4.5％ NaCl)对捕获率的影响不大,在pH5～9之间,磁珠捕获差异也较小.在对纯培养物的检测实验中,本方法最低检测限为102cfu/mL;而在鱼肉糜样本中的检测限为103cfu/mL,且样品中高浓度杂菌的存在不影响检测灵敏度.免疫磁珠结合PCR用于副溶血性弧菌的检测具有很高的灵敏度和特异性,具有广阔的前景.