N+离子注入诱变选育耐酸性α-淀粉酶高产菌株

本工作研究低能N⁺离子注入中温α 淀粉酶产生菌BF7658的诱变方法。经不同注量的N⁺离子注入实验后,得出N⁺离子最佳注量为1×1016cm-2,并筛选获得1株耐酸性α 淀粉酶产量较高的枯草芽孢杆菌突变株。该突变株所产α 淀粉酶的酶活可达207U/mL,遗传稳定性较好。     

3-甾酮-△^-脱氢酶的融合表达及纯化

3-甾酮-△^1-脱氢酶是甾体母核降解的关键酶。能催化3-甾酮化合物在C1.2位处脱氢，提高原有底物的生物活性。利用表达载体pET-30a，实现了简单节杆菌3-甾酮-△^-脱氢酶在大肠杆菌BL21（DE3）中的高效表达。利用SDS-PAGE分别对超声破碎后的上清和沉淀进行分析．并用分光先度法检测酶的活力。结果表明，表达出的蛋白主要以无活性的包涵体形式存在。利用Ni离子螯合层析的方法纯化融合蛋白，复性后的酶活比简单节杆菌提高了近10倍。     

中温α-淀粉酶基因的克隆及在枯草芽孢杆菌中的高效表达

利用高效表达载体pWB980,实现了Bacillus subtilis BF7658中温α-淀粉酶基因amy在B．subtilis DB403中的高效表达,活力达到770U／mL．经多步纯化,重组酶AMY的比活达到35．8U／mg,纯化倍数为1．7,获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品,经SDS—PAGE检测,重组酶AMY相对分子质量为4．8×10^4．对酶学性质进行分析,重组酶AMY的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6．0．     

山茱萸果汁RP-HPLC梯度洗脱优化实验研究

采用反相高效液相色谱(RP-HPLC),建立山茱萸果汁定性定量分析方法.经梯度洗脱优化出的色谱条件为:用Hypersil GOLD C18色谱柱,以体积分数为0.1%磷酸水溶液(含2%乙腈)为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱时间分别为0、8、12、26和55 min时,B体积分数(%)分别为0、0、8、8和26,流速为1.0 mL/min,柱温为35 ℃,波长为259 nm.采用中位数法筛选10批山茱萸果汁HPLC图谱的特征峰,确定15个共有峰为果汁定性分析的指标峰.以马钱苷吸收峰为参照,对果汁HPLC图谱中马钱苷进行定量测定,其线性范围为0.092～0.920 μg,平均回收率为99.06%(RSD=1.62%),马钱苷平均含量为2.162 mg/mL(n=10).     

低温碱性脂肪酶产生菌的筛选及产酶培养基的优化

以橄榄油为唯一碳源,从渤海湾盐碱地被油污染的土样中分离筛选出1株产低温碱性脂肪酶菌株34-5,初步酶学性质研究表明,该菌所产脂肪酶的最适温度为25℃,最适pH为9．6,该菌的16S rDNA基因序列与伯克霍尔德氏菌（Burkholderia）的同源性为99％摇瓶实验表明,该菌株最适产酶培养基为（g／L）;淀粉10,黄豆饼粉20,玉米浆20,K2HPO4 1,聚乙烯醇大豆油乳化液20．其最高酶活为6．87U／mL。     

3-甾酮-Δ~1-脱氢酶的融合表达及纯化

3-甾酮-Δ1-脱氢酶是甾体母核降解的关键酶,能催化3-甾酮化合物在C1,2位处脱氢,提高原有底物的生物活性。利用表达载体pET-30a,实现了简单节杆菌3-甾酮-Δ1-脱氢酶在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达。利用SDS-PAGE分别对超声破碎后的上清和沉淀进行分析,并用分光光度法检测酶的活力。结果表明,表达出的蛋白主要以无活性的包涵体形式存在,利用Ni离子螯合层析的方法纯化融合蛋白,复性后的酶活比简单节杆菌提高了近10倍。     

HPLC法测定闽派黄酒主要功能成分

闽派黄酒除了具备一般酒饮料的营养成分外,还具有一定的保健功能,适量饮用,有益健康。采用高效液相色谱法(HPLC)对市售的几种低端闽派黄酒的糖类(功能性低聚糖)、洛伐他汀及桔霉素进行检测分析,结果表明,闽派黄酒中总糖含量符合标准,同时还含有一定量的功能性低聚糖,不含洛伐他汀及桔霉素。     

耐酸性高温α-淀粉酶突变基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究

利用表达载体pET-30a,实现了去信号肽的耐酸性高温α-淀粉酶突变基因amyd及未突变的高温α-淀粉酶基因amy在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达。经多步纯化,重组酶AMY及AMYD的比活分别达到312.7U/mg蛋白和354.6U/mg蛋白,纯化倍数分别为75.90和83.83,获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品,经SDS-PAGE检测,AMY及AMYD酶分子质量均为63.5ku。重组酶AMY的最适温度80℃,最适反应pH为6.5,在温度低于90℃,反应pH5.5~7时,酶活较稳定。重组酶AMYD的最适温度80℃,最适反应pH为4.5,在温度低于90℃,反应pH4.0~6.5时,酶活较稳定。     

中空纤维膜过滤法高密度培养凝结芽孢杆菌TQ33

利用中空纤维超滤装置进行TQ3 3高密度培养 ,确定了采用过滤法进行高密度培养的工艺流程和参数。在对数后期 ,当乳酸质量浓度达到 15g/L时 ,开始过滤培养。过滤培养阶段持续 6h ,培养过程中平均过滤速率和培养基的流入速率为 1L/h ,平均稀释率为 0 4/h。对通过试验所确定的工艺进行高密度培养 ,最终菌体和芽孢浓度分别达到 1 6× 10 10 cfu/mL和 1 2× 10 10 cfu/mL ,是分批培养的 2 1倍和 3 7倍     

谢氏丙酸杆菌产V_(B12)原位分离发酵

VB12是谢氏丙酸杆菌的胞内次级代谢产物,其传统发酵方法是分批发酵。发酵液中丙酸的浓度达到10g/L时就会对菌体生长产生抑制作用。因此及时地将丙酸从发酵液中分离出去,将会提高菌体浓度,从而可以显著提高VB12产量。文中将无机陶瓷膜分离技术与谢氏丙酸杆菌发酵耦合,构建了一种新型原位分离发酵系统,通过活性炭吸附成功地将发酵体系中的丙酸分离出去,有效解除了丙酸对菌体生长的抑制作用,实现了VB12的高密度发酵,菌体干重由13.5 g/L提高到35.99 g/L,提高了1.67倍,VB12的产量由33.5 mg/L提高到63.1mg/L,提高了0.88倍。