牛凝乳酶原基因在大肠杆菌中的高效表达及活性检测

以实验室保存的携带凝乳酶原前体基因的重组载体pMD 19-T/bPPC为模板克隆凝乳酶原基因,经双酶切后与载体pET-30a连接得到重组载体pET-30a/bPC,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,采用SDS-PAGE检测目的蛋白表达情况。重组蛋白经变性/复性、DEAE-Sepharose Fast Flow纯化和自催化后检测凝乳活性。结果表明,重组凝乳酶原基因在大肠杆菌中高效表达,表达量占菌体总蛋白的68%,采用Arima K方法检测,其凝乳活力达到80 SU/mL。因此,通过大肠杆菌表达系统大量制备具有生物活性的重组牛凝乳酶原的策略是可行的,研究结果为弥补国内天然牛凝乳酶的短缺提供一种途径。     

“96．8”洪水后滹沱河整治工程任务

“96．8”洪水造成了自1963年以来滹沱河流域最大的洪涝灾害。今年8月上旬河道行洪区及泛内、外滩地均遭淹没．石家庄段南、北埝多处冲毁漫溢．其中四公村溢出流量约500m^3／S，安平段南大堤普遍漫水．因抢险及时未造成损失。饶阳故城段南大堤基底发生管涌，以致决口。其决口长度164m，分洪流量约700m^3／s。饶阳段旧南堤及行洪道的左、     

黑米、薏米、荞麦膨化粉的流变学性质研究

以优质的黑米、薏米、荞麦粉为原料，采用现代挤压膨化技术，研究黑米、薏米、荞麦粉挤压膨化粉的流变学性质的变化，探讨混合膨化粉流变学性质的变化对食品加工工艺的影响，为混合膨化粉的进一步应用，制定科学合理可行的加工工艺条件提供理论根据。     

谷物膨化混合粉的应用研究

以优质的黑米、薏米、荞麦粉为原料，采用现代挤压膨化技术制成膨化粉，将膨化粉按一定比例添加到小麦粉中，分别制作出营养保健价值很高的馒头、蛋糕、烤糕，研制出相应的馒头制作工艺、蛋糕制作工艺、烤糕制作工艺和工艺参数。     

重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体纯化条件的优化

目的优化重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件。方法将表达Gp41的大肠杆菌菌体高压匀浆破碎、洗涤分离提取包涵体,以不同pH值的低浓度变性剂溶解包涵体,稀释复性并用离子交换层析纯化目的蛋白,纯化产物经West-ernblot进行鉴定。结果以50mmol/LTris buffer、2mol/L,pH11.5尿素溶解的包涵体蛋白得到很好的溶解,目的蛋白复性得率大于40%。经纯化后,目的蛋白的纯度大于90%,且具有良好的反应原性。结论优化了重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件,为HIV-1Gp41抗原纯化工艺的放大提供了依据。     

植物乳杆菌LB-B1产细菌素发酵条件的优化

为提高分离自新疆传统发酵乳制品酸马奶中植物乳杆菌LB-B1产细菌素的能力,对其产细菌素的发酵条件进行了优化,分别研究了培养条件(时间、温度、培养基初始pH值)和培养基成分对细菌素产量的影响。通过单因素试验和正交试验,确定产植物乳杆菌LB-B1的最佳培养条件为37℃静置培养20h,培养基初始pH值为6~7;最佳培养基成分组合为葡萄糖30g/L、胰蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母粉5g/L、无水乙酸钠5g/L、柠檬酸铵2g/L、磷酸氢二钾2g/L、硫酸镁0.28g/L、硫酸锰0.25g/L、吐温-80 4mL/L。在优化发酵条件下,植物乳杆菌LB-B1产细菌素高达10240AU/mL,提高了3倍。     

1株产细菌素植物乳杆菌的筛选及所产细菌素的理化性质分析

从浙江省生产的一种火腿制品中分离筛选到1株具有抑菌活性的乳酸菌菌株LH-09,对单核细胞增生李斯特菌ATCC54003的生长具有良好的抑制作用.16SrRNA序列同源性分析鉴定乳酸菌LH-09为植物乳杆菌.在排除有机酸、过氧化氢的干扰后,确定该抑菌物质为蛋白类物质,即细菌素.理化性质分析表明细菌素LH-09具有较好的热稳定性、酸碱稳定性,可被人体内蛋白酶降解.N-羟甲基甲基甘氨酸-SDS-PAGE电泳确定细菌素LH-09的分子质量在2～6 kDa之间.     

利用种特异性PCR快速鉴定新疆酸马奶优势菌群

建立了一种快速准确鉴定酸马奶中乳酸菌优势菌群的种特异性PCR技术。据资料报道,酸马奶中已知的6种优势菌主要集中在植物乳杆菌、干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌3大类群。首先,针对属于同一类群内的两种优势菌设计2对种特异性引物,采用3组PCR实验验证引物的特异性。然后以酸马奶中提取的总DNA为模板,利用经验证的6对种特异性引物鉴定2份新疆酸马奶样品中的优势菌群。结果表明,新疆酸马奶中含有Lactobacillus(L.)helveticus,L.pentosus,L.plantarum,L.acidophilus和L.paracasei,与前人报道结果一致。本研究建立的种特异性PCR技术不仅能够快速鉴定酸马奶中乳酸菌优势菌群组成,同时可为其它发酵制品中3大类群乳酸菌鉴定提供有效的方法。     

干酪乳杆菌05—21在酸、胆盐和渗透压胁迫条件下的同源抗性和交叉抗性反应研究

对干酪乳杆菌在干酪生产和人体胃肠道环境中主要面临的酸、胆盐和渗透压3种胁迫条件下的同源抗性和交叉抗性进行研究.首先确定酸、胆盐、NaCl胁迫的亚致死水平和致死水平分别为pH值为5.0和pH值为3.5,质量浓度为0.5 g/L和3 g/L,20 g/L和180 g/L.同源抗性实验表明,酸诱导2h存活率可提高23倍,胆盐诱导提高25倍,NaCl诱导提高75倍.交叉抗性实验表明,酸诱导后茵体在胆盐、NaCl中存活率分别提高20倍和11倍:而NaCl诱导后茵体在胆盐中存活率提高250倍,但却不能诱导茵体的抗酸能力.稳定期茵体具有比对数期菌体更强的抗胁迫能力.实验结果为优化干酪生产工艺,提高干酪乳杆菌在胃肠道中的存活率提供了理论基础.     

不同片段HIV-1膜蛋白三聚体的构建、表达及其免疫原性

目的构建、表达不同片段1型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)的膜蛋白三聚体,并检测其免疫原性。方法以中国主要流行株HIV-1CRF_07 BC亚型基因为模板构建pFUSE-gp160重组质粒,以pFUSE-gp160为模板构建pFUSE-gp140FF、pFUSE-gp120FF、pFUSE-gp41FF、pFUSE-N55FF、pFUSE-N28FF重组质粒,将重组质粒分别转染293F细胞,转染120 h后,收获上清,经Ni-NTA superflow、nProtein A SepharoseTM4 Fast Flow及Superose 12 Prep Grade分子筛纯化后,分别进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。将各重组蛋白联合MF59佐剂经大腿肌肉注射免疫豚鼠,100μg/只,分别于第1、30及60天各免疫1次,初次免疫前7 d及末次免疫后第90天心脏采血,分离血清,ELISA法及假病毒系统分别检测血清特异性抗体效价及中和抗体滴度。结果质粒pFUSE-gp160、pFUSE-gp140FF、pFUSE-gp120FF、pFUSE-gp41FF、pFUSE-N55FF、pFUSE-N28FF经测序鉴定构建正确。各纯化蛋白的SDS-PAGE及Western blot鉴定均可见目的条带,gp120FF和gp140FF均可高通量表达,其表达量分别为6和2.5 mg/L,gp41FF、N55FF和N28FF蛋白的表达量均低于0.5 mg/L,纯化后的纯度均较高。gp140FF组和gp120FF组豚鼠血清抗体效价分别为3.2×105和5.33×105、中和抗体滴度分别为405和462,均显著高于其他组(P0.05)。结论 gp140FF和gp120FF能诱导豚鼠产生较强的体液免疫反应和中和抗体,本实验为HIV-1疫苗的研发提供了参考。