金银花提取物对冷却肉中假单胞菌黏附性的影响

研究冷却肉中假单胞菌的黏附能力及金银花提取物的降黏附效果。结果表明：从15 份市售冷却肉中分离 得到46 株假单胞菌,经16S rDNA结合VITEK 2系统鉴定为恶臭假单胞菌22 株,占47.8%;荧光假单胞菌10 株,占 21.7%;铜绿假单胞菌6 株,占13.0%;浅黄假单胞菌8 株,占17.4%;33 株（71.7%）假单胞菌具有黏附能力,具有 强黏附能力的菌株占17.4%,其中恶臭假单胞菌数量最多;金银花提取物能够降低4 种假单胞菌的黏附能力,且对 恶臭假单胞菌5-3和铜绿假单胞菌5-1作用效果更强,作用效果与金银花提取物质量浓度有关;金银花提取物质量浓 度高于最小抑菌质量浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）时,主要通过抑制菌体生长、减少胞外多糖产 生而降低假单胞菌的黏附能力;金银花提取物质量浓度低于MIC时,主要通过溶解菌体胞外多糖、增强通透性、降 低均匀度而降低假单胞菌的黏附能力。     

3种致病菌多重real-time PCR检测方法的建立及其在散装即食肉制品中的应用

建立一种同时快速检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的三重实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方法.以沙门氏菌invA基因、金黄色葡萄球菌Sa442基因和蜡样芽孢杆菌Cereolysin AB基因为靶基因设计引物和TaqMan探针...     

海河流域河湖健康评估探索与展望

河湖健康评估是河湖管理的重要手段,通过评估可以指导协调河湖开发利用与有效保护间的关系,有利于促进水生态系统健康发展。为河湖"定期体检"是流域机构履行"河流代言人"职责的重要体现。2010年起,海河流域先后选择滦河、白洋淀、漳河、岳城水库、于桥水库、永定河等重要河湖开展了健康评估试点工作。通过试点,探索了适宜海河流域的河湖健康评估技术体系。新形势下,如何利用河湖健康评估支撑河长制的落实,指导流域开展水生态修复,调动社会各界维护河湖健康的主动性,是今后需要进一步研究的问题。     

纤维素制备碳材料的工艺与机理研究

以纤维素作原料,利用水热碳化法,在一定的温度和压强下制备碳纳米材料。通过单因素实验考察了反应温度、反应时间对产物表观形貌的影响。采用扫描电子显微镜(SEM)、X射线衍射仪(XRD)及红外光谱仪(FT-IR)对所得碳材料的微观形貌和表面生成的官能团进行表征与测试。结果表明:纤维素水热碳化的起始温度为230℃,290℃为最佳碳化温度;当T=290℃时,反应时间的延长可增大碳颗粒的球化趋势,而对粒径影响较小;经水热碳化制备的碳材料表面含有羟基、羰基和羧基等官能团。     

4种动物源性成分多重real-time PCR检测方法的建立及其在驴肉制品检测中的应用

建立一种同时快速检测驴、马、猪及鸭源性成分的四重实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方法。分别以4种源性成分的Nad5、ATpase6、ATP8、cytb基因为靶基因设计特异性引物和Taq Man探针,以18S r RNA基因为内参基因,建立多重real-time PCR方法,并对该方法进行方法学验证,同时对不同掺入比例模拟样品、不同加工工艺模拟样品和实际驴肉样品进行检测。结果显示,该方法具有高通量、特异性强、灵敏度高等优点。当Ct值≤35.0时,方法对16种非目标源性具有良好特异性;灵敏度可检测到质量浓度为2×10^-4 ng/μL的模板DNA;对生肉的检出限为肉含量的0.001%,对熟肉制品的检出限为肉含量的0.01%;对100份实际样品进行检测,结果与标准方法一致,说明建立的多重real-time PCR法可用于肉及肉制品中常见掺假源性成分的检测。     

高通量微生物显色法快速检测动物源性食品中抗生素残留

建立一种采用高通量微生物显色法对动物源性食品中抗生素残留进行筛检,再结合高效液相色谱-串联质谱(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)法对阳性样品进行复测的分析检验方法。本方法利用嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus sterothermophilus)作为指示菌,制备96微孔板,可同时对不同类别多种抗生素进行联合检测。结果表明:该微生物显色法操作简便、快捷,成本低,结果准确且易判断,选取pH 7.4磷酸盐缓冲液进行提取,以反应液150μL、菌液50μL(初始OD_(600 nm)为0.4左右)、样品提取液100μL作为检测体系,检测效果最佳,对动物源性食品中氨基糖苷类检出限为60μg/kg,β-内酰胺类检出限为20~40μg/kg,大环内酯类检出限为60~80μg/kg,四环素类检出限为40~60μg/kg,符合国内外对抗生素残留限量的要求。对60份动物源性样品进行检测,其结果与HPLC-MS/MS复测结果一致,说明该微生物法稳定性良好,可用于动物源性食品中抗生素残留的初筛检测。     

金银花和蒲公英提取物对肉源性假单胞菌生物被膜的清除作用

为明确金银花和蒲公英提取物对假单胞菌生物被膜的清除效果,采用单因素实验确定假单胞菌生物被膜的最佳培养温度、培养时间和固定方法;在此条件下,采用结晶紫法结合扫描电镜研究金银花和蒲公英提取物在不同质量浓度、不同添加时间下对肉源性假单胞菌生物被膜的清除作用。结果表明,30 ℃培养24 h生物被膜测定值最高。提取物对生物被膜的清除效果随质量浓度的增加而逐渐增强(P<0.05),在生物被膜形成0 h加入的清除效果显著强于在24 h加入的清除效果(P<0.05)。当提取物浓度高于最小抑菌浓度(MIC)时,主要通过抑制菌体生长而清除生物被膜;当低于最小抑菌浓度时,主要通过破坏生物被膜立体结构而清除生物被膜。提取物破坏假单胞菌生物被膜结构,使生物被膜形成孔洞,从而清除生物被膜。本研究证明金银花和蒲公英提取物能够清除假单胞菌生物被膜,对肉的保鲜具有潜在应用价值。     

微生物显色法检测禽畜肉中混合抗生素残留

以微生物显色为原理,建立一种对畜禽肉中单一或配伍使用的抗生素进行联合初筛的高通量方法,并用色谱法对阳性样品进行验证。以大肠埃希氏菌（Escherichia coli,CICC 23657）作为指示菌,选取适当的抗生素残留提取方法,并通过单因素试验优化检测液配方及检测体系组成,最终实现对不同类别抗生素的联合检测。结果表明：选取柠檬酸-丙酮缓冲液进行提取,提取效率达到86%～88%,相对标准偏差为3.9%～4.3%;蛋白胨添加量为1.0 g/100 mL、溴甲酚紫指示剂添加量为2.0 mg/100 mL、pH值为7.2时,检测液显色效果较好;菌悬液初始吸光度（A600 nm）为0.4,检测液、菌液、样品提取液体积为150 μL∶50 μL∶100 μL时,检测效果最佳,对畜禽肉中喹诺酮类抗生素的检出限为60～180 μg/kg,氨基糖苷类检出限为60～140 μg/kg,喹诺酮类与氨基糖苷类配伍使用时的检出限为40～180 μg/kg;进一步用色谱法对50 份样品的初筛结果进行验证,无假阴性样品存在,说明该方法可用于畜禽肉中抗生素残留的初筛。     

高通量抗生素残留初筛试剂盒的研制及应用

以动物源性食品中常见的单一或配伍使用的抗生素为检测目标,开发基于微生物显色原理的高通量快速检测其残留的初筛试剂盒。选取嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus sterothermophilus CICC 10392）作为指示菌,优化其微胶囊包埋条件,并固定于96 微孔板中,结合前期研究成果制成可同时对禽畜肉中常见的4 类抗生素进行联合初筛的试剂盒,克服了因菌种活化耗时较长及液体菌种运输困难等问题。结果表明：以0.1 g/mL聚乙烯醇为载体、pH 6.0的硼酸-磷酸盐溶液为交联剂对初始吸光度（A600 nm）为0.8的指示菌进行包埋,其机械强度、细胞活性及检测效果最好;该试剂盒对四环素类检出限为40～60 μg/kg,氨基糖苷类检出限为60～120 μg/kg,大环内酯类检出限为60～100 μg/kg,β-内酰胺类检出限为20～40 μg/kg,四环素与氨基糖苷类配伍使用检出限为20～40 μg/kg,β-内酰胺类与氨基糖苷类配伍使用检出限为10 μg/kg,符合国内外对抗生素残留限量的要求;用色谱法对试剂盒检测的70 份样品进行验证,无假阴性存在,说明该试剂盒结果可靠,可用于动物源性食品中抗生素残留的初筛检测。