季铵盐壳聚糖及其纳米粒子作为基因载体的研究

评价N,N,N-三甲基壳聚糖盐酸盐(TMC)及其纳米粒子对质粒DNA(pDNA)的负载及保护能力,考察了其纳米复合物对人类肝癌细胞株(HepG 2细胞)的转染能力。通过复凝聚法制备TMC/pDNA纳米粒子,并采用透射电镜及原子力显微镜表征粒子形态和粒径;采用凝胶阻滞分析观察其对pDNA的保护情况;采用四噻氮唑盐(MTT)比色法测定细胞毒性;以Lipofectamine 2000转染试剂作为阳性对照,检测其对HepG 2细胞的转染活性;采用荧光倒置显微镜观察转染情况。结果表明负载pDNA的TMC纳米粒子多呈球形,粒径为100～300nm,能有效地包裹和保护基因不被DNaseⅠ酶消化;当TMC与pDNA的质量比为10∶1时,在48h达到最高的转染效率。     

季铵盐壳聚糖纳米荧光探针的制备及细胞渗入研究

将异硫氰酸荧光素(FITC)接枝到N,N,N-三甲基壳聚糖盐酸盐(TMC)的侧基上,制备了荧光标记的壳聚糖衍生物TMC-g-FITC.其水溶液与羧甲基壳聚糖(CMC)水溶液经凝聚复合,制备了TMC-g-FITC/CMC纳米粒子荧光探针.用激光散射仪和透射电镜表征了该纳米荧光探针的粒径、粒径分布、Zeta电位值和形态结构.结果表明,纳米粒子的粒径在150～360nm范围,粒径分布约为0.10,Zeta电荷值为正值.用MTT法检测了其细胞毒性,发现纳米粒子对细胞的抑制作用较弱,在实验浓度下细胞的抑制率均低于7%.通过激光共聚焦显微镜研究了TMC-g-FITC/CMC纳米粒子荧光探针对HepG2细胞的渗透和迁移过程:纳米粒子先是在细胞周围富集,然后逐渐渗入细胞的内部,最后直至进入细胞核.