抗DNA单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其抗体的鉴定

目的制备抗DNA单克隆抗体,用以建立特异、灵敏、简便的外源性DNA残留量测定方法。方法将小牛胸腺DNA与阳离子化的牛血清白蛋白通过Mannich反应连接成为完全抗原,免疫BALB/c小鼠得到的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,对抗体进行纯化、浓缩及鉴定。结果得到3株可稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,单抗的ELISA间接效价分别为1∶4×103、1∶8×104和1∶1×103;亚型分别为IgM/κ、IgM/λ和IgM/κ;亲和力常数分别为3.96×108、4.04×109和1.26×108L/mol;3株细胞分泌的单抗与ctDNA、DH5αDNA、GS115DNA和H.S.DNA均有较高的结合能力,而对RNA、BSA和酪蛋白结合较弱或不能结合;3株细胞分泌的单抗识别3个不同的抗原表位;可检出4ng/ml以上的DNA。结论成功制备了3株细胞分泌的抗DNA单抗,为外源性DNA残留量免疫测定方法的深入研究奠定了基础。     

条纹斑竹鲨鱼再生肝组织cDNA质粒文库的构建和鉴定

建立了鲨鱼肝脏的部分切除模型,获得了再生2 4h的鲨鱼肝组织,分离了再生肝组织的总RNA ,纯化了mRNA ,利用含BamHI酶切位点的Oligo(dT) 16 为引物合成cDNA第一链,通过末端转移酶在cDNA第一链3’末端加入Oligo(dC)尾,进而以Oligo(dT) 16 和含HindIII酶切位点的Oligo(dG) 10 为引物,通过LD PCR (long distance PCR)方法合成双链cDNA ,将双链cDNA经BamHI和HindIII双酶切,通过T4 DNA连接酶连接到经相同酶切的pUC19载体后构建成cDNA文库。对文库质量的分析结果表明,通过本方法构建的鲨鱼再生肝组织cDNA文库容量至少为4 .92×10 5个/ μgdscDNA ,重组率达96 .7%。对随机提取30个克隆的质粒进行分析,获得了其中2 5个插入片段的序列,未见重复序列,经与GenBank和dbEST数据库比对分析发现新基因在其中占较大的比例(76 % )。鲨鱼再生肝组织cDNA文库的成功构建为进一步通过差异显示技术筛选、克隆肝再生过程中差异表达的相关功能基因奠定了一个良好的基础。     

感染TMV烟草和未感染TMV烟草组织中可溶性蛋白质变化分析

自Singh等和Matters等报道了多种逆境因子(如高温、低温、高盐、干旱和病原菌等)可以抑制正常蛋白质的合成,诱导合成新的或增加合成另外一些蛋白质以来,人们已经在感染TMV烟草体内发现了十多种病原相关蛋白,它们都是一些分子量较低的蛋白质。PRs在植物体内的积累与植物的局部诱导抗性和系统抗性之间存在着密切的关系,本文对人工接种TMV、大田感染TMV、未感染TMV、转基因抗TMV的烟株以及SA诱导烟株中的可溶性蛋白质进行了分析和比较,探讨烟草中可溶性蛋白组分的变化与抗TMV的关系。