HIV-1中国流行株gp120基因在痘苗病毒中的表达及其与核酸疫苗的实验免疫研究

将HIV－1中国流行株gp120基因在痘苗病毒中进行表达,以期获得重组痘苗病毒,与核酸疫苗混合免疫,评价免疫效果,为艾滋病疫苗开发研制打下基础。将HIV－1中国流行株gp120基因片段插入到pJ38载体启动子下游,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒,SDS－PAGE、Western blot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫BALB／c小鼠,进行淋巴细胞转化实验、CTL、CD4＋CD8＋T细胞数目以及血清抗体等细胞免疫和体液免疫指标检测。结果获得的重组痘苗病毒vJ38pg120能够表达Gp120蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫,具有良好的免疫原性,其免疫效果以2rVV-DNA混合方式为最好。重组痘苗病毒vJ38gp120。     

HIV-1核心蛋白的表达与纯化

将编码人I型免疫缺陷病毒(HIV1)核心蛋白p24gag的基因序列克隆到原核表达载体pET28(b)中,高效表达了N,C端融合His·Tagp24蛋白,所表达的重组p24蛋白占菌体总蛋白的46%。在变性条件下,使用NiNTA亲和层析法纯化了p24蛋白,纯度为94%。菌体中及纯化、复性后的目的蛋白均能与抗HIV1p24单克隆抗体发生特异性反应。用纯化的p24蛋白免疫小鼠,4周时小鼠血清抗p24抗体效价达1∶400。实验结果表明:大肠杆菌表达的HIV1p24蛋白纯化后可用作HIV1检测试剂的原料。     

EHV-1_(CN)与IL-2基因共表达核酸疫苗诱导产生CTL的观察

目的 观察ＨＩＶ－１ＣＮ　ｇｐ１２０基因与ＩＬ－２基因共表达核酸疫苗质粒ｐＧＰＩＬ－２诱导产生ＣＴＬ。方法 脂质体介导共表达中国流行株ＨＩＶ－１Ｇａｇ－ｇｐ１２０基因与ＩＬ－２基因的核酸疫苗质粒ｐＧＩＬ－２转染ＢＨＫ－２１细 胞,以间接免疫光法鉴定其表达。取ｐＧＰＩＬ－２免疫鼠脾细胞,检测ｐＧＰＩＬ－２诱导的细胞毒性Ｔ细胞杀伤活性。 结果ｐＧＰＩＬ－２可有效地诱导ＣＩＬ的产生,并可杀伤ＨＩＶ－１ＣＮ嵌合基因转染的靶细胞。结论 为进一步设计中国流行株ＨＩＶ－１核酸疫苗提供了重要实验依据。     

HIV-2 env基因在重组痘苗病毒中的表达

以痘苗病毒复制非必需区血凝素（ＨＡ）基因为侧翼，将人Ⅱ型免疫缺陷病毒ｇｐ１２０和ｇｐ３６基因分别置于不同类型的自然型痘苗病毒复合启动子下游，构建了４种表达质粒，经同源重组和血凝素阴性空斑筛选，获得了４株重组痘苗病毒，经免疫荧光试验和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测证明，４株重组病毒均能表达目的蛋白。在重组病毒感染早期、晚期、不同株表达量略有不同，表达产物分子量分别约为５７ｋＤａ和４２ｋＤａ，具有良好的     

口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1基因和蛋白酶3C基因的克隆及序列分析

目的 对口蹄疫病毒（FMDV）衣壳蛋白前体P1基因和蛋白酶3C基因进行PCR扩增、克隆和序列分析，了解FMDV基因型与血清型的相关性及分子免疫机理，便于疫苗株的选择。方法 应用RT-PCR方法扩增了CC-1毒株的衣壳蛋白前体P1基因和蛋白酶3C基因，并将其克隆到pGEM-T easy载体上，分别构建含有P1基因和3C基因的两个重组质粒pGEMP1和pGEM3C，并进行核苷酸序列分析。结果 CC-1株与相同血清型毒株P1基因核苷酸序列和氨基酸序列存在较高的同源性，与不同血清型毒株P1基因氨基酸序列的同源性差异显著，而不同血清型毒株的蛋白酶3C基因氨基酸序列的同源性均在90%以上。结论 成功地克隆了FMDV P1区基因和蛋白酶3C基因，为选择口蹄疫病毒疫苗株提供了背景材料。     

口蹄疫病毒衣壳蛋自前体P1基因和蛋白酶3C基因的克隆及序列分析

［摘 要］目的 对口蹄疫病毒（FMDV）衣壳蛋白前体P1基因和蛋白酶3C基因进行PCR扩增、克隆和序列分析，了解FMDV基因型与血清型的相关性及分子免疫机理，便于疫苗株的选择。方法 应用RT－PCR方法扩增了 CC－1毒株的衣壳蛋白前体 P1基因和蛋白酶 3C基因，并将其克隆到pGEM-T easy载体上，分别构建含有P1基因和3C基因的两个重组质粒pGEMP1和pGEM3C，并进行核苷酸序列分析。结果CC-1株与相同血清型毒株P1基因核苷酸序列和氨基酸序列存在较高的同源性，与不同血清型毒株P1基因氨基酸序列的同源性差异显著，而不同血清型毒株的蛋白酶3C基因氨基酸序列的同源性均在 90％以上。结论 成功地克隆了 FMDV P1区基因和蛋白酶3C基因，为选择口蹄疫病毒疫苗株提供了背景材料。     

新城疫病毒F基因与传染性法氏囊病毒VP0基因在鸡痘病毒中共表达

目的 新城疫病毒（NDV）F基因和传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP0基因在鸡痘病毒中表达,以便研制新城疫和传染性法氏囊多价重组疫苗。方法 利用鸡痘病毒282E4株非必需区TK基因构建的表达载体PU-TA2,在已存在的复合启动子p7.5ATI下游同向插入F基因,反向插入复合启动子P7.5ATI,并在其下游反向插入VP0基因,构建由2个相同的复合启动子在相反方向分别表达F和VP0蛋白的PATI2-F-VP0表达载体。使其与鸡痘病毒282E4株共转染CEF细胞后,用BUDR法筛选重组病毒,通过间接免疫荧光法检测阳性重组病毒。用Western blot法检测F和VP0蛋白。结果 在重组病毒株中,用Western blot法可检测到F和VP0蛋白。结论 已成功地获得可同时表达F蛋白和VP0蛋白的重组鸡痘病毒。     

重组传染性法氏囊病病毒VP2/VP243基因表达及保护性和免疫原性

目的在重组鸡痘病毒中表达传染性法氏囊病毒 VP2/VP243基因,并研究表达产物的保护性和免 疫原性。方法以 FPV 282E_4株 TK基因为侧翼,分别将鸡法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV) VP2 和VP243目的基因克隆到牛痘病毒A型包涵体(ATI)和痘苗病毒P7.5复合型启动子下游,构建成2个重组表达质 粒,命名为pUTALacVP和pUTA LacVPO。用这2个质粒转染CEF细胞,用X-gal染色法筛选出2株重组病毒vUTA lacVP2和 vUTALacVP0。用这 2株病毒免疫 1周龄 SPF鸡,以常规疫苗为对照。结果 ELISA、SDS-PAGE和 Western blot表明表达产物可与IBDV特异性多克隆抗体反应,并诱导鸡保护性抗体。在使用vvIBDV攻击前,对照组抗体水 平显著高于实验组。但攻击5 d后,实验组抗体水平明显升高。结论vUTALacVP2和 VPO在 CEF细胞中实现了高 效表达,但重组疫苗的保护率低于常规疫苗。