L-1-13C-苯丙氨酸呼气试验在慢性肝病临床分期中的应用

用L-1-13C-苯丙氨酸对12例正常对照、8例慢性乙型肝炎G2S2期患者、12例肝硬化代偿期患者、12例肝硬化失代偿期患者进行6 h呼气试验,共采集气样24次,用气体同位素比值质谱仪检测气样中13CO2浓度,试验参数选用30 min3C排除速率13CER30、60 min累计13C排除率13Cum60、13CO2半排除时间T1/2.结果显示,所有受试者13C排除均呈单峰;T1/2在正常人、慢性肝炎患者、肝硬化代偿和失代偿患者之间差异有显著性(P＜0.05),而13CER30、13Ccum60仅在正常人肝硬化代偿和失代偿患者之间差异有显著性(P＜0.05);13CER30、13Ccum60、T1/2与除丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)外的部分临床常规肝功能血清学检查值存在不同程度的相关性.提示L-l-13C-苯丙氨酸呼气试验是一项安全、简便、定量、有效的肝功能检测手段,可用于慢性肝病的临床分期.     

HIV-1 HXB2株蛋白酶在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定

目的原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(Protease,PR),用于对HIV-1GagP2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选。方法根据HIV-1HXB2株PRDNA序列设计引物,用重叠延伸PCR方法合成使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体进行测序。将HIV-1PRDNA克隆至原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中进行诱导表达,用Ni-NTA亲和柱对表达蛋白进行纯化,SDS-PAGE鉴定,并用HIV阳性血清进行免疫反应性的鉴定。结果合成的使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经测序显示其编码氨基酸序列与原始序列完全一致。所构建的HIV-1PR原核表达质粒pQE30-pr,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为14000的HIV-1PR蛋白,纯化的目的蛋白浓度为7.74mg/ml。ELISA检测该蛋白与HIV阳性血清呈特异性反应。结论已成功合成并克隆了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经表达及纯化的HIV-1PR蛋白具有免疫学特性。     

L-1-13C-苯丙氨酸呼气试验在慢性肝病临床分期中的应用

用L-1-13C-苯丙氨酸对12例正常对照、8例慢性乙型肝炎G2S2期患者、12例肝硬化代偿期患者、12例肝硬化失代偿期患者进行6 h呼气试验,共采集气样24次,用气体同位素比值质谱仪检测气样中13CO2浓度,试验参数选用30 min3C排除速率13CER30、60 min累计13C排除率13Cum60、13CO2半排除时间T1/2.结果显示,所有受试者13C排除均呈单峰;T1/2在正常人、慢性肝炎患者、肝硬化代偿和失代偿患者之间差异有显著性(P＜0.05),而13CER30、13Ccum60仅在正常人肝硬化代偿和失代偿患者之间差异有显著性(P＜0.05);13CER30、13Ccum60、T1/2与除丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)外的部分临床常规肝功能血清学检查值存在不同程度的相关性.提示L-l-13C-苯丙氨酸呼气试验是一项安全、简便、定量、有效的肝功能检测手段,可用于慢性肝病的临床分期.     

L-[1-13C]苯丙氨酸呼气试验定量检测肝功能研究

为评价L-[1- 13C]苯丙氨酸呼气试验检测肝功能的可行性和有效性,健康自愿者、代偿期肝硬化患者和失代偿期肝硬化患者各10名,口服100mg L-[1- 13C]苯丙氨酸后进行呼气试验.应用气体同位素比值质谱仪测量服药前和服药后至360min各时间点气样中的13C丰度,得到了不同时间的13C的排除速率13CO2ERt (percentage 13C excretion rate) (% 13C剂量/h)和各时相内的累计13C排除率13Ccumt (percentage 13C cumulative excretion) (% 13C剂量).将呼气试验参数30 min 13C排除速率13CO2ER30和75min累计13C排除率13Ccum75在正常对照组、肝硬化代偿组、肝硬化失代偿组之间进行两两比较,并分别与各肝功能临床生化指标进行相关性分析.结果显示,13CO2ER30(肝硬化代偿组7.4% 13C剂量/h±1.0% 13C剂量/h;肝硬化失代偿组3.5% 13C剂量/h±1.1% 13C剂量/h;正常对照组12.1% 13C剂量/h±2.1% 13C剂量/h)和13Ccum75(肝硬化代偿组7.0% 13C剂量±1.1% 13C剂量;肝硬化失代偿组3.8% 13C剂量±1.0% 13C剂量;正常对照组10.6% 13C剂量±1.6% 13C剂量)在各组之间差异均具有显著性(P<0.001);13CO2ER30和13Ccum75与部分肝功能生化指标存在显著相关性(P<0.05).表明口服L-[1- 13C]苯丙氨酸呼气试验是一种简便、灵敏、特异、定量的肝功能即时检测方法;13CO2ER30和13Ccum75是有效的肝功能评价参数.