甘薯淀粉生产废液中糖蛋白提取的超滤数学模型

在前期采用无机陶瓷膜从甘薯淀粉生产的废液中进行超滤浓缩糖蛋白研究的基础上，建立了一个超滤数学模型，并由实验获得模型参数，模型预算的理论曲线和实验曲线拟合良好。     

甘薯糖蛋白SPG-1的分离纯化及其降血糖作用研究

经水溶提取、乙醇沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析等步骤，从广薯98中分离到甘薯糖蛋白组分SPG-1，经SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶过滤层析鉴定，为单一组分甘薯糖蛋白纯品。SPG-的糖含量为98．4％，蛋白舍量为1．6％，等电点为5．03。通过灌胃给药，研究了SPG-1对正常小鼠和四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖的影响，结果表明SPG-1对正常小鼠的血糖没有明显影响（p〉0．05），对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠具有明显（p〈0．01）的降血糖功能。     

P-糖蛋白基因疫苗的构建与鉴定

目的　制备P 糖蛋白基因疫苗。方法　利用PCR方法扩增编码人类P 糖蛋白多药耐药基因序列胞外区约 1kb片段 ,与真核表达载体pcDNA3进行定向重组 ,限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切反应及测序鉴定该重组基因疫苗 ,磷酸钙共沉淀法转染人类K5 62红白血病细胞 ,经G418筛选后 ,免疫组化分析该重组基因疫苗表达产物的抗原特异性。结果　构建了pcDNA3 MDR1重组基因疫苗。限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切分别显示 5 .4kb的载体片段及约 1kb的插入序列 ,测序 948个碱基中除 2个碱基突变外均与原序列排列相符。免疫组化方法证实细胞膜表面MDR1约 1kb片段的表达产物可被抗Pgp抗体识别。结论　构建的pcDNA3 MDR1重组基因疫苗可被市售的Pgp抗体特异性识别 ,具有Pgp抗原特异性     

O-糖链对猕猴桃糖蛋白抗氧化能力及构象的影响

糖基化是生物体内广泛存在的翻译后修饰,对蛋白质的结构和功能有重要影响,研究了O-糖链对猕猴桃蛋白性质的影响。采用乙醇浸提法提取猕猴桃糖蛋白CGp,通过β-消除反应去除猕猴桃糖蛋白CGp上的O-糖链,得到产物CGpp。CGp和CGpp经Sepharose CL-6b凝胶色谱柱分离纯化后分别得到Gp1、Gp2和Gp1p、Gp2p。之后测定了4种蛋白的OH自由基、DPPH自由基、ABTS自由基清除能力。使用傅里叶红外变换光谱法测定了O-糖链释放前后猕猴桃糖蛋白的二级结构,通过Peakfit拟合指认二级结构吸收峰,得到不同二级结构所占比例。结果表明:4种蛋白质均具有一定的清除OH自由基、DPPH自由基和ABTS自由基的能力,且随着浓度增大而增大,具有明显的量效关系;O-糖链释放后猕猴桃糖蛋白的ABTS自由基清除能力显著增强;β-折叠结构含量与OH自由基、DPPH自由基的清除能力呈正相关。     

肺部恶性肿瘤组织摄取~(99)Tc~m-MIBI与Pgp表达的相关性

用99Tcm-MIBI术中γ探测法探讨活体肺部恶性肿瘤组织对99Tcm-MIBI的摄取和肿瘤细胞P-糖蛋白(Pgp)表达间的关系。结果表明,T/NT≤2的肺部恶性肿瘤组织Pgp含量明显高于T/NT>2的肺部恶性肿瘤组织;Pgp含量多寡与病理类型无关;肺部恶性肿瘤组织对99Tcm-MIBI的摄取与Pgp表达呈明显负相关,即肿瘤细胞高度表达Pgp时,99Tcm-MIBI摄取较低。     

Con A亲和层析法在纯化糖蛋白中的应用

近年来,糖蛋白的结构分析作为其深入研究的关键手段,正越来越受关注。亲和层析法是蛋白质分离纯化的重要途径,在富集目标物中承担着不可或缺的角色。本文概述了外源凝集素Con A为配基的亲和层析在糖蛋白纯化中的应用。     

呈现埃博拉病毒包膜糖蛋白抗原表位重组病毒样颗粒的构建

目的构建呈现埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)包膜糖蛋白(glycoprotein,GP)抗原表位的病毒样颗粒(viruslike particles,VLPs)。方法通过EBOV GP抗原性预测,并结合其功能结构域分析获得潜在的B细胞表位,经基因重组将该抗原表位插入至乙肝核心抗原(HBcAg)的优势表位区域,SDS-PAGE法分析重组HBcAg抗原表位嵌合蛋白的表达。重组菌体破碎上清经硫酸铵沉淀和蔗糖密度梯度离心纯化后,通过电镜观察VLPs形态。将VLPs与Alum佐剂按1∶1的比例混合,经背部皮下免疫小鼠。ELISA及Western blot法检测小鼠血清的特异性。结果重组HBcAg抗原表位嵌合蛋白的相对分子质量约19 300,纯化后蛋白浓度为1.244 mg/ml,镜下可见其以VLPs形式存在。VLPs免疫小鼠血清可与GP发生特异性免疫反应。结论成功构建了呈现EBOV GP抗原表位的VLPs,其可有效诱导小鼠产生特异性免疫应答。本实验为EBOV基因重组疫苗的研究及特异性抗体的制备奠定了基础。     

用99Tcm-MIBI在体外评价肿瘤细胞多药耐药逆转剂逆转细胞多药耐药的效果

摘要 目的 通过99Tcm-MIBI细胞内摄取变化为手段探讨单独或低剂量联合应用多药耐药逆转剂逆转肿瘤细胞多药耐药的效果，期望为进一步解决临床恶性肿瘤化疗面临的问题提供实验依据。方法 人类髓系白血病K562细胞及其耐药细胞系K562/D(高度表达Pgp)各2×106个，分别加入99Tcm-MIBI 8MBq，观察不同时间不同浓度多药耐药逆转剂环孢菌素A(CsA 0.1～0.4μg/ml)和/或维拉帕米（Ver 2.5～10μg/ml）存在时，K562细胞及K562/D细胞对99Tcm-MIBI摄取变化。两种细胞系间及逆转剂前后间比较采用t检验，组间比较采用q检验。结果①不同浓度Ver或CsA存在时，K562细胞99Tcm-MIBI摄取略有增加，但差异无显著性（P＞0.05）。K562/D细胞加入不同浓度Ver及CsA后99Tcm-MIBI摄取均明显增加。但不同浓度Ver间及不同浓度CsA间，摄取增加的差异没有显著性（P＞0.05）。②2.5μg/ml Ver及0.1μg/ml CsA同时加入K562细胞系中，60min时99Tcm-MIBI摄取率为0.303±0.076，增加率为183%。接近单独应用Ver（10μg/ml）或单独应用CsA（0.4μg/ml）。结论 99Tcm-MIBI细胞内摄取变化可评价逆转剂作用下Pgp的功能变化，低剂量逆转剂联合应用能达到与单一较大剂量应用逆转剂相似的效果，为临床逆转Pgp介导的多药耐药提示新的信息。     

利用大肠杆菌生产N-糖蛋白和糖蛋白疫苗的研究进展

近年来,随着对空肠弯曲杆菌蛋白N-糖基化修饰系统的研究不断深入,通过关键酶PglB和外源载体蛋白的导入等,此系统在大肠杆菌中的重建成功完成。目前,已能初步利用大肠杆菌生产多种N-糖蛋白。此技术为糖蛋白疫苗的生产开辟了新的途径。此外,通过关键酶表达量的提高和糖基化位点和序列的选择等措施,大肠杆菌蛋白N-糖基化系统的糖基化效率有了进一步提高,同时改善N-糖蛋白的免疫效果的研究亦取得较大进展。这些都为大规模生产糖蛋白疫苗提供了保障。