调节性B细胞在自身免疫性溶血性贫血患者外周血中的表达及临床意义

目的: 探讨自身免疫性溶血性贫血（AIHA）患者外周血中调节性B细胞（Bregs）的表达及其在该病发病中的意义。方法:选择16例自身免疫性溶血性贫血患者和14例健康志愿者为研究对象，用流式细胞术分析外周血CD19+IL-10+调节性B细胞及CD19+CD24hiCD27+调节性B细胞的表达；ELISA方法检测培养上清液中IL-10的水平。结果:自身免疫性溶血性贫血患者外周血中CD19+IL-10+调节性B细胞、CD19+CD24hiCD27+调节性B细胞的表达分别为（1.27±0.39）％、（9.85±2.18）％，健康志愿者组分别为（2.92±0.71）％、（26.47±4.31）％，两组比较差异有统计学意义（P<0.05）；自身免疫性溶血性贫血患者细胞培养上清中IL-10的水平低于健康志愿者组（P<0.05）。结论:自身免疫性溶血性贫血患者外周血中CD19+IL-10+调节性B细胞及CD19+CD24hiCD27+调节性B细胞比例降低，提示调节性B细胞可能参与自身免疫性溶血性贫血的发病过程。     

升白丸急性毒性实验观察

中国辐射防护研究院附属医院中医科研制的治疗白细胞减少症新药——升白丸,经过几年的临床试用取得显著疗效。对该药的急性毒性实验观察结果报道如下。     

重组人白细胞介素-10在大肠杆菌中的表达及生物学活性分析

目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10),并检测其生物学活性。方法将IL-10基因重组到质粒pET11c中,转化BL21(DE),提取质粒,经酶切鉴定和测序分析;在25℃用低浓度的IPTG诱导表达,对包涵体IL-10稀释复性;经ELISA检测其含量,MC/9细胞增殖法检测其生物学活性。结果工程菌IL-10/pET11c/BL21诱导表达的目的蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,Westernblot鉴定证实为IL-10蛋白,两种形式的IL-10均具有一定的生物学活性。结论已成功地在大肠杆菌中表达了IL-10,为进一步纯化和制备IL-10的基因工程药物打下了基础。     

白细胞介素-10基因多拷贝表达盒的构建及在毕赤酵母中的表达

目的构建白细胞介素-10(IL-10)基因多拷贝表达盒,提高IL-10在毕赤酵母中的表达水平。方法体外构建重组表达载体αIL-10/pAO815,BamHⅠ和BglⅡ双酶切获得目的基因表达盒(AOX-αIL-10),再连接到BglⅡ酶切位点处,依次构建多拷贝重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815。从质粒pPIC9K上用NdeⅠ和SalⅠ双酶切获得Kan抗性基因,重组到多拷贝表达载体n(AOX-αIL-10)/pAO815上。重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815电转化毕赤酵母,PCR筛选含有IL-10基因的酵母转化子,甲醇诱导表达,对表达量高的转化子再次经重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan电转化,高浓度G418抗性筛选二次酵母转化子,使用甲醇诱导表达。ELISA测定IL-10含量,MC/9细胞测定IL-10活性。结果所构建的8拷贝表达盒的重组载体8(AOX-αIL-10)/pAO815和4拷贝表达盒4(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan,转化子分泌表达IL-10水平最高,为(8.25±1.65)mg/L,比活性为1.465×105U/mg。结论已成功构建了高拷贝表达盒,并提高了IL-10在毕赤酵母中的表达水平。     

含IL-2基因的乙型肝炎病毒DNA疫苗的构建及其免疫效果

目的构建含白细胞介素-2(IL-2)基因的乙型肝炎病毒DNA疫苗,并考察免疫效果。方法将微小病毒内部核糖体进入位点(Internal ribosomal entry site,IRES)基因克隆到质粒pVAX1载体多克隆位点处,再将乙肝病毒表面抗原(HB-sAg)基因和IL-2基因分别连接在IRES基因的两侧,构建出乙肝病毒DNA疫苗pHII。将pHII转染COS-7细胞,进行瞬时表达。大量提取质粒后,按0、2、4周程序免疫BALB/c小鼠,以pVAX1质粒为阴性对照,pVAX/HBsAg质粒为阳性对照。第1针免疫1周后开始眼眶采血,检测血清中HBsAg和HBsAb含量。第1针免疫13周后处死小鼠,用流式细胞仪检测其脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子数量。结果在转染pHII质粒的COS-7细胞上清液中检测到HBsAg和IL-2的表达。实验组和阳性对照组小鼠分别于第1针免疫2、4周后,在血清中检测出HBsAb,但阴性对照组未测出。以上3组均未检测出HBsAg。实验组与阳性对照组相比,产生抗体的时间提前2周,抗体阳转率提高2.5倍,产生抗体的量也提高了近3倍。实验组CD4+分子数量和CD4+/CD8+值均高于阳性对照组。结论乙肝病毒DNA疫苗pHII成功诱导出小鼠的免疫应答,其免疫效果明显优于不含分子佐剂的乙肝DNA疫苗。     

基于支持向量机的白细胞自动识别

考虑到支持向量机(SVM)在训练样本有限的情况下处理高维数据上的优势,鉴于白细胞多光谱图像数据维数高的特点,为提高白细胞识别的速度和精度,采用支持向量机对白细胞的多值分类问题进行了研究,设计并实现了核函数为二值径向函数(RBF)的分类器,实验结果表明,该分类器有效地解决了白细胞的识别速度和精度问题,识别率达到了89.02%.     

基于距离变换的改进分水岭算法在白细胞图像分割中的应用

在白细胞图像中,由于白细胞细胞核的存在,直接应用分水岭算法时,往往达不到较好的效果。本文提出一种结合EM聚类的改进分水岭算法。通过将EM聚类获得的图像中细胞核区域替换,然后使用基于距离变换的分水岭分割,确定白细胞区域。对距离变换后的图像采用形态学处理减少了细胞分割中的过分割现象。同时使用细胞核位置的先验条件,合并分水岭分割区域,进一步减小过分割的影响。本文方法提供一种新的将分水岭算法应用于白细胞分割的思路。同时实验证明,方法在分割精度上有着良好的表现。     

白细胞介素-2脂质体药物动力学的研究

~(125)I-IL－2脂质体及游离~(125)I-IL－2通过小鼠尾静脉给药后，观察其在主要脏器中的药物分布及血药浓度-时间曲线。结果表明，脾脏和肝脏对IL－2脂质体有较高的摄取，IL－2脂质体具有缓释作用；IL－2脂质体的血浆清除率明显低于单纯IL－2，其生物利用度明显提高。     

基于多证据的血液白细胞自动分类

对白细胞分类方法提出了一种基于形状特征学习的分类算法.该算法首先从细胞核中提取基于欧氏距离变换的不变矩特征和形态学特征;然后,所提取的特征可以实现对单核细胞、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞的分类;最后,提取灰度共生矩阵作为纹理特征,通过支持矢量机实现对剩余白细胞类别的分类.实验结果表明,该方法具有很好的分类准确率及较短的处理时间.