基于RPA-LFD法的多黏菌素耐药基因mcr-1可视化快速检测方法建立与应用

目的：建立一种快速、高效、可视化的细菌多黏菌素耐药基因mcr-1检测方法，为其基层检测的展开提供依据和便利。方法：利用重组酶聚合酶扩增结合胶体金侧向流试纸条技术(Recombinase polymerase amplification combined with a lateral flow dipstick,RPA-LFD)，辅以手持式胶体金读数仪；根据mcr-1基因保守序列设计合成一对特异性RPA引物，通过对反应条件和体系的优化，以及特异性试验、灵敏度试验、模拟食样试验和实际样品试验，成功建立了可视化定量检测细菌多黏菌素耐药基因mcr-1的RPA-LFD方法。结果：在引物浓度400 nmol/L，引物比例1:1时，该方法最佳反应条件为Mg²⁺浓度14.0 mmol/L，反应温度37℃，反应时间20 min；灵敏度好，标准曲线方程为y=0.117x+0.051，定量限为10¹～10⁸ copies/μL，检出限为10¹ copies/μL，比PCR法低一个数量级且模拟样品检出结果与PCR法一致。利...     

专访英国Clinical Design:十年磨一剑的iF金奖作品

尿液检测,是一项存在已久、应用广泛的医学诊断方式。但也许很少人意识到,无论是在穷乡僻壤的小型卫生诊所,还是一线城市的贵价私人医院,尿液检测一直采用的方法都是目测试纸匹配颜色来判断结果—这不禁让人感觉有点"落后"。在今年iF设计奖的75件金奖作品中,一件名为UTS尿液检测系统^TM的作品以其独特的设计语言与全新的尿检解决方案,刷新了人们对尿液检测方式的认知。     

基于直方图颜色特征的试纸识别新方法

通过分析大量试纸垫图片的颜色信息,建立直方图模型,提取了试纸垫图像的主色平均色调、主色平均饱和度、平均亮度、频度最高饱和度四个特征,并建立BP网络识别模型,实现了试纸的浓度的鉴别。提出的试纸垫识别方法模拟了人眼识别过程,提高了试纸识别效率与结果的客观性。     

玉米细菌性枯萎病菌纳米磁标记免疫层析检测试剂与试纸条

分别以粒径为50和100 nm的羧基化纳米磁珠,通过碳二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联法使磁珠与抗体偶联,制备出可特异性识别玉米细菌性枯萎病菌的两种纳米免疫磁珠试剂。基于双抗体夹心法,经实验条件优化,选用100 nm的羧基化纳米磁珠为磁标记探针,组装了玉米细菌性枯萎病菌磁标记免疫层析检测试纸条。该方法用于玉米种子中玉米细菌性枯萎病菌的检测,检出限为1.0×106CFU/m L,15 min内可通过肉眼判读结果,也可用超顺磁共振检测仪实现量化检测,具有简便、快速、现场化检测的优势。     

缓冲溶液性质演示实验方案的探讨

本文就pH计及pH玻璃复合电极在缓冲溶液缓冲性质的验证及演示教学作了初步探讨,并与pH试纸的运用作比较,以利明晰方法特点,拓宽学生视野,加深其对缓冲作用原理的认识,改进实验教学。     

水杨酸选择性检测试纸的制备与应用

利用水杨酸、聚甲基丙烯酸甲酯与乙二胺化聚甲基丙烯酸甲酯的分子间作用力,制备了水杨酸选择性检测试纸。分析了聚甲基丙烯酸甲酯溶液质量分数、吸附时间和pH值等对水杨酸选择性检测试纸检测性能的影响。研究结果表明:应用制备的试纸检测水杨酸溶液,其线性值为50~2 200μmol/L,检测限为48μmol/L。测定250μmol/L水杨酸溶液时,6次测定的相对标准偏差为2.86%。     

金标试纸条的三聚氰胺定量检测仪的研制

为了实现对乳制品中三聚氰胺的快速定量检测,研制了一种基于CMOS图像传感器的便携式金标试纸条定量检测仪.依据纳米金颗粒的吸收峰波长及CMOS器件的光谱响应,选择绿光LED作为系统照明光源,通过CMOS采集试纸条反应区域的光强分布得到检测带吸收特征峰曲线.利用特定算法对图像原始数据进行处理,从而有效降低了由于光电、生化和外界因素对系统检测的影响.建立被检测物浓度与检测带曲线特征值的函数关系用以确定样品中目标被测物的浓度.使用该金标检测仪对滴加有三聚氰胺标准样品的金标试纸条进行检测,在质量浓度为10⁵00ng/mL范围内具有良好的线性响应特性,相关系数R2>0.92.对同一金标试纸条各进行10次重复测量,变异系数小于2.5%,说明仪器具有响应快、高灵敏、便携等特点.     

试纸法快速检测茶叶中铅含量的研究

基于重金属与三苯甲烷类碱性染料显色反应的特征,以定量滤纸为纸基,孔雀石绿为显色剂,研制出一种快速检测茶叶中铅含量的试纸。结果表明,试纸最低检出限为30 mg/L,检测时间仅需5 min,保质期在30 d左右。用本试纸测定茶叶中的铅含量,并与分光光度法进行比较,结果大致吻合。此法具有成本低、操作简单快速、携带方便等优点,可用于茶叶以及其它食品中重金属铅的现场初步筛查。     

牛奶中黄曲霉毒素M1胶体金试纸条的研究

应用胶体金免疫层析技术,建立一种快速检测牛奶中黄曲霉毒素M1的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,单克隆抗体胶体金标记物的制备并冻干成微孔试剂,样品吸收垫和反应膜的制备,试纸条的组装。所研制的黄曲霉毒素M1快速检测试纸条的检测限为0.3μg/L,检测时间为10 min,假阳性率和假阴性率为0。试纸条使用简单方便,适合进行现场快速检测牛奶中残留的黄曲霉毒素M1。     

烟草靶斑病LFD-RPA快速检测方法的建立

烟草靶斑病是由立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)侵染引起的烟草叶部病害，近年来在我国部分省份发生严重，危害烟草生产。为开发烟草靶斑病的早期快速诊断方法，本研究根据该病原菌的内转录间隔区(ITS)，设计了重组酶聚合酶扩增技术相关引物Rs RPA-F3/R3，建立了一种靶斑病菌的重组酶聚合酶扩增结合侧流层析试纸条(LFD-RPA)检测方法。该方法能够在37℃，15 min内特异性地检测到R. solani(1.40×10² copies/μL)质粒DNA，与常规PCR灵敏度一致。在田间烟草靶斑病实时检测中，准确率达95.83%。本方法具有快速、简单、可视化等特点，为烟草靶斑病菌的田间快速诊断提供了技术支撑。