靶向抑制CDK4/6的肿瘤治疗基础研究与临床应用进展

周期蛋白依赖性激酶4/6(cyclin-dependent kinase 4/6,CDK4/6) 是一类丝氨酸/苏氨酸激酶,通过与细胞周期蛋白D（cyclin D）结合,调节视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)的磷酸化状态,Rb磷酸化后与E2F转录因子分离,释放的E2F可以自由激活一系列基因表达,参与DNA复制和细胞分裂,从而介导细胞G1/S期转换,影响细胞周期的进程。近年研究发现CDK4/6在多种肿瘤发生和发展过程中起着核心作用,已成为临床多种肿瘤治疗的重要分子靶点。本文将对CDK4/6与肿瘤的关系以及CDK4/6抑制剂临床应用的最新研究进展做一综述。     

Menin和CyclinD1在非特殊型浸润性乳腺癌中的表达及意义

目的:探讨非特殊型浸润性乳腺癌组织中Menin蛋白和细胞周期素D1(CyclinD1)表达的相关性,以及两者与乳腺癌淋巴结转移生物学行为和临床分期的关系,进而探讨Menin蛋白和CyclinD1在乳腺癌的发生及转移过程中的作用。方法:采用免疫组织化学SP法检测71例伴有或不伴有淋巴结转移的乳腺癌组织中Menin蛋白和CyclinD1的表达情况,然后研究其相关性。结果:Menin蛋白和CyclinD1在本研究乳腺癌癌组织中的表达阳性率分别为19.72%(14/71)和77.46%(55/71),两者表达存在负相关(r=-0.411,P<0.05)。Menin蛋白和CyclinD1表达与乳腺癌的TNM分期有关(P<0.05),但与乳腺癌患者的年龄和肿块大小无明显关系(P>0.05)。Menin蛋白和CyclinD1在存在淋巴结转移组的乳腺癌癌组织中,前者有淋巴结转移组阳性率低于无淋巴结转移组(P<0.05),而后者有淋巴结转移组阳性率高于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论:Menin蛋白和CyclinD1参与了乳腺癌的发生和发展,Menin蛋白的失活可能在乳腺癌发生及转移过程中起重要作用,而CyclinD1基因的过度表达也与乳腺癌的发生及转移有关。     

饮水消毒副产物二氯乙腈对HepG2细胞周期的影响

目的研究p53基因和chk1基因在饮水消毒副产物二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对HepG2细胞周期阻滞过程中的影响。方法以二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人肝癌细胞(Hep G2细胞)为对照组,分别以低、高浓度(50、400μmol/L)DCAN染毒Hep G2细胞24 h。采用碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞周期分布情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测p53基因和chk1基因mRNA表达的改变。结果与对照组比较,400μmol/L处理组G1期细胞比例明显减少,G2期细胞比例明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);400μmol/L DCAN作用于Hep G2细胞后下调了p53的表达,差异有统计学意义(P<0.05),而对chk1的表达没有影响。结论高浓度的DCAN能明显延长HepG2细胞的G2期,并可抑制p53的mRNA表达水平,但对chk1的mRNA表达水平无影响。     

HnRNP在肿瘤中的研究及进展

核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)是一类RNA结合蛋白,它们至少含有一个RNA结合区域。大量的研究表明hnRNP在DNA修复、RNA剪接、端粒延长、细胞信号转导、基因表达调控等许多方面都起到重要的作用。而一旦hnRNP的正常生理功能发生异常,在遗传、环境等因素作用下将导致许多疾病的发生,其中hnRNP与肿瘤的发生及发展之间的关系的研究最为广泛。hnRNP可调节基因表达、抑制细胞凋亡、促血管生成和增强肿瘤细胞的侵袭转移能力,在肿瘤的发生和发展中发挥着重要的作用。本文将从hnRNP的结构、功能及其与肿瘤发生发展关系的研究进展作一综述。     

利用基于扫描相机的荧光寿命成像显微技术研究细胞周期

利用基于扫描相机的荧光寿命成像显微系统,以细胞周期为模型,研究转染绿色荧光蛋白的HeLa细胞的荧光寿命。结果表明,处于周期内不同进程的细胞的荧光寿命为2.50~3.00 ns。处于分裂期的细胞的荧光寿命在1 h内从2.86 ns下降到2.82 ns;在DNA合成前期的8 h内,荧光寿命从2.82 ns下降到2.78 ns。荧光寿命的差异反映了细胞周期中核浆内大分子浓度的变化,对了解细胞周期的分子机制有一定的意义。     

三氧化二砷对T315I突变细胞株KBM5R细胞周期的影响

目的:探讨三氧化二砷(ATO)对T315I突变的伊马替尼(IM)耐药慢性粒细胞白血病(CML)细胞株KBM5R细胞周期的影响,为对抗CML患者的IM耐药性提供理论依据.方法:选择野生型KBM5细胞作为T315I点突变KBM5R细胞的阴性对照组,根据是否经过ATO处理将实验分为KBM5R细胞空白对照组、KBM5R细胞ATO处理组、KBM5细胞空白对照组和KBM5细胞ATO处理组.应用MTT法检测IM和ATO作用后KBM5和KBM5R细胞的增殖活性;流式细胞术检测ATO作用后KBM5和KBM5R细胞周期的变化;Western blotting法检测ATO作用后KBM5和KBM5R细胞周期调节相关蛋白P21和P27表达的变化.结果:IM作用后耐药组KBM5R细胞IC50与野生型KBM5细胞比较明显增高(P<0.01);不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0和8.0 μmol·L-1)ATO于不同时间点(24、48、72和96 h)作用于KBM5和KBM5R细胞,与空白对照组比较,ATO处理组细胞均表现为显著的增殖抑制,且随药物浓度增加或作用时间延长细胞的增殖抑制率显著增加(P<0.05);在相同的药物浓度和时间点,ATO对KBM5R细胞的增殖抑制作用强于野生型KBM5细胞(P<0.05);2.0、4.0和8.0 μmol· L-1 ATO作用细胞48 h后,KBM5和KBM5R细胞周期中G2/M期细胞所占比例均随药物剂量的增加而增加,且相同药物浓度时KBM5R细胞周期中G2/M期细胞所占比例与KBM5细胞比较差异无统计学意义(P>0.05);ATO作用KBM5和KBM5R细胞48 h后,2.0、4.0和8.0 μmol·L-1 ATO处理组与空白对照组比较细胞内P21和P27蛋白表达均增加,且随药物剂量增加而增加.结论:ATO通过上调P21和P27蛋白水平使KBM5R细胞周期阻滞于G2/M期,细胞周期阻滞是ATO抑制T315I点突变细胞株KBM5R增殖的原因之一.     

半夏泻心汤对胃癌SGC-7901细胞株细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:研究半夏泻心汤对胃癌SGC-7901细胞株细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:将半夏泻心汤分为半夏泻心汤低浓度组(0.125 g·L-1)、半夏泻心汤中浓度组(0.5 g·L-1)、半夏泻心汤高浓度组(2 g·L-1),按细胞凋亡检测试剂盒说明书及细胞DNA含量检测试剂盒说明进行,流式细胞仪检测样品,CELLQuest软件获取并分析数据。结果:半夏泻心汤能够增加SGC-7901细胞在G1期的比例,促进细胞凋亡,其中半夏泻心汤高浓度组优于半夏泻心汤中浓度(P<0.05),但半夏泻心汤低浓度对此没有作用。结论:一定程度半夏泻心汤可抑制细胞增殖,并有浓度依赖性,其机理可能与药物阻滞细胞至G1期和诱导细胞凋亡有关。     

重离子诱导人舌鳞癌细胞凋亡和Bax/Bcl-2蛋白表达的变化

探讨重离子辐照对人舌鳞癌Tb细胞的凋亡及Bax/Bcl-2蛋白表达的影响.采用0、0.5、1.0、2.0、4.0 Gy重离子束辐照人舌鳞癌Tb细胞,应用MTT法检测细胞存活,流式细胞技术检测细胞周期变化,Hoechst 33258/PI复染法观察Tb细胞凋亡形态,并采用Western-blot法检测Bax/Bcl-2蛋白表达情况.结果发现,Tb细胞经12C6+离子束辐照后存活率显著下降,呈剂量依赖性的生长抑制;Tb细胞呈现蓝色荧光浓集成团的凋亡形态,且凋亡比例随辐照剂量增加;G2/M期细胞百分数随照射剂量增加而增加(P＜0.05).Western-blot结果显示Bax蛋白表达水平随辐照剂量逐渐上升,但在4 Gy组其表达不再增高,Bcl-2蛋白在1.0、2.0、4.0 cy组随剂量增大呈下降趋势.以上结果提示重离子束辐照对Tb细胞有抑制作用,Bax/Bcl-2蛋白表达是重离子治癌的机制之一.     

藏灵菇嗜热链球菌胞外多糖对人结肠癌细胞的增殖抑制

探讨从藏灵菇中筛选的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)所产胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)对人结肠癌HCT-8细胞增殖的影响.采用CCK-8法测定EPS对HCT-8细胞生长的抑制率;形态学观察EPS对HCT-8细胞的杀伤作用;流式细胞术检测EPS对HCT-8细胞周期的影响.结果显示:EPS对HCT-8细胞增殖有明显的抑制作用,且呈时间.剂量依赖性;倒置显微镜下观察部分细胞脱壁、核碎裂、固缩,细胞悬浮坏死;细胞周期分析显示G1期细胞百分率增大.说明EPS通过直接杀伤人结肠癌HCT-8细胞,使细胞周期阻滞于G1期而抑制细胞增殖,从而发挥抗肿瘤作用.